第一部分整合素α4、β7基因克隆目的:從小鼠小腸peyer結(jié)中克隆小鼠整合素α4、β7基因,為下一步利用腺病毒載體AdEasy system構(gòu)建Adα4β7打下基礎(chǔ)。方法:以小鼠小腸PP提取的總RNA為模板,設(shè)計(jì)合成擴(kuò)增小鼠整合素α4、β7基因的特異性引物,進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。應(yīng)用膠回收法純化目的基因α4、β7,目的基因定向克隆至載體pMD-18, pMD-19,構(gòu)建質(zhì)粒pMD-18-α4、pMD-19-β7,進(jìn)行測(cè)序,與已知GenBank中的α4、β7基因進(jìn)行序列比較,對(duì)導(dǎo)致編碼氨基酸改變的突變堿基進(jìn)行定點(diǎn)突變修復(fù)。結(jié)果:克隆α4、β7基因,序列測(cè)定表明α4基因序列有6個(gè)堿基突變導(dǎo)致編碼氨基酸的改變,β7基因序列有5個(gè)堿基突變導(dǎo)致編碼氨基酸的改變。利用定點(diǎn)突變技術(shù)對(duì)造成編碼氨基酸的堿基定點(diǎn)突變修復(fù)。結(jié)論:本研究成功克隆小鼠α4、β7基因,確定對(duì)造成編碼氨基酸改變的突變堿基定點(diǎn)突變修復(fù)。第二部分構(gòu)建重組腺病毒AdCTLA4Ig、Adα4β7目的:應(yīng)用腺病毒載體系統(tǒng)AdEasy System構(gòu)建含有CTLA4Ig、α4β7基因的重組腺病毒AdCTLA4Ig、Adα4β7及其對(duì)照腺病毒A... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒CTA931-T-3（pFig1-17Themutationrepairingproduct

2.5 突變修復(fù)后測(cè)序?qū)?CTA996-11 號(hào)質(zhì)粒用 M13-47、RV-M、CTA931 F1、CTA931 R1、C引物進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果正確（圖 1-21）。

5. 將 Insert DNA 和 Vector DNA 連接后轉(zhuǎn)化。從轉(zhuǎn)化平板上挑取單菌落進(jìn)行 PCR擴(kuò)增電泳示：第 1 泳道擴(kuò)增出目的基因條帶，檢測(cè)結(jié)果表明: CTB082-1 號(hào)為陽性克隆（圖 1-27）。1 2 3 4 5 M1600bpM1: DNA Marker DL2,0001~5: CTB081-2~5-PCR 產(chǎn)物圖 1-27 重組質(zhì)粒 CTB081 1-5 PCR 鑒定Fig 1-27 Identification of recombinant plasmid CTB081 1-5 by PCR6. 將 CTB082-1 號(hào)質(zhì)粒用引物 pMD18F 進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果正確（圖 1-28）。


本文編號(hào)：3471395