目的:肛門直腸畸形（anorectal malformations,ARM）是小兒外科中常見(jiàn)的消化道畸形,發(fā)生率約為1/5000¹/1500。目前大部分與ARM相關(guān)的疾病可以通過(guò)手術(shù)治療,盡管手術(shù)效果較好,但術(shù)后長(zhǎng)期的并發(fā)癥往往需要患兒長(zhǎng)期就醫(yī),影響了患兒的生長(zhǎng)發(fā)育并給家庭造成了嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。研究指出,ARM的病因具有復(fù)雜性以及多因素性,遺傳因素中的基因突變及信號(hào)通路中各信號(hào)分子的相互作用和表達(dá)調(diào)控異�？赡芘cARM的發(fā)生相關(guān)。其中,Wnt信號(hào)通路在所有與ARM相關(guān)的信號(hào)通路及網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)著重要地位。已經(jīng)證明Wnt/β-catenin經(jīng)典信號(hào)通路在胚胎發(fā)育以及細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生理過(guò)程中發(fā)揮著不可替代的作用,而上述生理調(diào)節(jié)功能也是參與肛門直腸正常分化的重要環(huán)節(jié)。然而,基因相關(guān)的上游分子表達(dá)及調(diào)控是否與ARM相關(guān)仍不十分清楚。環(huán)狀RNA（circular RNAs,circRNA）是一類新近發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性非編碼RNA分子。與線性RNA結(jié)構(gòu)不同,circRNA是閉合的環(huán)狀分子,缺乏5’–3’極性或多聚核苷酸尾,因此,circRNA具有穩(wěn)定性、特異性、豐富性和保守性,能夠在... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分:ARM及正常大鼠胚胎肛門直腸組織中差異表達(dá)的circ RNA分子篩選、驗(yàn)證的相關(guān)研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 肛門直腸畸形動(dòng)物模型制備及組織標(biāo)本收集
            2.2.2 ARM組及正常組大鼠胚胎肛門直腸組織相關(guān)的circ RNA高通量測(cè)序分析
            2.2.3 應(yīng)用qRT-PCR對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確性驗(yàn)證
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 大體觀察結(jié)果和組織標(biāo)本收集分組
        3.2 ARM組及正常組胎鼠肛門直腸組織的高通量測(cè)序分析
            3.2.1 circ RNA的基本信息
            3.2.2 篩選差異表達(dá)的circ RNA
            3.2.3 差異circ RNA親本基因的富集分析
            3.3 qRT-PCR驗(yàn)證差異表達(dá)的circ RNA的表達(dá)水平
            3.4 預(yù)測(cè)差異表達(dá)circ RNA的結(jié)合miRNA
        4 討論
        5 結(jié)論
第二部分:Rno_circ_0004002在大鼠腸上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平及相關(guān)功能研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 Rno_circ_0004002的全長(zhǎng)鑒定
            2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及培養(yǎng)
            2.2.3 Rno_circ_0004002在IEC-6 細(xì)胞中的表達(dá)水平和定位
            2.2.4 Rno_circ_0004002siRNA序列和p LO5-ci R過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的設(shè)計(jì)和合成
            2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染分組
            2.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.7 細(xì)胞增殖試驗(yàn)
            2.2.8 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.2.9 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 Western blot實(shí)驗(yàn)測(cè)定EMT蛋白表達(dá)
            2.2.11 免疫熒光
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Rno_circ_0004002的全長(zhǎng)鑒定
        3.2 Rno_circ_0004002在肛門直腸組織及IEC-6 細(xì)胞中的表達(dá)水平
        3.3 Rno_circ_0004002siRNA序列和p LO5-ci R過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率
        3.4 Rno_circ_0004002對(duì)細(xì)胞增殖的影響
        3.5 Rno_circ_0004002對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        3.6 Rno_circ_0004002對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分:Rno_circ_0004002/miR3425p/Wnt3a軸調(diào)控Wnt3a表達(dá)及細(xì)胞功能的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
            2.2.2 FISH檢測(cè)rno_circ_0004002與miR3425p在IEC-6 細(xì)胞中共定位
            2.2.3 qRT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR3425p及Wnt3a在ARM和正常胎鼠肛門直腸組織中的表達(dá)水平
            2.2.4 qRT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證rno_circ_0004002/miR3425p/Wnt3a在IEC-6 細(xì)胞中的相互調(diào)控作用
            2.2.5 Rno_circ_0004002/miR3425p/Wnt3a軸對(duì)IEC-6 細(xì)胞功能的影響
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Rno_circ_0004002是miR3425p的分子海綿,Wnt3a是miR3425p的直接下游靶基因
        3.2 miR3425p和Wnt3a在ARM及正常胎鼠肛門直腸組織中的表達(dá)水平
        3.3 FISH檢測(cè)rno_circ_0004002與miR3425p在細(xì)胞中共定位
        3.4 Rno_circ_0004002調(diào)控Wnt3a m RNA及蛋白的表達(dá)
        3.5 Rno_circ_0004002靶向miR3425p調(diào)控Wnt3a的表達(dá)
        3.6 Rno_circ_0004002通過(guò)rno_circ_0004002/miR3425p/Wn3a軸調(diào)控IEC-6 細(xì)胞的增殖、凋亡和EMT功能
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3500642