本文關(guān)鍵詞：小鼠甲狀腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探索小鼠甲狀腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性,比較其與骨實(shí)質(zhì)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞是否具有差異,為臨床研究自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)病機(jī)制提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、采用組織貼壁培養(yǎng)法,體外無(wú)菌分離并培養(yǎng)C57BL/6小鼠甲狀腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(Thyroid derived Mesenchymal Stem Cells,TMSCs),以小鼠骨實(shí)質(zhì)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone essence derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)作對(duì)照,通過(guò)倒置顯微鏡觀察貼壁細(xì)胞形態(tài),然后利用不同誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)貼壁細(xì)胞向成脂肪、成骨分化,油紅O染色檢測(cè)成脂分化能力,堿性磷酸酶及Von Kossa染色檢測(cè)成骨分化能力,Q-PCR檢測(cè)相關(guān)成脂肪和成骨關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。進(jìn)一步,采用CCK8法檢測(cè)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型和細(xì)胞周期。2、在獲得小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs的基礎(chǔ)上,采用淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(Lymphocyte transformation test,LTT)和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(Mixed Lymphocyte Reaction,MLR)檢測(cè)MSCs對(duì)T細(xì)胞增殖的免疫抑制功能。進(jìn)一步,將甲狀腺來(lái)源MSCs與DC共培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察DC形態(tài)改變,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面抗原的表達(dá),Q-PCR法在m RNA水平檢測(cè)促炎因子IFN-γ、TNF-α和IL-12的表達(dá)水平。3、建立異體鼠尾皮瓣移植模型,檢測(cè)甲狀腺來(lái)源MSCs體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)及修復(fù)受損組織的能力。將小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs通過(guò)尾靜脈輸注模型小鼠體內(nèi),每日觀察移植皮瓣炎癥反應(yīng)程度和愈合情況,第7天行病理學(xué)檢測(cè)移植皮瓣組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度。結(jié)果:1、從小鼠甲狀腺和骨實(shí)質(zhì)組織中均可培養(yǎng)出貼壁生長(zhǎng)的成纖維樣的細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞表型,兩種細(xì)胞均陽(yáng)性表達(dá)CD29、CD140、CD105和Sca-1,而不表達(dá)CD34、CD45、CD31、CD11b和MHCII。進(jìn)一步,將細(xì)胞向脂肪和骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化,結(jié)果顯示,細(xì)胞可被誘導(dǎo)成脂肪,油紅染色可見(jiàn)有大量脂滴出現(xiàn),Q-PCR檢測(cè)可見(jiàn)脂肪分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα和PPARγ的表達(dá);成骨誘導(dǎo)分化后,堿性磷酸酶染色可見(jiàn)堿性磷酸酶活性增高,Von Kossa染色可見(jiàn)鈣化骨結(jié)節(jié)形成,Q-PCR檢測(cè)可見(jiàn)成骨關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Run X2和Osteocalcin的表達(dá),說(shuō)明成功獲得小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs。利用CCK8法檢測(cè)甲狀腺來(lái)源MSCs的生長(zhǎng)特性,結(jié)果顯示,細(xì)胞呈S型曲線(xiàn)生長(zhǎng),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期,可見(jiàn)80%以上細(xì)胞分布在G0/G1期,提示獲得的貼壁細(xì)胞符合干細(xì)胞的生長(zhǎng)特性。2、在獲得TMSCs的基礎(chǔ)上,針對(duì)MSCs獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行LLT和MLR檢測(cè)。LTT檢測(cè)TMSCs對(duì)Con A刺激的T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響,結(jié)果表明,TMSCs可有效抑制Con A刺激的T淋巴細(xì)胞增殖能力,且隨著TMSCs量的增加,其抑制作用顯著增強(qiáng)(P0.05);利用異體淋巴細(xì)胞刺激的MLR實(shí)驗(yàn)也得到相同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,即MSCs抑制異體淋巴細(xì)胞抗原刺激的T細(xì)胞增殖能力隨著MSCs數(shù)量的增加,其抑制作用顯著增強(qiáng)(P.05)。3、DC作為抗原遞呈細(xì)胞,在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,同時(shí)MSCs對(duì)DC功能也具有重要的調(diào)節(jié)作用。