目的通過建立幼鼠內(nèi)毒素血癥肝損傷的動物模型并予以胰島素干預,研究胰島素對LPS誘導的幼鼠肝細胞釋放炎癥因子TNF-α和IL-6的影響,以及TNF-α和IL-6與NF-κB活化水平的關(guān)系,了解胰島素是否對內(nèi)毒素血癥所致的幼鼠肝損傷具有保護作用,并探討其作用機制。 方法18日齡wistar幼鼠72只隨機分正常對照組(腹腔注射生理鹽水,n=8)、內(nèi)毒素血癥組(LPS組,腹腔注射LPS,n=32)和胰島素治療組(腹腔注射LPS+皮內(nèi)注射胰島素,n=32)。LPS組和胰島素治療組LPS(5mg/kg)腹腔注射建立幼鼠內(nèi)毒素血癥模型,胰島素組同時給予胰島素(4IU/kg)皮內(nèi)注射;正常對照組腹腔注射等容量生理鹽水;LPS組和胰島素治療組根據(jù)建模后取標本時間的不同分2h、6h、12h、24h四個亞組,每個亞組8只,取肝臟制備石蠟切片和組織勻漿,普通光鏡、電鏡觀察各組肝細胞的病理改變情況,ELISA法測定肝組織勻漿TNF-α和IL-6的含量,快速血糖儀檢測幼鼠血糖濃度,賴氏法檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的濃度,免疫組化法檢測肝組織NF-κB的活化水平,并對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果:1、組織學改變:光鏡下正常對照組肝細胞完整,結(jié)構(gòu)清晰,未見變性和壞死;LPS組肝組織損傷較明顯,肝細胞出現(xiàn)腫脹、空泡樣變性、匯管區(qū)有炎癥細胞浸潤,點片狀、大片狀壞死等,以6h最明顯,損傷等級評分與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05),胰島素治療組肝組織損傷均輕于LPS組,6h損傷等級評分與LPS組比較差異有統(tǒng)計學意義,p＜0.05;電鏡下正常對照組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)光滑,核膜完整,染色質(zhì)均勻分布于核內(nèi);LPS組見胞漿疏松,線粒體腫脹,脊斷裂或消失,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,核膜出現(xiàn)切跡,染色質(zhì)濃縮在核周邊,核仁碎裂,損害以6h組最為明顯;胰島素治療組各時點肝組織病理損害較LPS組輕。2、血糖水平:胰島素治療組在2h和6h比正常對照組、LPS組低(p＜0.05),12h、24h各組之間差異均無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。3、ALT水平:2h各組之間差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05),LPS組6h、12h及24h均較正常對照組高(p＜0.05),胰島素治療組在6h、12h、24h均較LPS組降低(p＜0.05),但仍高于正常對照組。4、肝細胞NF-κBp65蛋白的表達:LPS組核陽性細胞百分比較正常對照組高,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);胰島素治療組2h、6hNF-κBp65核陽性細胞百分比均明顯低于LPS組(p＜0.05)。5、肝組織TNF-α、IL-6水平:在6h、12hLPS組高于正常對照組和胰島素治療組,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。 結(jié)論1.內(nèi)毒素血癥可引起肝損傷,導致肝細胞的破壞和肝功能的改變,說明肝臟是重癥感染的受累器官之一;2.NF-κB的活化參與了內(nèi)毒素血癥肝損傷的發(fā)生,其機理可能是通過介導炎性介質(zhì)TNF-α和IL-6的合成使肝細胞發(fā)生炎性損傷;3.胰島素對內(nèi)毒素血癥肝損傷有保護作用,其機理可能是通過降低NF-κB的活化,減少TNF-α和IL-6的合成和釋放,降低應激反應時期的血糖而起作用,但確切的機制有待進一步研究。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2009
【中圖分類】：R720.597
【部分圖文】：

1.25士0.463*注:與正常對照比較*p<0.05;與LPS組比較#p<0.05圖1一1:300250轟1幾;萬i姐尋一硯口LPS‘;自腳~_200

血糖水平胰島素治療組在Zh和6h低于正常對照組和LPS組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，12h、24h各組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)(見表2、圖3A);ALT水平在Zh各組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，LPS組6h、12h、24h均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);胰島素治療組12h、24h均低于LPS組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)(見表3、圖3B)。表2幼年大鼠各組血糖的比較(x士S)細l一一一一一一一一一一衛(wèi)!絲衛(wèi)衛(wèi)里衛(wèi)二衛(wèi)二一一一一~—一一一一2h6h12h24h正常對照組LPS組胰島素治療組 5.3士 1.07 6.0士0.50 2.1士1.50*# 4.8士2.23 1.5士0.83*# 5.1士 1.51 5.9士1.18 5.2士1.39 5.0士1.90表3幼年大鼠各組ALT的比較(x士S)組別ALT(u/1)2h6h12h24h正常對照組LPS組胰島素治療組15.8士2.6234.5士23.7225.4士16.1552.7士26.17*33.2士14.9975.9士28.48* 51.5士13.07*#49.3士23.86*33.8士1.67#注:*與NS組比較尸<0.05;#與LPS組相同時間點比較尸<0.05。

但仍高于正常對照組;胰島素治療組各時間點NF一 KBp65核陽性細胞百分比均高于正常對照組，但Zh、6h低于LPS組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)(見表4、圖4一l、圖4一2)。表4幼年大鼠各組肝細胞NF一KBP“的變化(x士S)組別一一一一一一一一一一業(yè)巡些燮壑些些衛(wèi)燮一一一一一12h24h正常對照組LPS組胰島素治療組 2.52士0.5126.66士2.30*20.30土1.61*#19.94士3.77*16.22士2.58*12.78士6.70*13.38土2.17*15.12士5.98*12.66士2.28*注:*與NS組比較p<0.05:#與LPS組相同時間點比較p<0.05。圖4一l:3000扭}別門一拱m因目25‘00LpS-彭之冬2000，500，000承的gd山"己Nu門.盞 5.00000】】】 )))】】 lllll{{{lll鬢 鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢 ;;;;;;;;;;;;;;;鬢 鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢鬢 崖 崖 崖 崖 崖崖 崖 崖崖倒 倒 倒倒倒倒倒 案 案 案 案 案案 案案案案案案案案案案案案案案 案案案理理 ‘ ‘ ‘ ‘ ‘‘ ‘‘J氣 氣下~刀不爪，兩 兩 兩 兩 兩 ;;;;;;;;;;;;;;;.‘刀 刀.勢附.~」 」 」 」 」 羹 羹 羹 羹 羹羹 羹羹 羹r賈匆曰戶，

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本文編號：2820623