B7分子是表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cell，APC）表面的重要協(xié)同刺激分子。B7與CD28結(jié)合介導(dǎo)的協(xié)同刺激作用對(duì)初次免疫應(yīng)答是必需的，若缺乏該信號(hào)，T細(xì)胞將進(jìn)入無反應(yīng)狀態(tài)（Anergy）或免疫耐受（Tolerance），甚至引起程序性死亡（Apoptosis）。B7/CD28信號(hào)通路的過度活化與自身免疫性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種自身免疫性疾病，病因至今尚無明確定論。機(jī)體以出現(xiàn)T、B細(xì)胞活化增強(qiáng)，產(chǎn)生抗核抗體（antinuclearantibody，ANA）、抗雙鏈DNA（double stranded DNA，dsDNA）抗體、形成免疫復(fù)合物（immune complex，IC）以及多種組織器官損傷為其特征。其中狼瘡性腎炎（lupus nephritis，LN）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡最常見和最嚴(yán)重的并發(fā)癥，是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。研究表明，B7/CD28信號(hào)通路在SLE的發(fā)病及病理損傷過程中發(fā)揮了重要的作用。RNA干擾（RNA interference，RNAi）是由長(zhǎng)約... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

RNA干擾機(jī)制Fig.2.MechanismofRNAinterference鑒此，本研究旨在：1、根據(jù)小鼠B7-1mRNA序列及RNAi的沉默原則，選擇四條靶堿基對(duì)，構(gòu)建小鼠B7-1shRNA慢病毒表達(dá)載體，經(jīng)感染L929細(xì)胞后分

圖 1- 3 重組慢病毒 LV3-B7-1shRNA 滴度測(cè)定Fig.1-3. Titer detection of recombinant lentivirus慢病毒感染 L929 細(xì)胞及有效阻斷膜型 B7-1 分子的表達(dá)照重組慢病毒顆粒按照不同 MOIs 感染 L929 細(xì)胞，48 h 后經(jīng)熒光胞中 GFP 的表達(dá)情況以判定感染效率，MOI 為 20、40 和 60 時(shí)，為 50.7%、77.6% 和 88.7%，以此確定最優(yōu) MOI 值為 60。將重組B7-1 shRNA-256、409、620 及 807 分別感染 L929 細(xì)胞，F(xiàn)CM 檢測(cè) 分子的表達(dá)。結(jié)果表明，上述重組質(zhì)粒對(duì)L929細(xì)胞表面膜型 B7-1 分效率分別為 73.2%、72.4%、61.4%及 55.2%，由此挑選沉默效率最RNA-256 為最佳靶序列，用于后續(xù)對(duì)狼瘡樣腎炎模型進(jìn)行整體干預(yù)5）。

18light microscope fluorescence microscope flow cytometry圖 1-4 不同 MOI 時(shí)重組慢病毒對(duì) L929 細(xì)胞的感染效率Fig.1-4. Infection efficiency of recombinant lentiviruson L929 cells at different MOIs

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3339071