發(fā)布時(shí)間：2020-11-06 04:16

　　 研究目的： 建立套式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(nested reverse transcription-polymerase chain reaction，nested RT-PCR)檢測(cè)臨床樣本鼻病毒(human rhinovirus，HRV)基因的方法，并進(jìn)一步對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析；用套式RT-PCR及直接免疫熒光(direct immunofluorescence assay，DFA)的方法對(duì)包括HRV在內(nèi)的引起小兒急性下呼吸道感染(acute low respiratory tract infection，ALRTI)的常見(jiàn)病毒病原進(jìn)行檢測(cè)，以了解上海地區(qū)ALRTI患兒病毒感染的現(xiàn)狀。 對(duì)象及方法： 1．收集2005年1月到2005年12月住院確診為共342例ALRTI患兒的深部鼻咽分泌物(nasopharyngeal secretion，NPS)標(biāo)本。 2．用套式RT-PCR的方法檢測(cè)NPS中的HRV基因，并進(jìn)一步對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析；用直接免疫熒光法(direct immunofluorescence assay，DFA)的方法檢測(cè)NPS中的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)、流感病毒(influenza virus，IFV)、副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)、腺病毒抗原(adenovirus，ADV)。 3．對(duì)各種病毒在小兒ALRTI中所占比例、性別、年齡、季節(jié)分布及臨床特點(diǎn)進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1．用套式RT-PCR的方法在342例ALRTI患兒的NPS標(biāo)本中，檢測(cè)到46例HRV為陽(yáng)性(13.45％)；選取15份HRV陽(yáng)性樣本用另一對(duì)引物擴(kuò)增并測(cè)序，測(cè)得的核苷酸序列經(jīng)過(guò)blast比較，與GeneBank中已知HRV序列的同源性在83％～97％之間；15份樣本序列之間核苷酸同源性在64.4％到98.4％之間，核苷酸變異在1.6％到48.3％之間；15份樣本序列在進(jìn)化樹(shù)中聚類(lèi)為2簇；15份樣本序列變異度較大，可表現(xiàn)為核苷酸的點(diǎn)突變，也可是臨近幾個(gè)堿基同時(shí)突變，甚至有單個(gè)或臨近幾個(gè)堿基的核苷酸缺失及插入突變。 2．男性223例患兒中檢測(cè)出HRV陽(yáng)性33例(14.7％)，女性119例患兒檢出HRV陽(yáng)性13例(10.9％)男女陽(yáng)性數(shù)之比為2.5：1，但男女檢出率無(wú)差異(X~2=1，P＞0.05)。HRV陽(yáng)性患兒中，3歲以下嬰幼兒檢出例數(shù)有38例，占HRV總檢出數(shù)的82.6％；1歲以下患兒檢出27例占HRV總檢出數(shù)的58.7％。HRV致ALRTI全年可見(jiàn)，在3到5月為最高峰。 3．342例患兒中檢出RSV陽(yáng)性64例(18.70％)。男性223例患兒中檢出RSV陽(yáng)性46例(20.6％)，女性119例患兒中RSV陽(yáng)性18例(15.1％)，男女陽(yáng)性數(shù)之比為2.6：1，但男女檢出率無(wú)差異(X~2=2.41，P＞0.05)。RSV陽(yáng)性患兒中，1歲以下嬰幼兒檢出例數(shù)有46例，占RSV總檢出數(shù)的71.8％。1歲以下患兒RSV的檢出率(47.90％)與1歲以上患兒RSV的檢出率(12.30％)比有顯著差異(X~2=4.03，P＜0.05)。RSV的檢出陽(yáng)性率從2月份起逐漸下降至6到7月份達(dá)到最低；8月份起檢出率逐漸升高，到12月份達(dá)到最高。 4．342例ALRTI患兒中檢出ADV感染9例(2.63％)；342例中檢出PIV感染8例(2.3％)，其中1型PIV7例，2型PIV1例；342例中檢出IFV感染7例(2.0％)，其中A型IFV5例，B型IFV2例。 5．本組患兒病毒混合感染共有4例：RSV合并HRV感染1例，RSV合并ADV感染1例，RSV合并1型PIV感染1例，HRV合并A型IFV1例。 6．342例患兒總共檢出病毒陽(yáng)性的病例130例，總檢出率為38％。男女感染數(shù)之比為2.8：1。男性感染率(43％)比女性感染率(28.60％)較高(X~2=6.9，P＜0.01)。1歲以下患兒的病毒感染陽(yáng)性數(shù)為88例，占總陽(yáng)性數(shù)的67.7％。六歲以上患兒的病毒檢出率(8.3％)較小于六歲組(40.3％)明顯下降(X~2=9.6，P＜0.01)。本組患兒的病毒檢出率有明顯的季節(jié)變化，1～3月、4～6月、7～9月及10～12月的檢出率分別為37.20％、30.10％、32.30％及53.40％。其中10～12月份的檢出率(53.40％)與1～9月份平均檢出率(33.8％)相比有顯著差異(X~2=9.35，P＜0.01)。 結(jié)論： 1．套式RT-PCR檢測(cè)用于HRV基因診斷具有快速、操作簡(jiǎn)便及特異性較強(qiáng)的特點(diǎn)，可應(yīng)用于臨床檢測(cè)，HRV基因組具有高度變異的特點(diǎn)。 2．病毒病原在本地區(qū)小兒ALRTI中占有重要地位。小兒病毒性ALRTI以6歲以下患兒為常見(jiàn)，男孩偏多，尤以1歲以下年齡組多見(jiàn)。病毒性ALRTI有明顯的季節(jié)分布，本地區(qū)以第四季度為最高。 3．本地區(qū)小兒病毒性ALRTI中，以RSV及HRV占為主要地位，ADV、PIV及IFV相對(duì)少見(jiàn)。少見(jiàn)混合性病毒感染。 4．HRV所致小兒ALRTI以3歲以下兒章多見(jiàn)，尤以1歲以下為多。在本地區(qū)，HRV感染主要集中于春秋兩季。 5．RSV所致小兒ALRTI以1歲以下年齡段為主。季節(jié)以秋、冬、春三季氣溫較低的時(shí)節(jié)多發(fā)。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2006
【中圖分類(lèi)】：R725.6
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
正文
    前言
    第一部分 上海地區(qū)急性下呼吸道感染患兒鼻病毒的巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)
        資料及方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
    第二部分 上海地區(qū)兒童急性下呼吸道鼻病毒感染的臨床橫斷面研究
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述1 鼻病毒的研究現(xiàn)狀
綜述2 禽流感研究進(jìn)展及其對(duì)兒童的危害
參編 《現(xiàn)代紅斑狼瘡病學(xué)》第1版，2005年1月人民軍醫(yī)出版社
    兒童和新生兒狼瘡
論文 小兒急性胰腺炎106例臨床分析
致謝
獲獎(jiǎng)情況

