目的:支氣管肺發(fā)育不良（BPD）是早產(chǎn)兒常見(jiàn)且嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)并發(fā)癥,以肺泡發(fā)育停滯為主要特征。其病死率高,即使存活也會(huì)伴有遠(yuǎn)期的肺通氣、換氣及肺泡彌散功能障礙,嚴(yán)重影響患兒的生存質(zhì)量。但目前尚無(wú)有效的治療手段。Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞（AECⅡ）作為肺泡上皮細(xì)胞的“祖細(xì)胞”,當(dāng)肺上皮受損時(shí),不僅可以自我更新,還能增殖并分化為I型肺泡上皮細(xì)胞（AEC I）,在肺泡結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)中起著重要的作用。大量研究證實(shí)氧化應(yīng)激是BPD疾病發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),但與BPD結(jié)局的關(guān)系目前尚不明確。DNA損傷是氧化應(yīng)激的最嚴(yán)重表現(xiàn)形式,其能否修復(fù)關(guān)乎到細(xì)胞的生存及結(jié)局,其中DSB雙鏈斷裂（DSBs）是DNA損傷最嚴(yán)重的類型,若修復(fù)失敗則可引發(fā)細(xì)胞永久性的生長(zhǎng)停滯。因此,為了探索BPD肺上皮細(xì)胞DNA損傷的病理機(jī)制,本研究分別從動(dòng)物水平、原代細(xì)胞水平以及體外細(xì)胞高氧暴露試驗(yàn),應(yīng)用ELISA、免疫熒光、Western-blot、彗星實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)方法,檢測(cè)BPD大鼠肺組織及AECⅡ中DNA損傷標(biāo)志物8-ohdG和γ-H2AX的表達(dá)變化,以及DNA絲條斷裂情況,并在此基礎(chǔ)上,利用基因芯片技術(shù),篩選并驗(yàn)證DNA損傷修復(fù)信號(hào)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

肺組織形態(tài)學(xué)改變（×200）

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文12圖1.4肺組織中γ-H2AX的免疫熒光染色（A）不同日齡（3d,7d,14d）大鼠肺組織中γ-H2AX的免疫熒光染色（×200，紅色為熒光標(biāo)記γ-H2AX，藍(lán)色為DAPI標(biāo)記細(xì)胞核，箭頭所示為γ-H2AX陽(yáng)性細(xì)胞）；（B）模型組14d大鼠肺組織γ-H2AX的免疫熒光染色（×800，紅色為熒光標(biāo)記γ-H2AX，藍(lán)色為DAPI標(biāo)記細(xì)胞核，箭頭所示γ-H2AX表達(dá)于細(xì)胞核中）；（C）B組中方框放大后（箭頭所示為細(xì)胞核內(nèi)γ-H2AX焦點(diǎn)）3.2.3Western-blot檢測(cè)肺組織中γ-H2AX的表達(dá)水平Western-blot結(jié)果顯示（圖1.5），與對(duì)照組相比，模型組的γ-H2AX表達(dá)水平從3d開(kāi)始增加，7d時(shí)明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），14d時(shí)差異更加顯著（P<0.01）。

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文13圖1.5肺組織中γ-H2AX的蛋白表達(dá)水平（A）通過(guò)Western-blot方法測(cè)定γ-H2AX的蛋白表達(dá)水平（C：對(duì)照組；M模型組）；（B）將γ-H2AX條帶的強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化為β-actin（*，**與對(duì)照組相比，分別P<0.05，P<0.01）3.3肺AECⅡ中DNA損傷標(biāo)志物的表達(dá)3.3.1免疫熒光雙染檢測(cè)肺組織中γ-H2AX與p180共表達(dá)免疫熒光雙染（圖1.6A-C）觀察到γ-H2AX表達(dá)于細(xì)胞核中，p180表達(dá)于細(xì)胞漿內(nèi)(圖1.6B)。模型組14d大鼠肺組織中可見(jiàn)P180與γ-H2AX共表達(dá)，而在對(duì)照組，很少有p180和γ-H2AX的共表達(dá)(圖1.6A)。計(jì)數(shù)γ-H2AX/P180雙染細(xì)胞占P180陽(yáng)性細(xì)胞百分比，結(jié)果顯示(圖1.6C)，模型組14d肺組織中γ-H2AX/P180雙染細(xì)胞占P180陽(yáng)性細(xì)胞百分比顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高氧誘導(dǎo)慢性肺疾病早產(chǎn)鼠肺組織中氧化及抗氧化系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)研究[J]. 富建華,薛辛東.  中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志. 2004(06)
[2]高氧誘導(dǎo)早產(chǎn)鼠慢性肺疾病肺超微結(jié)構(gòu)變化及氧化應(yīng)激反應(yīng)的研究[J]. 富建華,薛辛東.  中國(guó)當(dāng)代兒科雜志. 2004(01)
[3]HL-60和SiHA細(xì)胞株ATM表達(dá)量與60Co照射后細(xì)胞周期阻滯之間的關(guān)系[J]. 湯屹,劉文勵(lì),周劍鋒,高慶蕾,吳劍宏.  癌癥. 2003(07)



本文編號(hào)：3460163