研究背景和研究目的成骨不全癥（Osteogenesis Imperfecta,OI）是以骨脆性增加、膠原代謝紊亂為特征的全身性遺傳性結(jié)締組織疾病。絕大多數(shù)OI患者是由于編碼I型膠原蛋白α1鏈（Collagen typeⅠα1 chain,Col1α1）和α2鏈（Collagen typeⅠα2 chain,Col1α2）的基因突變導(dǎo)致的膠原代謝紊亂。根據(jù)OI的特征性臨床表現(xiàn)分為5個亞型（1-5型）,其臨床特征主要包括骨量降低、反復(fù)骨折、骨骼畸形、牙本質(zhì)發(fā)育不全、關(guān)節(jié)松弛、身材矮小。OI癥狀多于兒童時期開始出現(xiàn),嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,也給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。目前,針對OI尚缺乏有效的治愈手段,現(xiàn)行的臨床治療方案主要包括藥物治療、手術(shù)矯形、康復(fù)鍛煉、分子與細(xì)胞治療等。藥物治療為目前主要的治療方式,其中以雙膦酸鹽（Bisphosphonates,BPs）的應(yīng)用最為廣泛。BPs是一種骨吸收抑制劑,在體內(nèi)與骨基質(zhì)中的羥基磷灰石相結(jié)合,通過抑制破骨細(xì)胞的活性來改善OI患者的骨骼結(jié)構(gòu)。但BP的用藥模式復(fù)雜,存在急性期反應(yīng)（Acute phase response,APR）、非典型股骨骨折（A... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測Irisin促進(jìn)成骨細(xì)胞分化

鳶尾素治療成骨不全癥的機(jī)制及動物實驗研究-27-圖1-2ALP染色和ARS染色檢測Irisin促進(jìn)成骨細(xì)胞分化及礦化Oim/oim和wt/wt成骨前體細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)分化，處理組同時加入10ng/ml、100ng/ml的Irisin培養(yǎng)14d（A,C-D）和21d（B,E-F）。14d后進(jìn)行ALP染色（A），21d后進(jìn)行ARS染色（B），并用佳能相機(jī)（大體）和倒置光學(xué)顯微鏡（局部，40×）拍攝照片。ImageJ軟件計算ALP陽性集落形成的面積（Cfu-ALP）（C）和von-Kossa陽性集落形成的面積（Cfu-ARS）（E）。進(jìn)一步對ALP和ARS活性的定量分析，結(jié)果以細(xì)胞的蛋白總量作為均一化基數(shù)。圖A,B的標(biāo)尺是200μm。Oim/oim:OI基因型;Wt/wt:野生型.*P＜0.05,**P＜0.01vsOim/oim;#P＜0.05,##P＜0.01vsOim/oim＋I(xiàn)risin10ng/mlgroup,n=3。Figure1-2IrisinpromotingosteoblastdifferentiationandmineralizationinvitromeasuredbyALPandalizarinredSstainingPrimaryosteoblastsofoim/oimandwt/wtwereculturedinosteoblastdifferentiation

鳶尾素治療成骨不全癥的機(jī)制及動物實驗研究-29-圖1-3qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測Irisin抑制破骨細(xì)胞分化Oim/oim和wt/wt的BMMs在破骨誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)分化，處理組同時加入10ng/ml、100ng/ml的Irisin培養(yǎng)5d。5d后提取RNA和蛋白，用實時定量PCR檢測破骨細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子（c-fos和NFATc1）和骨吸收相關(guān)基因（Calcr、Trap和CTSK）的mRNA表達(dá)水平，β-actin作為內(nèi)參（A-E）。蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測c-fos、NFATc1、Calcr、Trap和CTSK的蛋白表達(dá)水平，并將GAPDH作為其標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參（F-G）。Oim/oim:OI基因型;Wt/wt:野生型.*P＜0.05,**P＜0.01vsOim/oim;#P＜0.05,##P＜0.01vsOim/oim＋I(xiàn)risin10ng/mlgroup,n=3。Figure1-3IrisininhibitingdifferentiationofosteoclastsinvitromeasuredbyqRT-PCRandWesternblotting.BMMsofoim/oimandwt/wtwereinoculatedinosteoclasticculturemediuminthepresenceofIrisin(10ng/mland100ng/ml)for5days.Theexpressionlevelsofosteoclasttranscriptionfactors(c-fosandNFATc1)andresorptionrelatedgenes(Calcr,TrapandCTSK)wereassessedbyqRT-PCRandwerenormalizedtoβ-actin(A-E).Theprotein

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Exercise-induced irisin in bone and systemic irisin administration reveal new regulatory mechanisms of bone metabolism[J]. Jin Zhang,Paloma Valverde,Xiaofang Zhu,Dana Murray,Yuwei Wu,Liming Yu,Hua Jiang,Michel M Dard,Jin Huang,Zhiwei Xu,Qisheng Tu,Jake Chen.  Bone Research. 2017(01)



本文編號：3493449