目的探討自噬與Wnt信號(hào)通路在神經(jīng)缺氧缺血損傷中是否存在相互作用及其互相影響的機(jī)制。方法選取懷孕14~15天的SD大鼠,取胎鼠,分離皮層,進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),6~8天后免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)元。將細(xì)胞分為對(duì)照組和處理組,按照分組（1,6,12,24h）進(jìn)行相應(yīng)時(shí)間的糖氧剝離處理。分別在（1,6,12,24h）收集細(xì)胞,蛋白免疫印跡法（Western blot）測(cè)定LC3II/LC3I、P62、Beclin-1、Wnt1、Wnt3a、β-Catenin的蛋白水平表達(dá);選用處理12 h組作為干預(yù)時(shí)間點(diǎn),予自噬激動(dòng)劑雷帕霉素（Rapamycin）和自噬抑制劑3-MA處理,檢測(cè)Wnt1、Wnt3a、β-Catenin蛋白表達(dá)。結(jié)果1.隨著糖氧剝離造模缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),HIF-1α表達(dá)量逐漸增加。說(shuō)明隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),皮層神經(jīng)元的缺氧缺血性損傷程度加重。缺氧時(shí)間達(dá)24h時(shí),HIF-1α表達(dá)量最高。2.Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),LC3II的表達(dá)隨著糖氧剝離時(shí)間的延長(zhǎng),逐漸增多;Beclin-1的表達(dá)與糖氧剝離時(shí)間呈正相關(guān);p62的表達(dá)隨著糖氧剝離時(shí)間的延長(zhǎng),逐漸減少。表明在糖氧剝離誘導(dǎo)的缺氧... 

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
縮略詞表
第一章 緒論
第二章 胎鼠皮層神經(jīng)元的培養(yǎng)及鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        2.2.2 大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)
        2.2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)元
    2.3 結(jié)果
第三章
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 模型建立
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        3.2.3 蛋白質(zhì)提取
        3.2.4 蛋白電泳
        3.2.5 轉(zhuǎn)膜
        3.2.6 抗體孵育
        3.2.7 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)
        3.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 缺氧轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)與糖氧剝奪的時(shí)間依賴關(guān)系
        3.3.2 缺氧缺血損傷程度對(duì)皮層神經(jīng)元細(xì)胞自噬的影響
        3.3.3 缺氧缺血神經(jīng)損傷對(duì)Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    3.4 討論
第四章
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 測(cè)定Wnt信號(hào)通路在皮層神經(jīng)元缺氧缺血損傷過程中蛋白表達(dá)
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        4.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]線粒體自噬對(duì)新生大鼠缺氧缺血腦損傷的影響[J]. 李明熹,屈藝,母得志.  中國(guó)當(dāng)代兒科雜志. 2017(02)
[2]新生兒缺氧缺血性腦病發(fā)病危險(xiǎn)因素病例對(duì)照研究[J]. 陳劍.  中國(guó)婦幼保健. 2017(04)
[3]新生兒缺氧缺血性腦病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 魯旭,姜泓,張淵韜.  新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2016(10)
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[6]缺血性腦損傷中的自噬——研究進(jìn)展與挑戰(zhàn)[J]. 張翔南,陳忠.  中國(guó)科學(xué):生命科學(xué). 2014(04)
[7]Crohn’s disease-Defect in innate defence[J]. Michael Gersemann,Jan Wehkamp,Klaus Fellermann,Eduard Friedrich Stange.  World Journal of Gastroenterology. 2008(36)



本文編號(hào)：3660098