目的:肛門直腸畸形（anorectal malformations,ARM）是小兒外科中常見的消化道畸形,發(fā)生率約為1/5000¹/1500。目前大部分與ARM相關(guān)的疾病可以通過手術(shù)治療,盡管手術(shù)效果較好,但術(shù)后長期的并發(fā)癥往往需要患兒長期就醫(yī),影響了患兒的生長發(fā)育并給家庭造成了嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。研究指出,ARM的病因具有復(fù)雜性以及多因素性,遺傳因素中的基因突變及信號通路中各信號分子的相互作用和表達(dá)調(diào)控異�？赡芘cARM的發(fā)生相關(guān)。其中,Wnt信號通路在所有與ARM相關(guān)的信號通路及網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)著重要地位。已經(jīng)證明Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路在胚胎發(fā)育以及細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生理過程中發(fā)揮著不可替代的作用,而上述生理調(diào)節(jié)功能也是參與肛門直腸正常分化的重要環(huán)節(jié)。然而,基因相關(guān)的上游分子表達(dá)及調(diào)控是否與ARM相關(guān)仍不十分清楚。環(huán)狀RNA（circular RNAs,circRNA）是一類新近發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性非編碼RNA分子。與線性RNA結(jié)構(gòu)不同,circRNA是閉合的環(huán)狀分子,缺乏5’–3’極性或多聚核苷酸尾,因此,circRNA具有穩(wěn)定性、特異性、豐富性和保守性,能夠在... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:ARM及正常大鼠胚胎肛門直腸組織中差異表達(dá)的circ RNA分子篩選、驗(yàn)證的相關(guān)研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 肛門直腸畸形動物模型制備及組織標(biāo)本收集
            2.2.2 ARM組及正常組大鼠胚胎肛門直腸組織相關(guān)的circ RNA高通量測序分析
            2.2.3 應(yīng)用qRT-PCR對測序結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確性驗(yàn)證
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 大體觀察結(jié)果和組織標(biāo)本收集分組
        3.2 ARM組及正常組胎鼠肛門直腸組織的高通量測序分析
            3.2.1 circ RNA的基本信息
            3.2.2 篩選差異表達(dá)的circ RNA
            3.2.3 差異circ RNA親本基因的富集分析
            3.3 qRT-PCR驗(yàn)證差異表達(dá)的circ RNA的表達(dá)水平
            3.4 預(yù)測差異表達(dá)circ RNA的結(jié)合miRNA
        4 討論
        5 結(jié)論
第二部分:Rno_circ_0004002在大鼠腸上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平及相關(guān)功能研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 Rno_circ_0004002的全長鑒定
            2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及培養(yǎng)
            2.2.3 Rno_circ_0004002在IEC-6 細(xì)胞中的表達(dá)水平和定位
            2.2.4 Rno_circ_0004002siRNA序列和p LO5-ci R過表達(dá)質(zhì)粒的設(shè)計(jì)和合成
            2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染分組
            2.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.7 細(xì)胞增殖試驗(yàn)
            2.2.8 細(xì)胞凋亡檢測
            2.2.9 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 Western blot實(shí)驗(yàn)測定EMT蛋白表達(dá)
            2.2.11 免疫熒光
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Rno_circ_0004002的全長鑒定
        3.2 Rno_circ_0004002在肛門直腸組織及IEC-6 細(xì)胞中的表達(dá)水平
        3.3 Rno_circ_0004002siRNA序列和p LO5-ci R過表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率
        3.4 Rno_circ_0004002對細(xì)胞增殖的影響
        3.5 Rno_circ_0004002對細(xì)胞凋亡的影響
        3.6 Rno_circ_0004002對細(xì)胞遷移能力的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分:Rno_circ_0004002/miR3425p/Wnt3a軸調(diào)控Wnt3a表達(dá)及細(xì)胞功能的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測
            2.2.2 FISH檢測rno_circ_0004002與miR3425p在IEC-6 細(xì)胞中共定位
            2.2.3 qRT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR3425p及Wnt3a在ARM和正常胎鼠肛門直腸組織中的表達(dá)水平
            2.2.4 qRT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證rno_circ_0004002/miR3425p/Wnt3a在IEC-6 細(xì)胞中的相互調(diào)控作用
            2.2.5 Rno_circ_0004002/miR3425p/Wnt3a軸對IEC-6 細(xì)胞功能的影響
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Rno_circ_0004002是miR3425p的分子海綿,Wnt3a是miR3425p的直接下游靶基因
        3.2 miR3425p和Wnt3a在ARM及正常胎鼠肛門直腸組織中的表達(dá)水平
        3.3 FISH檢測rno_circ_0004002與miR3425p在細(xì)胞中共定位
        3.4 Rno_circ_0004002調(diào)控Wnt3a m RNA及蛋白的表達(dá)
        3.5 Rno_circ_0004002靶向miR3425p調(diào)控Wnt3a的表達(dá)
        3.6 Rno_circ_0004002通過rno_circ_0004002/miR3425p/Wn3a軸調(diào)控IEC-6 細(xì)胞的增殖、凋亡和EMT功能
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]環(huán)狀RNA的分子特征、作用機(jī)制及生物學(xué)功能[J]. 周鳳燕,楊青,朱熙春,藍(lán)賢勇,陳宏.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2017(03)
[2]Circular RNAs in colorectal cancer: Possible roles in regulation of cancer cells[J]. María Isabel Taborda,Sebastián Ramírez,Giuliano Bernal.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2017(02)
[3]幾種類型的環(huán)狀RNA:潛在的分子標(biāo)記物[J]. 周麗,史濟(jì)洲,張蒙.  生命科學(xué). 2016(07)
[4]先天性肛門直腸畸形基因異常及其致病因素研究進(jìn)展[J]. 張艷莉,任紅霞.  中華胃腸外科雜志. 2016 (01)
[5]Wnt3a:functions and implications in cancer[J]. Sha He,Yi Lu,Xia Liu,Xin Huang,Evan T.Keller,Chao-Nan Qian,Jian Zhang.  Chinese Journal of Cancer. 2015(12)
[6]環(huán)狀RNA與人類疾病[J]. 付麗云,胡耀仁,郭俊明.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2015(08)
[7]競爭性內(nèi)源RNA的生物學(xué)功能及其調(diào)控[J]. 李靜秋,楊杰,周平,樂燕萍,龔朝輝.  遺傳. 2015(08)
[8]微小RNA與卵巢癌研究進(jìn)展[J]. 李明,姜樺.  國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志. 2015(02)
[9]Sox10和EDNRB在人胚胎腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的表達(dá)[J]. 李穎,黃英,王大佳,王維林.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(03)
[10]基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控在DNA損傷反應(yīng)中的重要功能[J]. 林德玲,羅瑛,宋宜.  遺傳. 2014(04)



本文編號：3500642