為此,我們?cè)隗w外利用MSCs與DC共培養(yǎng)體系,觀察甲狀腺來(lái)源MSCs對(duì)DC功能的影響,結(jié)果顯示,與甲狀腺來(lái)源MSCs共培養(yǎng)的DC,其形態(tài)表現(xiàn)為細(xì)胞樹(shù)狀突起少而短;流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC細(xì)胞表面抗原表達(dá),可見(jiàn)CD11c、CD80、CD86和MHCII表達(dá)量均顯著下降;Q-PCR檢測(cè)相關(guān)促炎因子IFN-γ、TNF-α和IL-12 m RNA的表達(dá)亦顯著下降(P0.05)。4、利用小鼠尾部皮瓣移植模型檢測(cè)甲狀腺來(lái)源MSCs的體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能和組織修復(fù)能力,結(jié)果表明,TMSCs與BMSCs相似,具有修復(fù)鼠尾皮瓣損傷的能力,皮瓣損傷愈合較對(duì)照組快。病理切片結(jié)果顯示,TMSC治療小鼠皮瓣組淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度較對(duì)照組低,提示TMSCs可有效促進(jìn)皮瓣損傷愈合,減輕炎癥反應(yīng)。結(jié)論:1、成功分離獲得小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs,其細(xì)胞形態(tài)、免疫表型、誘導(dǎo)分化能力和細(xì)胞增殖特性均與骨實(shí)質(zhì)來(lái)源MSCs相似。2、通過(guò)體外LTT和MLR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠TMSCs具有免疫調(diào)節(jié)能力,在體外可抑制Con A和異種抗原刺激的T淋巴細(xì)胞的增殖,且具有明顯的劑量依賴(lài)性。同時(shí),TMSCs對(duì)抗原遞呈細(xì)胞DC的免疫功能也具有調(diào)節(jié)作用,可顯著抑制DC的成熟。3、體內(nèi)異體鼠尾皮瓣移植模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,TMSCs可抑制移植術(shù)后產(chǎn)生的異體免疫排斥反應(yīng),誘導(dǎo)免疫耐受,對(duì)受損組織具有較強(qiáng)的修復(fù)能力,可以有效減輕炎癥反應(yīng)及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度。上述研究結(jié)果表明,小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs具有與骨實(shí)質(zhì)來(lái)源MSCs相似的生物學(xué)特性,為今后深入探討自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)病機(jī)制提供可靠的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：甲狀腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 骨實(shí)質(zhì)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 生物學(xué)特性 免疫調(diào)節(jié)功能 組織修復(fù)能力
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R725.8
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs的體外分離培養(yǎng)和鑒定16-40
• 1.1 對(duì)象和方法17-25
• 1.2 結(jié)果25-37
• 1.3 討論37-39
• 1.4 小結(jié)39-40
• 二、小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs的體外免疫調(diào)節(jié)功能研究40-54
• 2.1 對(duì)象和方法41-44
• 2.2 結(jié)果44-51
• 2.3 討論51-53
• 2.4 小結(jié)53-54
• 三、小鼠甲狀腺來(lái)源MSCs的體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能和組織修復(fù)能力研究54-59
• 3.1 對(duì)象和方法55-56
• 3.2 結(jié)果56-57
• 3.3 討論57-58
• 3.4 小結(jié)58-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明66-67
• 綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞在治療自身免疫性疾病中的研究進(jìn)展67-75
• 綜述參考文獻(xiàn)72-75
• 致謝75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 楊華強(qiáng);李紅;胡明均;李玉玲;覃駿;鮑紅霞;呂曉娟;;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞輔助治療難治性類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床觀察[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年21期

2 黎陽(yáng);魏菁;吳燕峰;王瀟娉;黃科;林永潮;黃紹良;方建培;;間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)臍血CIK/NK細(xì)胞CD69表達(dá)及培養(yǎng)體系中T調(diào)節(jié)細(xì)胞量比的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2009年05期

3 楊志宏;上官守琴;楊萍;陸華;王鵬;劉小偉;田詩(shī)政;;骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植促進(jìn)皮瓣缺血再灌注損傷修復(fù)的機(jī)制初步探討[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：小鼠甲狀腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：286941