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運(yùn)動(dòng)康復(fù)訓(xùn)練對(duì)大鼠缺氧缺血性腦損傷后學(xué)習(xí)記憶的影響及可能機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2020-10-23 07:54
   第一部分新生鼠缺氧缺血腦損傷模型的建立和驗(yàn)證 目的:成功建立新生鼠缺氧缺血性腦損傷模型并予以驗(yàn)證。 方法:選7日齡SD大鼠32只,分為假手術(shù)組和缺氧缺血腦損傷模型(HIBD)組。HIBD組大鼠經(jīng)乙醚麻醉后結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈,置于缺氧箱內(nèi)持續(xù)通入8%的氮氧混合氣體2 h進(jìn)行缺氧缺血干預(yù);假手術(shù)組只游離而不結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈,亦不予缺氧處理。于缺氧結(jié)束后即刻觀察行為學(xué)改變,24 h后進(jìn)行感覺運(yùn)動(dòng)神經(jīng)反射評(píng)定,隨即斷頭取腦行TTC染色觀察腦組織缺氧缺血梗死灶,各組剩余大鼠于缺氧結(jié)束4 w后斷頭取腦進(jìn)行HE染色觀察海馬組織病理改變。 結(jié)果:與假手術(shù)組相比,HIBD組大鼠缺氧24 h后均有不同程度的異常行為學(xué)表現(xiàn),其翻正反射、懸崖回避反射和趨地性反射均較假手術(shù)組明顯延遲。腦組織切片TTC染色顯示HIBD組大鼠皮層和皮層下腦組織出現(xiàn)面積不等的梗死灶,而假手術(shù)組大鼠未見確切梗死灶。缺氧4 w后行病理學(xué)檢查顯示HIBD組大鼠建模側(cè)大腦半球體積較對(duì)側(cè)半球縮小,并伴有液化和空洞的形成,H.E.染色后光鏡檢查發(fā)現(xiàn)HIBD組大鼠建模側(cè)海馬CA1區(qū)出現(xiàn)大量變性和壞死的神經(jīng)元,膠質(zhì)細(xì)胞增生,細(xì)胞排列結(jié)構(gòu)紊亂;而假手術(shù)組大鼠腦組織肉眼及鏡下觀察均未見明顯異常。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用Rice-Vannucci法成功的建立新生鼠缺氧缺血性腦損傷模型。 第二部分運(yùn)動(dòng)康復(fù)訓(xùn)練對(duì)大鼠缺氧缺血性腦損傷后學(xué)習(xí)記憶的影響及可能機(jī)制研究 目的:探討運(yùn)動(dòng)康復(fù)對(duì)缺氧缺血性腦損傷(HIBD)大鼠腦結(jié)構(gòu)和空間學(xué)習(xí)記憶的影響。 方法:7日齡SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、HIBD非運(yùn)動(dòng)組及HIBD運(yùn)動(dòng)組。HIBD運(yùn)動(dòng)組于建模2 w后開始連續(xù)4 w的運(yùn)動(dòng)康復(fù)。而后通過神經(jīng)功能評(píng)分和Morris水迷宮檢測(cè)各組大鼠運(yùn)動(dòng)功能和空間學(xué)習(xí)記憶能力,稱取雙側(cè)大腦半球重量,H.E.染色后光鏡下計(jì)數(shù)海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)目,透射電鏡觀察海馬突觸超微結(jié)構(gòu),最后通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)海馬磷酸化CaMKII及BDNF表達(dá)水平。 結(jié)果:運(yùn)動(dòng)康復(fù)4 w后HIBD運(yùn)動(dòng)組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分(0.46±0.18)和假手術(shù)組大鼠評(píng)分(0.50±0.36)均明顯優(yōu)于HIBD非運(yùn)動(dòng)組(1.04±0.33) ,HIBD運(yùn)動(dòng)組與假手術(shù)組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在各測(cè)試時(shí)間點(diǎn)HIBD非運(yùn)動(dòng)組大鼠水迷宮平均尋臺(tái)潛伏期均較HIBD運(yùn)動(dòng)組和假手術(shù)組長,穿越平臺(tái)次數(shù)(2.62±0.74次)較HIBD運(yùn)動(dòng)組(5.25±0.98次)和假手術(shù)組(4.62±1.19次)少,HIBD運(yùn)動(dòng)組和假手術(shù)組間平均尋臺(tái)潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。腦重測(cè)定示HIBD非運(yùn)動(dòng)組、HIBD運(yùn)動(dòng)組大鼠左側(cè)平均腦重均低于假手術(shù)組(0.68±0.04 g) ,HIBD非運(yùn)動(dòng)組(0.46±0.02 g)又低于HIBD運(yùn)動(dòng)組(0.63±0.06 g) ;三組大鼠右側(cè)平均腦重間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。H.E.染色觀察示HIBD非運(yùn)動(dòng)組大鼠左側(cè)海馬出現(xiàn)大量變性壞死的神經(jīng)元,HIBD運(yùn)動(dòng)組大鼠左側(cè)海馬亦可見變性壞死神經(jīng)元,但程度較HIBD非運(yùn)動(dòng)組減輕,假手術(shù)組左側(cè)海馬未見明顯異常;HIBD非運(yùn)動(dòng)組和HIBD運(yùn)動(dòng)組大鼠左側(cè)海馬CA1區(qū)400倍光鏡下平均每視野存活神經(jīng)元數(shù)目均較假手術(shù)組(63.0±8.5個(gè))明顯減少,HIBD非運(yùn)動(dòng)組(47.1±6.32個(gè))又較HIBD運(yùn)動(dòng)組(56.1±11.56個(gè))少。此外,透射電鏡示HIBD非運(yùn)動(dòng)組大鼠左側(cè)海馬突觸前膜囊泡減少,突觸間隙增寬,突觸后致密物變薄,HIBD運(yùn)動(dòng)組和假手術(shù)組左側(cè)海馬突觸結(jié)構(gòu)未見明顯異常。最后,免疫組化結(jié)果顯示HIBD運(yùn)動(dòng)組大鼠左側(cè)海馬CA1區(qū)磷酸化CaMKII平均光密度值(0.2833±0.0208)和假手術(shù)組磷酸化CaMKII平均光密度值(0.2988±0.0196)均明顯高于HIBD非運(yùn)動(dòng)組(0.2259±0.0201) ,HIBD運(yùn)動(dòng)組與假手術(shù)組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而HIBD運(yùn)動(dòng)組、HIBD非運(yùn)動(dòng)組大鼠左側(cè)海馬CA1區(qū)BDNF平均光密度值均較假手術(shù)組(0.1363±0.0078)高,HIBD運(yùn)動(dòng)組(0.2352±0.0151)又明顯高于HIBD非運(yùn)動(dòng)組(0.1788±0.0092)。 結(jié)論:HIBD運(yùn)動(dòng)組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力明顯優(yōu)于HIBD非運(yùn)動(dòng)組,同時(shí)其海馬CA1區(qū)磷酸化CaMKII和BDNF表達(dá)水平均明顯高于HIBD非運(yùn)動(dòng)組,提示運(yùn)動(dòng)康復(fù)通過上調(diào)海馬區(qū)磷酸化CaMKII和BDNF表達(dá)水平來促進(jìn)缺氧缺血腦損傷后大鼠海馬神經(jīng)元存活,增強(qiáng)突觸結(jié)構(gòu)可塑性,改善受損的空間學(xué)習(xí)記憶能力。
【學(xué)位單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2010
【中圖分類】:R722.12
【部分圖文】:

