[目的]研究成熟體之外的蛋白序列對(duì)肺表面活性蛋白B（SP-B）分布和表達(dá)的影響。[方法]將人sp-b（1-381）、sp-b（1-279）、sp-b^M（201-279）構(gòu)建到真核載體pEGFP-C1上,轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞后采用熒光顯微鏡檢測(cè)各SP-B蛋白的表達(dá)分布。將sp-b截?cái)嗷驑?gòu)建到原核載體pGEX-4T-2上轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3）中,通過(guò)異丙基硫代-β-D-半乳糖苷誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),再過(guò)親和層析純化。[結(jié)果]GFP-SP-B（1-381）蛋白均勻分布于A549細(xì)胞質(zhì),缺失C端非成熟體的GFP-SP-B（1-279）表達(dá)分布明顯發(fā)生改變,缺失N、C端非成熟體的GFP-SP-B^M蛋白分布與GFP-SP-B（1-279）類似;重組表達(dá)并純化了分子量約為39 kDa的可溶性蛋白GST-SP-B（265-381）。[結(jié)論]非成熟序列可改變成熟體SP-B^M在A549細(xì)胞中的表達(dá)和分布; GST-sp-b（265-381）重組質(zhì)粒可在大腸桿菌BL21中高效表達(dá)分子量約為39 kDa的可溶性蛋白。 

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【部分圖文】：

前體蛋白SP-B生物信息分析

SP-B片段蛋白在A549細(xì)胞中的表達(dá)分布

SP-B片段蛋白的原核表達(dá)和純化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肺表面活性物質(zhì)治療急性呼吸窘迫綜合征研究現(xiàn)狀[J]. 李科純,錢素云,曾健生.  中國(guó)實(shí)用兒科雜志. 2018(06)
[2]SP-B外顯子4（T131I）位點(diǎn)與蒙古族新生兒呼吸窘迫綜合征相關(guān)性研究[J]. 胡亞楠,張亞昱,劉春麗,劉春枝,梅花,王晶,新春.  臨床兒科雜志. 2016(11)
[3]線粒體自噬受體Bnip3的載體構(gòu)建及蛋白表達(dá)純化[J]. 張玲莉,張星亮.  生物技術(shù). 2015(04)

碩士論文
[1]肺表面活性蛋白B前肽proSP-B的重組表達(dá)及抗菌活性研究[D]. 劉欽.重慶理工大學(xué) 2017
[2]肺表面活性蛋白SP-B定位及模擬肽生物活性初步研究[D]. 王鵬.重慶理工大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3731672