研究背景復(fù)雜型先心病大部分為紫紺型先心病,是嬰幼兒最常見(jiàn)的先天性畸形,主要由心臟任何水平的右向左分流引起的,慢性缺氧是其共同的病理生理過(guò)程。長(zhǎng)期的臨床研究發(fā)現(xiàn),雖然紫紺型先心病患者的心臟被低氧血液長(zhǎng)期灌注,但是仍可以抵御心臟外科手術(shù)所致的缺血缺氧,且很少發(fā)生心力衰竭,提示慢性缺氧可誘導(dǎo)心臟產(chǎn)生代償性的適應(yīng),而這種變化將會(huì)對(duì)心肌細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。因此,深入探討心肌細(xì)胞在慢性缺氧條件下的代償機(jī)制,將有助于改進(jìn)心肌保護(hù)策略,提高先心病的臨床診治水平。MicroRNAs （miRNAs）是一種進(jìn)化上高度保守的短鏈非編碼RNA,可誘導(dǎo)靶基因mRNA降解以及翻譯抑制,進(jìn)而發(fā)揮調(diào)控蛋白表達(dá)的功能。在心肌細(xì)胞中,多種miRNAs被報(bào)道參與了心肌病理生理過(guò)程,并且與慢性缺氧保護(hù)密切相關(guān)cmiRNA-138（miR-138）是最近研究的較為熱門的miRNA之一。在心臟發(fā)育中,miR-138起到了關(guān)鍵性調(diào)控作用。一旦miR-138表達(dá)降低,將會(huì)出現(xiàn)不同程度的心室肌形態(tài)異常以及心臟功能受損。同時(shí),miR-138還被發(fā)現(xiàn)與缺氧相關(guān)。缺氧可誘導(dǎo)miR-138表達(dá)上調(diào),而這種改變能夠促進(jìn)缺氧細(xì)胞的增殖,提示miR-... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３?ｍｉＲ－１３８在紫巧巧先病患者屯肌中的表達(dá)顯若高于非紫巧組??２．２．２?ｍｉＲ－１３８慢性缺氧也肌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)??

ｍｉＲ－１３８的表達(dá)量明思上升，為ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ組的９８倍（＃／？＜０．０５），而ａｎ化ｇｏｍｉｒ組的??ｍ化－１３８表達(dá)量則顯著下降，而ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ組的５．９％（＊／７＜０．０５），提示轉(zhuǎn)染效果較??好，沉默及過(guò)表達(dá)ｍｉＲ－１３８均達(dá)到了預(yù)期效果（圖１－５）。??２．４．２?ｍｉＲ－１３８對(duì)細(xì)胞調(diào)ｔ的影響??（１）將Ｈ９Ｃ２必肌細(xì)胞賈于缺氧脾箱中培養(yǎng)７２ｈ，Ｗ建立慢性缺氧必肌模型，而常??氧組細(xì)胞則置于普通細(xì)胞脾箱內(nèi)培養(yǎng)同等時(shí)間。在缺氧條件下，分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行ｍｉＲ－１３８??抑制及過(guò)表達(dá)處理，設(shè)立ａｇｏｍｉｒ組、ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ組、ａｎｔａｇｏｍｉｒ組及ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ組。通??過(guò)普通細(xì)胞顯微鏡觀察可見(jiàn)，當(dāng)屯、肌細(xì)胞缺氧７化后，出現(xiàn)明顯的胞核濃縮，細(xì)胞體積??變小、形態(tài)異常，甚至出現(xiàn)細(xì)胞濃縮、脫落，而在缺氧ａｇｏｍｉｒ組，過(guò)表達(dá)ｍ化－１％可逆??轉(zhuǎn)Ｗ上也肌損傷進(jìn)程，使細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)正常，抑制ｍｉＲ－１３８后則相反（圖１－６）。??■ｒ誦??誦國(guó)??國(guó)畫??圖１－６轉(zhuǎn)染ａｇｏｍｉｒ及ａｎ化ｇｏｍｉｒ后，使用、禪通細(xì)胞顯微鏡觀察也肌細(xì)胞形態(tài)，（ａ）常氧組，??（ｂ）缺氧?ｃｏｎｔｒｏｌ?組

當(dāng)缺氧達(dá)到７２小時(shí)時(shí)，各組之間的差異最大。Ａｇｏｍｉｒ組的細(xì)胞數(shù)量已達(dá)到ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ??組的Ｄ６％?（＃／７＜０．０５），而與ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ組相比，ａｎｔａｇｏｍｉｒ組的細(xì)胞數(shù)僅為其的０．９??倍（＊ｐ＜０．０５）（圖１－７）。上結(jié)果提示，ｍｉＲ－１３８的表達(dá)上調(diào)能夠在缺氧條件下顯著??促進(jìn)瓜肌細(xì)胞的生長(zhǎng)，對(duì)其存活具有重要的意義。??＃?＊??，尸??１，５－１??ｃｏｎｔｒｏｌ??ｔ?白?巨?ａｇｏｍｉｒ??含萬(wàn)?１．０．?Ｉ?四?ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ??吉號(hào)?白ａ?亡３?ａｎｔａｇｏｍｉｒ??長(zhǎng)?Ｑ?Ｔ?自?Ｉ?置；６?ｉ?＾?ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ??＂ｌｉｌｉｉｉａｉｌ??圖１－７轉(zhuǎn)染ａｇｏｍｉｒ及ａｎｔａｇｏｍｉｒ后，ＭＴＴ繪制細(xì)胞在缺氧Ｏｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２小時(shí)時(shí)??間點(diǎn)的生長(zhǎng)曲線，波長(zhǎng)４９０ｎｍ處測(cè)不同組的ＯＤ值??（３）?ＬＤＨ即乳酸脫氨酶，幾乎在所有類型的細(xì)胞中都存在。當(dāng)細(xì)胞調(diào)亡或壞死??時(shí)，細(xì)胞膜的破壞會(huì)使胞漿中的ＬＤＦ釋放到細(xì)胞外，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞外液中釋放出ＬＤＨ??酶的多少


本文編號(hào)：3502563