牛乳蛋白過敏（cow milk protein allergy,CMPA）是嬰兒及兒童中常見的食物過敏之一,一般情況下兒童的過敏癥狀會在5歲左右逐漸減輕,直至消失,但仍有10%左右的過敏兒童不能自動康復(fù),會持續(xù)過敏癥狀且日益嚴重。腸道菌群作為人體最大的“微生物器官”與健康息息相關(guān),正常情況下腸道菌群處于動態(tài)平衡的狀態(tài)。當(dāng)這種平衡被破壞,可能引起過敏疾病等疾病的發(fā)生。短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFA）作為腸道中微生物代謝的最終產(chǎn)物,參與機體免疫調(diào)節(jié)和發(fā)育。目前研究多集中于發(fā)生牛乳蛋白過敏的嬰兒的腸道菌群結(jié)構(gòu)及糞便中SCFAs的變化,針對5-10歲的CMPA兒童腸道菌群及SCFAs的研究還很少,因此,本研究選擇5-8歲CMPA兒童的腸道菌群和糞便中SCFAs及乳酸的變化進行探究。本研究選取了2016年6月至2016年12月經(jīng)哈爾濱兒童醫(yī)院確診為牛乳蛋白過敏的5-8歲兒童共6例,并在同一時間段選取了8例哈爾濱地區(qū)相同年齡段的健康兒童作為對照。采集所有兒童的糞便樣品用于試驗。試驗主要分為兩部分,第一部分為通過16S rDNA擴增子測序?qū)λ械募S便樣品進行分析... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

兒童糞便中細菌DNA的PCR擴增產(chǎn)物質(zhì)量分析

圖 3-2 OTU 獲得情況分析Figure 3-2 Analysis of OTU accepted3.3 樣品復(fù)雜度分析3.3.1 Alpha 多樣性指數(shù)分析通常情況下，同一個種的序列指的是在 97%以上的序列都一致的條件下，可聚類成一個OTU 的序列[90]。通過使用 Qiime 軟件（Version 1.7.0）對不同樣品在 97%一致性閾值下的 alpha多樣性分析指數(shù)（Chao 1 指數(shù)、Shannon 指數(shù)、Simpson 指數(shù)和 ACE 指數(shù)）進行統(tǒng)計[91]，進而可以分析兩組兒童的腸道菌群的豐度及多樣性的差異。表 3-1 為兩組樣品的 alpha 多樣性分析指數(shù)的統(tǒng)計結(jié)果，兩組樣品的 4 個指數(shù)在統(tǒng)計學(xué)上都沒有顯著的的差異（P ＞ 0.05），這表明兩組兒童的腸道菌群在豐度和多樣性上都沒有明顯的差異。一般在嬰幼兒時期，不同個體的腸道菌群會有顯著性的差異[92]。當(dāng)兒童年齡達到 3 歲左右，其腸道菌群基本達到了一個動態(tài)的平衡，結(jié)構(gòu)類似于成人的腸道菌群結(jié)構(gòu)[93]。由于本研究中的兒童年齡在 5-8 歲，且都生活在一個環(huán)境中，所以不同個體的腸道菌群的結(jié)構(gòu)沒有顯著性的差異也是合理的。表 3-1 Alpha 多樣性指數(shù)分析

3.2 物種多樣性曲線分析3.2.1 稀釋曲線分析稀釋曲線是指在所有的樣品中通過隨機抽取獲得部分數(shù)據(jù)，進而分析它們所代表的Us 數(shù)目[94]。由稀釋曲線可看出數(shù)據(jù)是否安排合理且能間接地看出樣品中物種的豐度情 3-3 為 14 個兒童樣品的稀釋曲線圖，health 1-health 8 表示健康組的 8 個樣品，cmpa 1- c示過敏組中的 6 個樣品。由圖可看出，cmpa 6、health 4、health 5、health 6、health 7alth 8 這六個樣本隨著測序條數(shù)的增多，曲線基本平行，這表明所用的數(shù)據(jù)已經(jīng)足夠，表驗取樣合理。而其他的八個樣本隨著測序條數(shù)的增多還沒有進入平臺期，這也意味著當(dāng)數(shù)量逐漸變大時，新的物種也會逐漸增多。

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3429242