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視黃酸缺乏對(duì)斑馬魚心臟發(fā)育影響的機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2021-01-21 22:03
  第一部分視黃酸缺乏斑馬魚胚胎模型的建立為了深入研究視黃酸缺乏對(duì)心臟發(fā)育的影響,我們首先探索建立視黃酸缺乏的斑馬魚胚胎模型。視黃醛脫氫酶2(raldh2)是關(guān)鍵的視黃酸合成酶,我們以raldh2為切入點(diǎn),通過化學(xué)遺傳學(xué)方法和基因knock-down兩種途徑,抑制raldh2,阻斷視黃酸的合成,從而造成斑馬魚胚胎發(fā)育過程中視黃酸缺乏,為進(jìn)一步觀察研究視黃酸缺乏對(duì)胚胎發(fā)育的影響奠定基礎(chǔ)。首先,我們選用raldh2抑制劑——對(duì)二乙氨基苯甲醛(DEAB)外源性處理斑馬魚胚胎。我們觀察到:外源性DEAB處理可以導(dǎo)致斑馬魚胚胎發(fā)育異常,且隨著DEAB處理濃度升高、處理時(shí)點(diǎn)前移,胚胎死亡率和畸形率逐漸上升。在斑馬魚胚胎孵育至原腸胚期,DEAB處理可導(dǎo)致心臟發(fā)育異常,表現(xiàn)為心前區(qū)水腫、心臟發(fā)育呈管狀、無向右環(huán)化或環(huán)化不完全、心房心室大小異常、心搏減弱、血流緩慢等,并出現(xiàn)體節(jié)彎曲、頭部畸小、胸鰭缺失異常表型。外源性視黃酸能有效援救DEAB的致畸作用,從而證實(shí)DEAB處理能有效特異地抑制視黃酸合成,造成斑馬魚胚胎發(fā)育過程中視黃酸缺乏。其后,我們利用嗎啡啉修飾的反義寡核苷酸(MO)技術(shù)在整體水平knock-d... 

【文章來源】:復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:96 頁

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【部分圖文】:

視黃酸缺乏對(duì)斑馬魚心臟發(fā)育影響的機(jī)制研究


斑馬魚心臟發(fā)育模式圖【StaiinerDY,2001」

胚胎,處理組,表型


胚胎很快死亡。1一10xlo一6mol/L的DEAB處理胚胎,胚胎也表現(xiàn)出頭部、胸鰭、心前區(qū)水腫、心臟畸形等,但嚴(yán)重程度較25xl0一 6mol/LDEAB處理組明顯減輕,死亡率明顯降低(圖4)。碑舞幾:lpMDEAB5泌笠DEAB圖4不同DEAB處理組36hPf胚胎表型 (x90)(側(cè)面觀,頭向左)A:對(duì)照組;B:lxlo一‘mol/LoEAB處理組;e:sx一。一6mol幾o(hù)EAB處理組;0:10x1o一 6mol/LDEAB處理組。與對(duì)照組比較,DEAB處理組胚胎出現(xiàn)心前區(qū)水腫、心臟發(fā)育異常、卵黃囊增大、頭部畸小、尾短彎曲等,而且隨著處理濃度升高,畸形程度逐漸加重。22外源性視黃酸對(duì)DEAB致畸的拮抗作用為了驗(yàn)證DEAB處理后斑馬魚胚胎發(fā)育的異常是通過抑制:aldhZ,造成RA缺乏所致,我們采用了外源性RA,觀察其對(duì)DEAB致畸作用的影響。我們發(fā)現(xiàn),在胚胎孵育shpf采用 1x10一gmol幾的外源性視黃酸(retinoi。acid

斑馬魚,表型,胚胎,處理組


(90.9士5.2次/分)、RA處理組(88.6士6.2次/分)、DEAB+RA處理組(89.8士6.5次/分)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值<0.05),而RA處理組、DEAB+RA處理組24hPf胚胎心率與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值>0.05)。(圖5,6)通過以上實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)lxlo.gmol/LRA本身并不致畸,卻能有效拮抗sxlo·6mol/LDEAB所導(dǎo)致的斑馬魚胚胎發(fā)育異常,進(jìn)而證實(shí)外源性DEAB處理能有效地抑制RA的合成,導(dǎo)致斑馬魚胚胎發(fā)育過程中RA缺乏。\、甲人么丫乍CO.圖5不同處理組的斑馬魚胚胎36hPh時(shí)表型比較(x30)A:對(duì)照組;B:sxlo一 6mol/LoEAB處理組;e:lxlo一gmol幾以處理組;n:sxlo一6mo一/LDEAB+l、10一gmol/LRA處理組。DEAB處理組胚胎表現(xiàn)出體節(jié)彎曲、頭部畸小、心前區(qū)水腫、心臟發(fā)育異常、心搏減弱、血流緩慢等表型。RA組和DEAB+RA組胚胎大體表型無明顯異常,與對(duì)照組比較無差異。


本文編號(hào):2991969

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