研究目的： 建立套式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(nested reverse transcription-polymerase chain reaction，nested RT-PCR)檢測臨床樣本鼻病毒(human rhinovirus，HRV)基因的方法，并進(jìn)一步對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析；用套式RT-PCR及直接免疫熒光(direct immunofluorescence assay，DFA)的方法對包括HRV在內(nèi)的引起小兒急性下呼吸道感染(acute low respiratory tract infection，ALRTI)的常見病毒病原進(jìn)行檢測，以了解上海地區(qū)ALRTI患兒病毒感染的現(xiàn)狀。 對象及方法： 1．收集2005年1月到2005年12月住院確診為共342例ALRTI患兒的深部鼻咽分泌物(nasopharyngeal secretion，NPS)標(biāo)本。 2．用套式RT-PCR的方法檢測NPS中的HRV基因，并進(jìn)一步對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析；用直接免疫熒光法(direct immunofluorescence assay，DFA)的方法檢測NPS中的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)、流感病毒(influenza virus，IFV)、副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)、腺病毒抗原(adenovirus，ADV)。 3．對各種病毒在小兒ALRTI中所占比例、性別、年齡、季節(jié)分布及臨床特點(diǎn)進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1．用套式RT-PCR的方法在342例ALRTI患兒的NPS標(biāo)本中，檢測到46例HRV為陽性(13.45％)；選取15份HRV陽性樣本用另一對引物擴(kuò)增并測序，測得的核苷酸序列經(jīng)過blast比較，與GeneBank中已知HRV序列的同源性在83％～97％之間；15份樣本序列之間核苷酸同源性在64.4％到98.4％之間，核苷酸變異在1.6％到48.3％之間；15份樣本序列在進(jìn)化樹中聚類為2簇；15份樣本序列變異度較大，可表現(xiàn)為核苷酸的點(diǎn)突變，也可是臨近幾個堿基同時突變，甚至有單個或臨近幾個堿基的核苷酸缺失及插入突變。 2．男性223例患兒中檢測出HRV陽性33例(14.7％)，女性119例患兒檢出HRV陽性13例(10.9％)男女陽性數(shù)之比為2.5：1，但男女檢出率無差異(X~2=1，P＞0.05)。HRV陽性患兒中，3歲以下嬰幼兒檢出例數(shù)有38例，占HRV總檢出數(shù)的82.6％；1歲以下患兒檢出27例占HRV總檢出數(shù)的58.7％。HRV致ALRTI全年可見，在3到5月為最高峰。 3．342例患兒中檢出RSV陽性64例(18.70％)。男性223例患兒中檢出RSV陽性46例(20.6％)，女性119例患兒中RSV陽性18例(15.1％)，男女陽性數(shù)之比為2.6：1，但男女檢出率無差異(X~2=2.41，P＞0.05)。RSV陽性患兒中，1歲以下嬰幼兒檢出例數(shù)有46例，占RSV總檢出數(shù)的71.8％。1歲以下患兒RSV的檢出率(47.90％)與1歲以上患兒RSV的檢出率(12.30％)比有顯著差異(X~2=4.03，P＜0.05)。RSV的檢出陽性率從2月份起逐漸下降至6到7月份達(dá)到最低；8月份起檢出率逐漸升高，到12月份達(dá)到最高。 4．342例ALRTI患兒中檢出ADV感染9例(2.63％)；342例中檢出PIV感染8例(2.3％)，其中1型PIV7例，2型PIV1例；342例中檢出IFV感染7例(2.0％)，其中A型IFV5例，B型IFV2例。 5．本組患兒病毒混合感染共有4例：RSV合并HRV感染1例，RSV合并ADV感染1例，RSV合并1型PIV感染1例，HRV合并A型IFV1例。 6．342例患兒總共檢出病毒陽性的病例130例，總檢出率為38％。男女感染數(shù)之比為2.8：1。男性感染率(43％)比女性感染率(28.60％)較高(X~2=6.9，P＜0.01)。1歲以下患兒的病毒感染陽性數(shù)為88例，占總陽性數(shù)的67.7％。六歲以上患兒的病毒檢出率(8.3％)較小于六歲組(40.3％)明顯下降(X~2=9.6，P＜0.01)。本組患兒的病毒檢出率有明顯的季節(jié)變化，1～3月、4～6月、7～9月及10～12月的檢出率分別為37.20％、30.10％、32.30％及53.40％。其中10～12月份的檢出率(53.40％)與1～9月份平均檢出率(33.8％)相比有顯著差異(X~2=9.35，P＜0.01)。 結(jié)論： 1．套式RT-PCR檢測用于HRV基因診斷具有快速、操作簡便及特異性較強(qiáng)的特點(diǎn)，可應(yīng)用于臨床檢測，HRV基因組具有高度變異的特點(diǎn)。 2．病毒病原在本地區(qū)小兒ALRTI中占有重要地位。小兒病毒性ALRTI以6歲以下患兒為常見，男孩偏多，尤以1歲以下年齡組多見。病毒性ALRTI有明顯的季節(jié)分布，本地區(qū)以第四季度為最高。 3．本地區(qū)小兒病毒性ALRTI中，以RSV及HRV占為主要地位，ADV、PIV及IFV相對少見。少見混合性病毒感染。 4．HRV所致小兒ALRTI以3歲以下兒章多見，尤以1歲以下為多。在本地區(qū)，HRV感染主要集中于春秋兩季。 5．RSV所致小兒ALRTI以1歲以下年齡段為主。季節(jié)以秋、冬、春三季氣溫較低的時節(jié)多發(fā)。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2006
【中圖分類】：R725.6
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
正文
    前言
    第一部分 上海地區(qū)急性下呼吸道感染患兒鼻病毒的巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測
        資料及方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
    第二部分 上海地區(qū)兒童急性下呼吸道鼻病毒感染的臨床橫斷面研究
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述1 鼻病毒的研究現(xiàn)狀
綜述2 禽流感研究進(jìn)展及其對兒童的危害
參編 《現(xiàn)代紅斑狼瘡病學(xué)》第1版，2005年1月人民軍醫(yī)出版社
    兒童和新生兒狼瘡
論文 小兒急性胰腺炎106例臨床分析
致謝
獲獎情況

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2872638