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 陳沙力,傅文永,郭惠君,冷麗,武玉梅,陳新梅,鄭永晨,黃曉苓;1017例急性呼吸道病毒感染病原學(xué)研究[J];臨床兒科雜志;1993年06期

2 劉國(guó)榮,申昆玲,江載芳,姚德秀,買(mǎi)穎;北京地區(qū)呼吸道合胞病毒感染的臨床特點(diǎn)[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2002年03期

3 王亞娟,姚德秀,燕潤(rùn)菊,王春蓮,幺遠(yuǎn),Anne Jaakkola,Maija Leinonen,Didier Leboulleux,Heikki Peltola,楊永弘;北京地區(qū)兒童急性下呼吸道感染的病原學(xué)研究[J];中華兒科雜志;2000年03期

4 謝健屏,常汝虛,何翠娟,謝集明,賴(lài)桂香,萬(wàn)根平;1978～1996年廣州地區(qū)呼吸道合胞病毒感染分析[J];中華兒科雜志;1997年08期

5 申昆玲,買(mǎi)潁,劉亞誼,江載芳,照日格圖;用免疫熒光方法檢測(cè)鼻咽分泌物中多種呼吸道病毒抗原[J];中華兒科雜志;1999年07期

6 廖斌,車(chē)?yán)?曹力,鄧潔,王芳,朱汝南,趙林清,吳榮艷,韓晶,錢(qián)淵,盧競(jìng);891例急性呼吸道感染患者病毒病原學(xué)調(diào)查[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2005年01期

7 孫麗霞,黃敬孚,張華;天津地區(qū)小兒下呼吸道感染病毒病原譜的探討[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2004年24期

本文編號(hào)：2872638