使用益生菌預(yù)防或治療輪狀病毒（Rotavirus,RV）感染和腹瀉是臨床中常用的方案,但具體機(jī)制目前還不清楚。在本研究中我們分別在體外RV感染的豬小腸上皮細(xì)胞（Porcine small intestinal epithelial cell line,IPEC-J2）模型和體內(nèi)RV感染的悉生（Gnotobiotic,Gn）豬模型上探索了益生菌對(duì)RV感染和腹瀉的保護(hù)機(jī)制。體外研究中,嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus,LA）或者鼠李糖乳酸桿菌（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）在豬輪狀病毒（Porcine rotavirus, pRV） OSU或人輪狀病毒（Human rotavirus, hRV） Wa接種IPEC-J2細(xì)胞前24 h和接種細(xì)胞后1 h被用來(lái)處理細(xì)胞。我們發(fā)現(xiàn)pRV在IPEC-J2細(xì)胞上的感染力明顯高于hRV。LA或LGG處理細(xì)胞并不減少RV在細(xì)胞上的繁殖和復(fù)制。pRV感染細(xì)胞增加了MUC3黏蛋白的分泌。LGG可降低pRV感染細(xì)胞中分泌型MUC3黏蛋白產(chǎn)量;但可增加正常細(xì)胞中膜結(jié)合型MUC3黏蛋白產(chǎn)量。病毒感染前2... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：102 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 輪狀病毒、益生菌及其相關(guān)研究進(jìn)展
        1.1 腸上皮細(xì)胞在先天性免疫中的作用
            1.1.1 屏障功能
            1.1.2 參與腸黏液層的組成
            1.1.3 產(chǎn)生免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑
            1.1.4 腸上皮細(xì)胞的免疫監(jiān)測(cè)功能和TLR
        1.2 RV 及其致病免疫機(jī)制
            1.2.1 RV 和RV 感染
            1.2.2 RV 的致病機(jī)制
            1.2.3 RV 感染的免疫保護(hù)機(jī)制
        1.3 益生菌及其對(duì)機(jī)體免疫作用的影響
            1.3.1 益生菌及其益生作用
            1.3.2 益生菌在預(yù)防或治療腸道炎性疾病的機(jī)制
        1.4 RV 感染的Gn 豬模型研究進(jìn)展
            1.4.1 應(yīng)用RV 感染的Gn 豬模型對(duì)RV 感染發(fā)病機(jī)理的研究
            1.4.2 應(yīng)用RV 感染的Gn 豬模型對(duì)RV 感染相關(guān)免疫問(wèn)題的研究
            1.4.3 應(yīng)用RV 感染的Gn 豬模型研究益生菌對(duì)RV 感染的免疫調(diào)節(jié)作用
試驗(yàn)研究
    第二章 以輪狀病毒感染的豬小腸上皮細(xì)胞為模型研究腸上皮細(xì)胞對(duì)輪狀病毒和益生菌的先天免疫應(yīng)答反應(yīng)
        2.1 材料與方法
            2.1.1 豬小腸上皮細(xì)胞
            2.1.2 病毒
            2.1.3 益生菌株
            2.1.4 RV 感染和益生菌處理IPEC-J2 細(xì)胞的方案
            2.1.5 用TLR 配基和益生菌總DNA 刺激IPEC-J2 細(xì)胞
            2.1.6 用免疫熒光法檢測(cè)RV 感染的細(xì)胞
            2.1.7 用CCIF 測(cè)定RV 滴度
            2.1.8 用ELISA 測(cè)定RV 抗原
            2.1.9 用PAS 染色法檢測(cè)IPEC-J2 細(xì)胞產(chǎn)生的黏蛋白
            2.1.10 用ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的黏蛋白
            2.1.11 用ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的產(chǎn)量
            2.1.12 用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)TLR2、TLR3 和TLR9 在細(xì)胞上的表達(dá)
            2.1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 RV 感染IPEC-J2 細(xì)胞
            2.2.2 益生菌對(duì)RV 在IPEC-J2 細(xì)胞上感染力的影響
            2.2.3 IPEC-J2 細(xì)胞產(chǎn)生的黏蛋白及益生菌對(duì)黏蛋白分泌和表達(dá)的的影響
            2.2.4 RV 感染和TLR 配體PGN、PolyI:C 和CpG 刺激IPEC-J2 細(xì)胞后的細(xì)胞因子反應(yīng)
            2.2.5 益生菌對(duì)RV 感染細(xì)胞細(xì)胞因子IL-6 和IL-8 反應(yīng)的影響
