20世紀(jì)80年代后期鼻病毒學(xué)研究取得了重大進(jìn)展,病毒生命周期中的幾個(gè)重要事件基本清晰,為進(jìn)一步研究鼻病毒的生物特性及致病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。人鼻病毒是急、慢性呼吸道感染疾病中最常分離到的病原體,也是人類普通感冒的主要致病因素。人鼻病毒在全球范圍內(nèi)廣泛流行,對(duì)于嬰幼兒和患有呼吸道基礎(chǔ)疾病的易感人群,鼻病毒感染后可能會(huì)出現(xiàn)較為嚴(yán)重的后遺癥,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,給家庭和社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),因此對(duì)鼻病毒的研究越來越受到人們的重視。人鼻病毒流行病學(xué)研究是監(jiān)測(cè)人鼻病毒的一個(gè)重要手段,基因特征分析有助于人鼻病毒的檢測(cè)和流行病調(diào)查,以分析人鼻病毒的來源和傳播途徑。目的研究目前我國(guó)北京地區(qū)呼吸道感染嬰幼兒人鼻病毒流行狀況和基因特征。分析鼻病毒在中國(guó)北京地區(qū)的流行情況,以了解流行現(xiàn)狀,探討流行規(guī)律和基因特征,發(fā)現(xiàn)人鼻病毒發(fā)病相關(guān)的危險(xiǎn)因素,為我國(guó)急性病毒性呼吸道感染的預(yù)防和控制積累并豐富病原學(xué)和流行病學(xué)基礎(chǔ)資料,同時(shí)為鼻病毒的預(yù)防和治療提供有效地科學(xué)依據(jù)。方法從2008年4月到2010年9月,北京兒童醫(yī)院收集427位急性呼吸道感染患兒的鼻咽分泌物標(biāo)本,用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time ... 

【文章來源】：泰山醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Real-timeRT-PCR擴(kuò)增條件6）對(duì)照設(shè)置

圖 2 RT-PCR 擴(kuò)增條件6 PCR 產(chǎn)物的檢測(cè)和鑒定6.1 制備 1.7%TAE 瓊脂糖凝膠1）取 100ml 電泳緩沖液（1×TAE）加入到干凈的三角瓶中，再加入 1.7g 瓊粉末，輕輕搖動(dòng)三角瓶，使瓊脂糖微粒呈均勻混濁狀態(tài)；2）微波爐高溫加熱 2~3 次，每次 2min 左右，使瓊脂糖熔化；3）熔化的瓊脂糖自然冷卻到 60℃左右，倒入已準(zhǔn)備好的膠床中，凝膠厚度約.3~0.5cm；4）室溫下靜置，凝膠固化；6.2 電泳分析1）將已經(jīng)聚合的 1.7%的瓊脂糖凝膠（帶有膠床）放在電泳裝置上；2）向電泳糟中加入電泳緩沖液（1×TAE），緩沖液的量以超過凝膠表面 1~2m宜；

圖 3 標(biāo)記反應(yīng)條件 標(biāo)記反應(yīng)產(chǎn)物純化）稱量 2.7g 葡聚糖凝膠 Sephadex G-50 粉末，放在 1 支干凈的 50ml 離心中加入去離子水至 50ml。充分混勻后，室溫靜置 1h，使之充分水化；）向每一支 CENTRI-CEP 柱中加入混勻的葡聚糖凝膠 Sephadex G-50 混，靜置 10 分鐘；）加壓，使過多的水分從 CENTRI-CEP 柱的底部流出；）將 CENTRI-CEP 柱放在 2ml 收集管上，3000rpm，室溫下離心 2min；）將 CENTRI-CEP 柱放在 1.5ml 干凈的離心管上，向凝膠的斜面中央加20μl；）3000rpm，室溫下再次離心 2min；）收集離心管底的純化后的標(biāo)記產(chǎn)物。0 序列測(cè)定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鼻病毒的研究現(xiàn)狀[J]. 李軍,朱啟镕.  中華兒科雜志. 2005(01)



本文編號(hào)：3522238