應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制手足口病重要病原體的基因表達與復(fù)制研究
發(fā)布時間:2022-10-09 15:00
手足口病(Hand, foot, and mouth disease, HFMD)主要發(fā)病于5歲以下兒童,其主要癥狀為兒童的口腔黏膜、手和腳上出現(xiàn)水皰疹。大部分手足口病發(fā)病可自愈,少數(shù)發(fā)病可并發(fā)急性腦膜炎、腦炎和急性心肌炎甚至死亡,是近年來嚴重危害我國兒童健康的丙類法定報告?zhèn)魅静?目前尚無特效治療藥物。手足口病可由多種小RNA病毒科人腸道病毒屬的病毒引起,包括柯薩奇病毒內(nèi)的多種血清型(Coxsackievirus A16、A4、A5、A9、A10、B2、B5)、腸道病毒71型(Enterovirus71,EV71)以及部分?刹《荆‥cho virus)。其中,腸道病毒71型(EV71)以及柯薩奇病毒A16型(CA16)是手足口病的兩大最主要的病原體,在多次爆發(fā)的手足口病流行中均占主導(dǎo)地位。EV71感染除手足口病外可致無菌性腦膜炎、腦炎和脊髓灰質(zhì)炎樣的麻痹性疾病等多種與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病并引起兒童的死亡。CA16感染癥狀較EV71感染輕,一般不引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病,但卻可能與心肌炎、心包炎密切相關(guān),并引起低齡兒童的死亡。 RNA干擾(RNA interference, RNAi),是...
【文章頁數(shù)】:127 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
第一章 相關(guān)研究背景及進展
一、手足口病的流行及防治概況
1、國外流行概況
2、國內(nèi)流行概況
3、防治概況
二、柯薩奇病毒A16(Coxsackievirus A16,CA16)型研究進展
1、病毒的分子結(jié)構(gòu)
2、病毒基因組結(jié)構(gòu)
3、病毒基因組的編碼產(chǎn)物及其功能
4、病毒的感染與繁殖
三、腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)研究進展
1、病毒的分子結(jié)構(gòu)
2、基因組結(jié)構(gòu)
3、病毒的感染與繁殖以及病毒基因組的轉(zhuǎn)錄和表達
四、RNA干擾(RNA interference,RNAi)研究進展
1、RNAi理論研究進展
2、RNAi技術(shù)的應(yīng)用
3、RNAi在抗病毒研究中的應(yīng)用
第二章 手足口病重要病原體柯薩奇病毒A16型(CA16)和腸道病毒71型(EV71)中國分離株全基因組序列的測定及分析
一、前言
二、材料與方法
1、實驗材料
2、實驗方法
三、實驗結(jié)果與分析
1、病毒株的獲得以及接種細胞后的典型CPE
2、病毒基因組cDNA片段的獲得
3、病毒基因組cDNA片段的測序結(jié)果
4、病毒基因組RNA序列的拼接以及序列分析
四、結(jié)論
第三章 抑制柯薩奇病毒A16型(CA16)復(fù)制的小干擾RNA(siRNAs)的快速篩選
一、前言
二、材料和方法
1、實驗材料
2、實驗方法
三、結(jié)果與分析
1、GeneBuster siRNAs表達質(zhì)粒的構(gòu)建
2、融合siRNAs靶標基因報告質(zhì)粒的構(gòu)建
3、雙熒光素酶分析系統(tǒng)對siRNA干擾效率的測試和篩選
4、細胞中siRNAs表達載體對CA16 strain Shzh05-1的抑制作用
四、結(jié)論
第四章 抑制腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)復(fù)制的小干擾RNA(siRNAs)的快速篩選
一、前言
二、材料和方法
1、實驗材料
2、實驗方法
三、結(jié)果與分析
1、RD-A細胞轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的Stealth siRNA效率的摸索
2、化學(xué)合成的Stealth siRNA在細胞水平抑制EV71病毒復(fù)制的研究
3、siRNAs在細胞水平抑制EV71病毒復(fù)制的劑量依賴關(guān)系
4、siRNAs抑制不同EV71分離株的效果對比
四、結(jié)論
第五章 研究總結(jié)
參考文獻
攻博期間發(fā)表的科研論文
致謝
本文編號:3688851
【文章頁數(shù)】:127 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
第一章 相關(guān)研究背景及進展
一、手足口病的流行及防治概況
1、國外流行概況
2、國內(nèi)流行概況
3、防治概況
二、柯薩奇病毒A16(Coxsackievirus A16,CA16)型研究進展
1、病毒的分子結(jié)構(gòu)
2、病毒基因組結(jié)構(gòu)
3、病毒基因組的編碼產(chǎn)物及其功能
4、病毒的感染與繁殖
三、腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)研究進展
1、病毒的分子結(jié)構(gòu)
2、基因組結(jié)構(gòu)
3、病毒的感染與繁殖以及病毒基因組的轉(zhuǎn)錄和表達
四、RNA干擾(RNA interference,RNAi)研究進展
1、RNAi理論研究進展
2、RNAi技術(shù)的應(yīng)用
3、RNAi在抗病毒研究中的應(yīng)用
第二章 手足口病重要病原體柯薩奇病毒A16型(CA16)和腸道病毒71型(EV71)中國分離株全基因組序列的測定及分析
一、前言
二、材料與方法
1、實驗材料
2、實驗方法
三、實驗結(jié)果與分析
1、病毒株的獲得以及接種細胞后的典型CPE
2、病毒基因組cDNA片段的獲得
3、病毒基因組cDNA片段的測序結(jié)果
4、病毒基因組RNA序列的拼接以及序列分析
四、結(jié)論
第三章 抑制柯薩奇病毒A16型(CA16)復(fù)制的小干擾RNA(siRNAs)的快速篩選
一、前言
二、材料和方法
1、實驗材料
2、實驗方法
三、結(jié)果與分析
1、GeneBuster siRNAs表達質(zhì)粒的構(gòu)建
2、融合siRNAs靶標基因報告質(zhì)粒的構(gòu)建
3、雙熒光素酶分析系統(tǒng)對siRNA干擾效率的測試和篩選
4、細胞中siRNAs表達載體對CA16 strain Shzh05-1的抑制作用
四、結(jié)論
第四章 抑制腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)復(fù)制的小干擾RNA(siRNAs)的快速篩選
一、前言
二、材料和方法
1、實驗材料
2、實驗方法
三、結(jié)果與分析
1、RD-A細胞轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的Stealth siRNA效率的摸索
2、化學(xué)合成的Stealth siRNA在細胞水平抑制EV71病毒復(fù)制的研究
3、siRNAs在細胞水平抑制EV71病毒復(fù)制的劑量依賴關(guān)系
4、siRNAs抑制不同EV71分離株的效果對比
四、結(jié)論
第五章 研究總結(jié)
參考文獻
攻博期間發(fā)表的科研論文
致謝
本文編號:3688851
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