目的:探討M2型丙酮酸激酶同工酶(PKM2)對(duì)新生缺氧缺血性腦病(HIE)小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的影響。方法:根據(jù)改良Rice-Vannucci法建立新生小鼠HIE模型,另設(shè)假手術(shù)組。建模24 h后麻醉小鼠并分離大腦組織,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法檢測(cè)腦梗死體積,Western blotting、免疫組化和免疫熒光檢測(cè)皮質(zhì)組織PKM2、裂解的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)的表達(dá),TUNEL染色檢測(cè)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。通過糖氧剝奪(OGD)實(shí)驗(yàn)和PKM2-siRNA轉(zhuǎn)染來評(píng)價(jià)PKM2在體外對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)方法測(cè)定存活細(xì)胞數(shù)。結(jié)果:HIE組小鼠的腦梗死體積比顯著高于假手術(shù)組(43.26%vs 0.71%)。與假手術(shù)組相比,HIE組小鼠大腦皮質(zhì)組織和神經(jīng)元中PKM2蛋白的表達(dá)水平顯著升高。HIE組小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的TUNEL陽(yáng)性率顯著高于假手術(shù)組(37.68%vs 8.95%);HIE組小鼠大腦皮質(zhì)中凋亡相關(guān)蛋白cleaved ca...

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)1
        1.1.1 小鼠HIE模型建立
        1.1.2 2,3,5- 氯化三苯基四氮唑(TTC)染色
        1.1.3 Western blotting分析
        1.1.4 免疫組化染色
        1.1.5 免疫熒光染色
        1.1.6 TUNEL染色
    1.2 實(shí)驗(yàn)2
        1.2.1 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的培養(yǎng)
        1.2.2 糖氧剝奪(OGD)實(shí)驗(yàn)
        1.2.3 PKM2- siRNA轉(zhuǎn)染
        1.2.4 3- (4,5- 二甲基噻唑- 2)-2,5- 二苯基四氮唑溴鹽(MTT)實(shí)驗(yàn)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié) 果
    2.1 TTC染色分析HIE建模后小鼠的腦梗死體積
    2.2 HIE小鼠大腦皮質(zhì)組織和神經(jīng)元中PKM2蛋白的表達(dá)
    2.3 HIE小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的凋亡情況及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2.4 PKM2對(duì)小鼠皮質(zhì)相對(duì)活神經(jīng)元數(shù)的影響
    2.5 PKM2對(duì)小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用
3 討 論



本文編號(hào)：3769813