目的:新生兒呼吸窘迫綜合征（neonatal respiratory distress syndrome,NRDS）是新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房常見疾病。細(xì)胞凋亡參與NRDS肺損傷機(jī)制。CD80基因于外界刺激后可在非骨髓來源的細(xì)胞中表達(dá),參與致病機(jī)制。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,Lnc RNA）轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄本1（metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1）與脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）誘導(dǎo)的炎癥有關(guān),參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控。在本研究中,我們擬明確MALAT1是否參與CD80調(diào)控及肺細(xì)胞凋亡過程及其潛在機(jī)制,為NRDS機(jī)制研究和精準(zhǔn)治療奠定基礎(chǔ)。方法:（1）實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測NRDS患兒外周血單個核細(xì)胞及LPS誘導(dǎo)后的細(xì)胞系CD80 m RNA、MALAT1 RNA表達(dá)水平;敲低MALAT1,觀察CD80 m RNA、蛋白表達(dá)水平及轉(zhuǎn)錄活性的改變。（2）生物信息學(xué)預(yù)測、定點(diǎn)堿基突變及染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)尋找LPS誘導(dǎo)后CD80啟動子潛在的轉(zhuǎn)錄因子。RNA... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

CD80mRNA在LPS10ng/ml刺激12h后的A549細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)

A 在 LPS 10ng/ml 刺激 12 h 后的 A549 細(xì)胞中劑量 LPS（10ng / ml）刺激 12h 后，CD80 m，在 LPS 刺激后 24 h 后降低；并且在 LPS 刺激D80 mRNA 水平亦上調(diào)（*p <0.05），但趨勢較在 HeLa 細(xì)胞中沒有觀察到明顯變化（p> 0.0種細(xì)胞系 PBS 陰性處理對照組比較。）

與陰性對照相比，敲低LncRNA MALAT1后，促進(jìn)了LPS誘導(dǎo)的CD80 mRNA 及蛋白水平的上調(diào)。圖4. 驗(yàn)證MALAT1敲低效率。 通過RT-qPCR測定法檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的siMALAT1（10nM，50nM，100nM）后，MALAT1在A549細(xì)胞中的表達(dá)水平。（**p<0.01，與相同處理?xiàng)l件陰性對照比較。）


本文編號：3432901