缺氧缺血,反射時(shí)間,大鼠,新生鼠


注:與假手術(shù)組相比,*:P < 0.01。圖 2:各組大鼠缺氧缺血 24 h 后懸崖回避反射時(shí)間 ( x ± SD)Graph 2 Cliff aversion reflex performance in rats subjected to hypoxic-ischemic insurats subjected to a sham-operation ( x ± SD)新生鼠HIBD模型的驗(yàn)證懸崖回避反射驗(yàn)證HIBD新生鼠模型懸崖回避反射024681012假手術(shù)組 HIBD組時(shí)崖回避反射懸間(單位:秒)a注:a:P < 0.01, 與假手術(shù)組相比024681012懸回避崖射反間時(shí)(位單:秒)*

TTC染色,大體解剖,大腦,大鼠


圖 1-1 假手術(shù)組大鼠腦片 TTC 染色Fig1-1 TTC staining of brain slice of rats in controlgroup圖 1-2 HIBD 組大鼠腦片 TTC 染色Fig1-2 TTC staining of brain slice of rats in HIBgroup圖 1-3 假手術(shù)組大鼠大腦大體解剖Fig1-3 Cerebral hemispheres of rats in control group圖 1-4 HIBD 組大鼠大腦大體解剖Fig1-4 Cerebral hemispheres of rats in HIBD group

TTC染色,大體解剖,大腦,大鼠


圖 1-1 假手術(shù)組大鼠腦片 TTC 染色Fig1-1 TTC staining of brain slice of rats in controlgroup圖 1-2 HIBD 組大鼠腦片 TTC 染色Fig1-2 TTC staining of brain slice of rats in HIBgroup圖 1-3 假手術(shù)組大鼠大腦大體解剖Fig1-3 Cerebral hemispheres of rats in control group圖 1-4 HIBD 組大鼠大腦大體解剖Fig1-4 Cerebral hemispheres of rats in HIBD group
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本文編號(hào):2852751

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