目的:肺泡II型上皮細胞(alveolar epithelial type II cells,AECIIs)是肺組織中最關(guān)鍵的干細胞,在支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的恢復中起著重要作用。Yes相關(guān)蛋白(Yes-associated protein,YAP)作為Hippo信號通路下游關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄輔激活物,對各種干細胞生物學都有調(diào)節(jié)作用,可參與調(diào)節(jié)肺泡II型上皮細胞(AECIIs)的增殖和分化。YAP是關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)控多條細胞信號通路的傳導,而Wnt通路作為其中之一;而Wnt 3a/β-catenin介導的經(jīng)典信號通路,在維持肺泡形態(tài)結(jié)構(gòu)和肺泡上皮細胞增殖及轉(zhuǎn)分化方面充當關(guān)鍵的作用。BPD是肺處于囊性發(fā)育階段的早產(chǎn)兒常見的嚴重肺發(fā)育障礙,具有較高的病死率。病理上可表現(xiàn)出肺泡間隔增厚,肺泡結(jié)構(gòu)簡單化。那么YAP、Wnt3a和β-catenin在BPD病理條件下是否相關(guān),以及它們的調(diào)控機制是什么?方法:將正常分娩的新生大鼠(連同母鼠)于生后24h內(nèi)隨機分為模型組和對照組,模型組放入85%的氧氣中構(gòu)建慢性肺損傷模型,對照組置于空氣中,分別于...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 實驗材料與方法
    2.1 實驗試劑與儀器
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 實驗儀器
    2.2 研究對象
    2.3 實驗方法
        2.3.1 肺組織標本采集
        2.3.2 肺組織形態(tài)學
        2.3.3 細胞分離和培養(yǎng)
        2.3.4 細胞轉(zhuǎn)染
        2.3.5 免疫熒光雙染
        2.3.6 Western blot
        2.3.7 Real-time PCR
        2.3.8 免疫組化
        2.3.9 統(tǒng)計學分析
3 實驗結(jié)果
    3.1 肺形態(tài)學
    3.2 PCR、Western blot方法檢測SPC、AQP5 表達水平,通過檢測上皮細胞標記物基因表達水平的改變,評估肺組織損傷情況
    3.3 PCR、Western blot方法檢測肺組織中YAP、Wnt3a和β-catenin的表達水平,研究其在不同程度肺損傷中表達量的改變,探究其表達水平的變化與肺損傷間的關(guān)系
    3.4 免疫組織化學檢測YAP、β-catenin蛋白的表達,明確其在肺組織中主要表達位置,及其表達水平的改變與肺組織損傷的關(guān)系
    3.5 免疫熒光雙染檢測SPC、AQP5、YAP、β-catenin在肺上皮細胞內(nèi)的表達情況,明確其主要表達位置及其表達水平的改變
    3.6 在肺泡二型上皮細胞中YAP過表達和敲除的效
    3.7 YAP對 AECIIs增殖的影響
    3.8 YAP對 AECIIs向 AECIs轉(zhuǎn)分化的影響
    3.9 YAP通過β-catenin影響Wnt/β-catenin信號通路,但不改變Wnt3a的表達
    3.10 Wnt3a通過β-catenin影響Wnt/β-catenin信號通路,而不是通過改變AECIIs中 YAP的表達
    3.11 過表達Wnt3a和敲減Wnt3a逆轉(zhuǎn)了YAP對 AECIIs增殖和分化的影響
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3775899