發(fā)布時(shí)間：2020-10-18 14:20

　　 第一部分雌激素通過Notch信號通路調(diào)控肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管細(xì)胞分化及肝內(nèi)膽管發(fā)育目的:研究雌激素通過Notch信號通路調(diào)控肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管細(xì)胞分化及膽管發(fā)育的機(jī)制。方法:(1)以流式細(xì)胞術(shù)從C57BL/6CrSlc胎鼠的肝臟提取DLK1陽性的肝母細(xì)胞,空白對照組不做任何處理,實(shí)驗(yàn)組分別用lnmol/L、10nmol/L、100nmol/L雌二醇干預(yù)24小時(shí),雌二醇10nmol/L以及Notch信號通路阻斷劑DAPT40umol/L干預(yù)24小時(shí)。以real time PCR方法定量檢測Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Jagged1、DLL4 的 mRNA;以激光共聚焦免疫熒光檢測 Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Jagged1、DLL4 的蛋白表達(dá)水平;(2)空白對照組的肝母細(xì)胞不做任何處理,實(shí)驗(yàn)組用不同濃度的雌二醇(lnmol/L、10nmol/L、100nmol/L),或不同濃度的雌二醇聯(lián)合 DAPT干預(yù)24小時(shí),以流式細(xì)胞術(shù)檢測SOX9及OPN雙陽性的細(xì)胞百分比,觀察雌激素對肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分化的影響;(3)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,將C57BL/6CrSlc孕鼠隨機(jī)分為空白對照組、雌二醇組、雌二醇+DAPT組和他莫昔芬組,空白對照組不作任何處理,雌二醇組孕6天起腹腔注射雌二醇0.6mg/kg.d,雌二醇+DAPT組孕6天起腹腔注射雌二醇0.6mg/kg.d,聯(lián)合皮下注射DAPT 10mg/kg.d,他莫昔芬組使用他莫昔芬灌胃,劑量為0.4mg/kg.d。分別取孕第14、18天胎鼠及新生小鼠肝臟進(jìn)行檢測,以real time PCR法檢測Notch1、Notch2、Jagged1的mRNA水平,免疫組化法檢測Notch1、Notch2、Jagged1的蛋白表達(dá)水平,并采用HE染色法觀察新生小鼠肝內(nèi)膽管發(fā)育情況。結(jié)果:(1)體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)雌激素可以劑量依賴性地促進(jìn)肝母細(xì)胞Notch信號通路中 Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Jagged1、DLL4 的 mRNA 轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá);(2)雌激素促進(jìn)肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管細(xì)胞分化;(3)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)雌激素可以激活胎鼠肝臟Notch信號通路,并促進(jìn)胎鼠肝內(nèi)膽管發(fā)育。結(jié)論:雌激素可促進(jìn)Notch信號通路活化,促進(jìn)小鼠肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管細(xì)胞分化及肝內(nèi)膽管的發(fā)育。第二部分 鈉離子/�；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白缺陷患兒的臨床研究目的:NTCP(Na+/taurocholate Cotransporting Polypeptide)缺陷近年來成為研究熱點(diǎn),該疾病患者被認(rèn)為具有臨床癥狀輕,肝功能受損輕的特點(diǎn)。然而,關(guān)于NTCP缺陷患兒的肝臟病理改變特點(diǎn)尚無相關(guān)報(bào)道。本文通過對13例NTCP缺陷患兒的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查及肝臟病理改變特點(diǎn)等進(jìn)行綜合評估,為臨床工作中對該病的診斷和治療等提供理論依據(jù)。方法:本研究提取2012年8月到2018年10月入住我院兒科的13例NTCP缺陷患兒的臨床數(shù)據(jù),進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果:13例NTCP缺陷患兒(男/女為2.25:1,1個(gè)月到5.5歲,平均年齡為1.36歲)均存在SLC10A1基因突變。所有患兒發(fā)育正常。8例患兒(8/13)表現(xiàn)出肉眼可見的黃疸,12例患兒(12/13)有高膽紅素血癥。共有11例患兒進(jìn)行了肝臟穿刺檢查,肝臟病理改變主要表現(xiàn)為輕度的慢性炎癥。一例患兒(1/13)合并泥沙樣膽結(jié)石。結(jié)論:(1)對于臨床癥狀輕微,通過體檢等偶然發(fā)現(xiàn)的高膽汁酸血癥患兒,應(yīng)考慮NTCP缺陷的可能,進(jìn)行SLC10A1基因的篩查;(2)對于膽汁淤積性肝病的患兒,應(yīng)考慮NTCP缺陷的可能,進(jìn)行SLC10A1基因的篩查;(3)對于不明原因膽結(jié)石的患兒,應(yīng)考慮NTCP缺陷的可能,進(jìn)行SLC10A1基因的篩查。第三部分 膽道閉鎖與非膽道閉鎖性肝內(nèi)膽汁淤積癥診斷方法的評估目的:膽道閉鎖與非膽道閉鎖性肝內(nèi)膽汁淤積癥有多種鑒別診斷方法,本文對不同的診斷方法進(jìn)行評估,為臨床上快速、早期和準(zhǔn)確的鑒別診斷提供理論依據(jù)。方法:本研究回顧性分析了自2007年5月至201 1年6月收治我院兒童感染消化專科的396例阻塞性黃疸嬰兒。對所有患者進(jìn)行肝功能檢測、腹部彩超及十二指腸引流液檢查。部分患兒行肝膽核素掃描、磁共振胰膽管造影及經(jīng)皮肝臟穿刺檢查。膽道閉鎖的診斷以術(shù)中膽管造影及肝臟組織病理學(xué)檢查為準(zhǔn)。對不同診斷方法進(jìn)行準(zhǔn)確性、敏感性、特異性、陽性預(yù)測價(jià)值和陰性預(yù)測價(jià)值的評估。結(jié)果:178例患者(男性患兒108例,女性患兒70例;平均年齡為58 ± 30天)診斷為膽道閉鎖。218例患者(男性患兒136例,女性患兒82例;平均年齡為61±24天)診斷為非膽道閉鎖肝內(nèi)膽汁淤積癥。膽道閉鎖與非膽道閉鎖肝內(nèi)膽汁淤積癥的鑒別診斷方法中,臨床表現(xiàn)、肝臟腫大、大便顏色、血谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、十二指腸引流液顏色、十二指腸引流液膽汁酸濃度、超聲檢查膽囊大小、超聲檢查門脈區(qū)高回聲區(qū)、核素肝膽動(dòng)態(tài)顯像、磁共振胰膽管造影及肝臟活檢的準(zhǔn)確性分別是76.0%、51.8%、84.3%、70.0%、92.4%、98.0%、90.4%、67.2%、85.3%、83.2%和 96.6%,敏感性分別是 83.1%、87.6%、96.1%、73.7%、90.4%、100%、92.7%、27.5%、100%、89.0%和 97.4%,特異性分別是 70.2%、77.5%、74.8%、67.0%、94.0%、96.3%、88.5%、99.5%、73.3%、75.4%和 94.3%,陽性預(yù)測值分別是 69.0%、72.6%、75.7%、64.6%、92.5%、95.7%、86.8%、98.0%、75.4%、82.6%和 98.0%,陰性預(yù)測值分別是 83.6%、8.5%、95.9%、75.7%、92.3%、100%、84.2%、93.7%、100%、84.0%和 92.6%。結(jié)論:膽道閉鎖與非膽道閉鎖肝內(nèi)膽汁淤積癥的每一種鑒別診斷方法在臨床上都有其使用價(jià)值。十二指腸引流液的顏色及成分檢查快速、準(zhǔn)確,在以上鑒別診斷中臨床實(shí)用價(jià)值高。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R725.7
【部分圖文】：

