目的：研究Wnt5a基因在兒童急性白血病（acute leukemia, AL）表達情況,比較不同類型AL患兒骨髓單個核細胞Wnt5amRNA表達水平,探討Wnt5amRNA表達量與AL治療反應的關系,為臨床早期判斷白血病的轉歸,預測復發(fā)及為個體化治療提供新的分子標志和理論依據。方法：以四川省人民醫(yī)院兒科收治的29例AL患兒的61份初發(fā)和緩解期骨髓標本為實驗對象。對照組為15例非白血病患兒骨髓標本。使用Catrimox-14TM RNA分離試劑盒提取總RNA,逆轉錄后用SYBR GreenI實時定量PCR方法檢測Wnt5a mRNA的表達,擴增產物的特異性通過熔解曲線和凝膠電泳雙重確認,以ABL為內參照,采用2-△Δct法計算其相對表達量。結果1、Wnt5a在AL初治組表達量（0.379±2.867）顯著低于非白血病組（22.627±35.134）（P=0.004）；其中在ALL （acute lymphoblastic leukemia,急性淋巴細胞白血�。�、AML （acute myeloid leukemia,急性髓系白血病）初治組中表達量為0.467±3.578和0.309±1... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學四川省

【文章頁數】：40 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA電泳鑒定結果

2、PCR擴增的線性和效率2.1標準曲線建立「5]以標本中正常兒童骨髓RNA的cDNA作為“標準品”，連續(xù)10倍稀釋建立“標準曲線”。標準曲線的橫坐標是人為設定拷貝數的10為底的對數，縱坐標為對應的Ct值。Wntsa基因熒光定量PCR標準曲線的建立以起始拷貝數為(1.0x106)、(1.oxlo7)、(1.oxlos)、(1.0xl護)“標準品”作為模板，分別對應曲線為藍色、黑色、綠色、紅色，于相同反應條件下行熒光定量PCR，得到Wntsa系列稀釋標準品的擴增曲線和Ct值(圖2一1)。以wntsa系列稀釋“標準品”的初始拷貝數為橫坐標，Ct值為縱坐標，擬合枷tsa標準曲線。閑8口8口S8L比班旅跳勝旅攘刃護O

L口月L.月閱扭圖2一3ABL的熒光強度曲線圖2一4ABL的標準曲線 Fig2--3Realti.esePCRst朋d盯 ddyn柳 ieeurveofABLFigZ一 4Realti.eesPCRstandardcurveofABL在模板量4個10倍梯度稀釋范圍內，Ct值與起始拷貝數間呈線性關系，標準曲線的直線回歸相關系數r=0.9993，斜率k=一3.109，截距b=46.2015，直線回歸相關系數r=o.9993，回歸系數大于0.96，認為擬合滿意。 2.2PCR擴增的線性和效率實時熒光Rl’ -PCR對mRNA的定量依賴于PCR擴增的線性和效率。本研究中ABL和Wntsa的標準曲線分別為 :CtABL=一 3.1119cDNA濃度+46.20和Ctwn。。=一 3.0719cD撇濃度十45.61

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Wnt5a基因在淋巴細胞系惡性腫瘤中的表達分析[J]. 鄧剛,司維柯,潘靜,趙宸,李招權.  第三軍醫(yī)大學學報. 2008(19)
[2]外源性Wnt5a激活K562細胞非經典Wnt5a/Ca2+信號途徑研究[J]. 李招權,司維柯,鄒全明,袁媛,潘靜,趙宸.  第三軍醫(yī)大學學報. 2008(10)
[3]Wnt5a與髓細胞白血病發(fā)生關系的研究[J]. 袁媛,李招權,司維柯,潘靜,趙宸.  第三軍醫(yī)大學學報. 2007(21)
[4]外源性Wnt5a誘導K562細胞分化表型的實驗研究[J]. 袁媛,司維柯,李招權,潘靜,趙宸.  中國實驗血液學雜志. 2007(05)
[5]Wnt5a基因在血液病及白血病細胞株中的表達[J]. 李招權,司維柯,潘靜,袁媛,鄒全明.  中國實驗血液學雜志. 2007(05)
[6]一種新穎簡便的熒光實時RT-PCR相對定量方法的建立[J]. 張馳宇,徐順高,黃新祥.  生物化學與生物物理進展. 2005(09)



本文編號：3322559