            2.2.6 益生菌對(duì)IPEC-J2 細(xì)胞TLR2、TLR3 和TLR9 表達(dá)的影響
            2.2.7 益生菌總DNA 對(duì)IPEC-J2 細(xì)胞TLR2 和TLR9 表達(dá)的影響
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 以輪狀病毒感染的豬小腸上皮細(xì)胞為模型研究輪狀病毒和益生菌對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障功能的影響
        3.1 材料與方法
            3.1.1 豬小腸上皮細(xì)胞
            3.1.2 病毒
            3.1.3 益生菌株
            3.1.4 測(cè)定IPEC-J2 細(xì)胞的TEER
            3.1.5 分析IPEC-J2 細(xì)胞單層的滲透性
            3.1.6 用Western Blot 確定TJ 蛋白和AJ 蛋白在IPEC-J2 細(xì)胞中的表達(dá)
            3.1.7 用免疫熒光染色法確定TJ 蛋白和AJ 蛋白在IPEC-J2 細(xì)胞上的分布
            3.1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 RV 感染和/或益生菌處理對(duì)IPEC-J2 細(xì)胞單層TEER 的影響
            3.2.2 RV 感染和/或益生菌處理對(duì)IPEC-J2 細(xì)胞單層通透性的影響
            3.2.3 RV 感染和/或益生菌處理對(duì)IPEC-J2 細(xì)胞TJ 蛋白和AJ 蛋白的影響
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 以輪狀病毒感染的悉生豬為模型研究益生菌對(duì)輪狀病毒腹瀉的保護(hù)機(jī)制
        4.1 材料與方法
            4.1.1 病毒
            4.1.2 益生菌株
            4.1.3 Gn 豬的分組和接種
            4.1.4 樣品收集
            4.1.5 檢測(cè)LGG 的體外排出情況
            4.1.6 用ELISA 和CCIF 檢測(cè)排出病毒的抗原和病毒滴度
            4.1.7 用ELISA 檢測(cè)SIC 和LIC 中MUC3 黏蛋白的產(chǎn)量
            4.1.8 體外評(píng)價(jià)回腸通透性
            4.1.9 用Western Blot 定量TJ 和AJ 蛋白
            4.1.10 用免疫熒光法對(duì)回腸上皮組織中的TJ 和AJ 蛋白定位
            4.1.11 用ELISA 檢測(cè)血清和腸內(nèi)容物中的細(xì)胞因子濃度
            4.1.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 LGG 的Gn 豬腸道的定植情況
            4.2.2 臨診癥狀和hRV 感染的情況
            4.2.3 Gn 豬腸道MUC3 黏蛋白
            4.2.4 Gn 豬回腸通透性
            4.2.5 Gn 豬回腸和結(jié)腸TJ 和AJ 蛋白
            4.2.6 Gn 豬血清中的細(xì)胞因子水平
            4.2.7 Gn 豬SIC 和LIC 的細(xì)胞因子水平
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Comparison of the chloride channel activator lubiprostone and the oral laxative Polyethylene Glycol 3350 on mucosal barrier repair in ischemic-injured porcine intestine[J]. Adam J Moeser,Prashant K Nighot,Birgit Roerig,Ryuji Ueno,Anthony T Blikslager.  World Journal of Gastroenterology. 2008(39)
[2]Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease[J]. Mike G Laukoetter,Porfirio Nava,Asma Nusrat.  World Journal of Gastroenterology. 2008(03)
[3]輪狀病毒病毒血癥與腸道外臟器損傷的研究[J]. 黃曉磊,陳潔,虞燕萍,陳黎勤,李中躍,趙正言.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2006(01)
[4]Different cytokine response of primary colonic epithelial cells to commensal bacteria[J]. Sheena Margaret Cruickshank,Joy Carmelina Indira Singh,Mark Farrar,James Peter Alan Lodge,Peter John Felsburg,Simon Richard Carding.  World Journal of Gastroenterology. 2005(22)



本文編號(hào)：3235031