圖 1 雌激素促進(jìn)肝母細(xì)胞 Notch 信號通路受體蛋白的表達(dá) 體外實(shí)驗(yàn)中，雌激素可以劑量依賴性地促進(jìn)肝母細(xì)胞中 Notch1（圖 1-左上）、Notch2（圖 1-右上）、Notch3（圖 1-左下）及 Notch4（圖 1-右下）蛋白的表達(dá)；雌二醇 10nmol/L+ DAPT（40μmol/L）組與雌二醇 10nmol/L 組相比，受體蛋白表達(dá)水平下降，提示 Notch通路阻斷劑 DAPT 可以部分逆轉(zhuǎn)雌激素對 Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 蛋白表達(dá)的促進(jìn)作用。2. 雌激素可以促進(jìn)肝母細(xì)胞 Notch 信號通路配體 Jagged1、DLL4 的表達(dá)流式細(xì)胞術(shù)分選 DLK1 陽性的肝母細(xì)胞，對照組不作任何處理，實(shí)驗(yàn)組分別用二醇 1nmol/L、雌二醇 10nmol/L、雌二醇 100nmol/L、雌二醇 10nmol/L+ DAP（40μmol/L），干預(yù) 24h。干預(yù)完成后，收獲細(xì)胞，以激光共聚焦免疫熒光方法檢測種 Notch 配體的蛋白表達(dá)水平。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文流式細(xì)胞術(shù)分選 DLK1 陽性的肝母細(xì)胞，對照組不作任何處理，實(shí)驗(yàn)組 1nmol/L、雌二醇 10nmol/L、雌二醇 100nmol/L 及雌二醇 10nmol/Lμmol/L）干預(yù) 24h。干預(yù)完成后，收獲細(xì)胞，以 real time PCR 檢測 Notc種受體及兩種配體的 mRNA 水平。

29圖 4 雌激素促進(jìn)肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管細(xì)胞分化 體外實(shí)驗(yàn)中，雌激素呈劑量依賴性地促進(jìn)肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管細(xì)胞分化。聯(lián)用 Notch 信號通路阻斷劑 DAPT（40umol/L）后，雌激素促進(jìn)肝母細(xì)胞向肝內(nèi)膽管細(xì)胞分化的作用被抑制。* p<0.05
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本文編號：2846409