【摘要】：第一部分20例X-連鎖淋巴細(xì)胞異常增生癥患者臨床與免疫學(xué)研究目的:分析13例X-連鎖淋巴細(xì)胞異常增生癥一型(XLP-1,又稱SAP deficiency)患者與7例X-連鎖淋巴細(xì)胞異常增生癥二型(XLP-2,又稱XIAP deficiency)患者的臨床資料、基因突變與免疫學(xué)特點(diǎn),并對XLP-1和XLP-2患者的臨床特點(diǎn)進(jìn)行對比分析,為臨床工作中能盡快鑒別診斷、及時診治提供依據(jù),提高對疾病的診療水平。方法:以2010年3月至2018年1月在我院門診或住院部就診且被基因確診的13例XLP-1患者及7例確診為XLP-2患者為研究對象,收集并總結(jié)臨床資料,評估XLP兩型患者的治療及預(yù)后情況。分析基因突變特點(diǎn)并進(jìn)行一代測序驗(yàn)證;免疫印跡法或流式細(xì)胞術(shù)檢測SAP、XIAP蛋白表達(dá);免疫學(xué)相關(guān)檢查評估免疫學(xué)功能。結(jié)果:(1)20例XLP患者中包括13例XLP-1患者和7例XLP-2患者,均為男性。XLP-1患者和XLP-2患者的平均發(fā)病年齡分別為3.05歲(0.08-12歲)和3.02歲(0.04 5.33歲),平均診斷年齡分別為7.86歲(1.33 19.0歲)和3.65歲(1.0-5.5歲)。(2)發(fā)熱為最常見的首發(fā)癥狀。13例XLP-1患者中有4例(30.8%)發(fā)生HLH,而在XLP-2中HLH發(fā)生率為3/7(42.9%),EB病毒感染發(fā)生率在XLP-1患者和XLP-2患者中分別為76.9%和28.6%,低丙種球蛋白血癥發(fā)生率分別為76.9%和14.3%。2例XLP-1患者發(fā)生淋巴瘤,而7例XLP-2患者均未發(fā)生淋巴瘤。7例XLP-2患者均無炎癥性腸病表現(xiàn)。7例XLP-2患者3例患者主要表現(xiàn)為HLH,1例患者表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞減少癥,而具有同一位點(diǎn)突變的3例患者表現(xiàn)各異,1例尚無臨床表現(xiàn),1例表現(xiàn)為反復(fù)上呼吸道感染,1例反復(fù)白細(xì)胞升高伴自身免疫性溶血性貧血、血小板減少。(3)13例XLP-1患者有7種已報(bào)道的不同類型的SH2D1A突變,其中p.R55X是熱點(diǎn)突變;7例XLP-2患者中有5種不同類型的XIAP突變,包括3種新發(fā)突變:c.224AG,c.951GA,del Exon 4。(4)9例XLP-1患者進(jìn)行SAP蛋白檢測提示其表達(dá)均有顯著下降;6例XLP-2患者進(jìn)行XIAP蛋白檢測,其中5例患者XIAP蛋白表達(dá)減少,1例XIAP蛋白表達(dá)正常。(5)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查提示7例以持續(xù)性丙種球蛋白血癥為主要臨床表現(xiàn)的XLP-1患者記憶B細(xì)胞顯著降低,而5例XLP-2患者中,以HLH為主要表現(xiàn)的2例患者主要表現(xiàn)為各B細(xì)胞亞群均明顯減少、NK細(xì)胞降低、以CD8~+T細(xì)胞為主的T細(xì)胞顯著升高;2例患者總B細(xì)胞百分比未降低,但記憶B細(xì)胞與漿母B細(xì)胞降低;另外1例患者各淋巴細(xì)胞亞群未見異常。(6)13例XLP-1患者共3例患者死亡,其中2例死于急性臟器出血,1例死于淋巴瘤;6例患者未接受規(guī)律IVIG治療,均出現(xiàn)不同程度的支氣管擴(kuò)張、肺實(shí)變;2例接受規(guī)律IVIG治療患者情況良好,其中1例已行異基因HSCT治療且術(shù)后恢復(fù)好,1例等待HSCT治療中。7例XLP-2患者中,1例患者死于肺出血,1例已行HSCT治療,術(shù)后出現(xiàn)急性血管性排斥反應(yīng)但目前恢復(fù)好,其余患者均以對癥治療為主,治療效果較好。結(jié)論:本研究首次總結(jié)中國XLP-2患者的臨床表現(xiàn)、基因突變、免疫學(xué)特點(diǎn),并對XLP-1和XLP-2患者的臨床及免疫學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行了對比分析。HLH引起的急性臟器出血是引起兩型患者死亡的最常見原因。7例XLP-2患者均無腸炎表現(xiàn),但仍應(yīng)警惕炎癥性腸病的發(fā)生。早期診斷并進(jìn)行規(guī)律丙種球蛋白治療,能顯著降低XLP患者并發(fā)癥的發(fā)生,提高患者生存質(zhì)量。HSCT是目前唯一根治手段。第二部分全血檢測XIAP蛋白方法建立目的:以微量全血為樣本,快速、準(zhǔn)確地檢測X-連鎖的凋亡抑制蛋白(XIAP)的表達(dá),并應(yīng)用于XIAP缺陷綜合征(又稱XLP-2)患者進(jìn)行蛋白質(zhì)水平的快速篩查,同時降低混雜流式熒光信號,使得后續(xù)檢測具備更高的特異性,結(jié)果更準(zhǔn)確。方法:采集乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)、肝素鈉(Heparin sodium)或者肝素鋰(Heparin lithium)抗凝靜脈全血300μl,用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后采用與抗人XIAP蛋白抗體同源種屬的血清全I(xiàn)g G抗體封閉待測樣本非特異性結(jié)合位點(diǎn)并設(shè)置同型抗體對照組,進(jìn)行抗人XIAP蛋白一抗抗體與相應(yīng)二抗抗體孵育后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行XIAP蛋白表達(dá)檢測。采用本方法檢測正常志愿者靜脈全血XIAP蛋白并應(yīng)用于一例已基因確診的XIAP缺陷綜合征患者中。結(jié)果:微量全血檢測XIAP蛋白方法建立成功,對于正常志愿者或XIAP缺陷綜合征患者,采用全血或采用PBMCs樣本檢測XIAP蛋白結(jié)果均可靠。結(jié)論:本研究方法采用全血裂解紅細(xì)胞后進(jìn)行XIAP蛋白檢測,整個檢測過程采樣量小,對患者創(chuàng)傷小,避免了采用單個核細(xì)胞檢測的高耗時和流程的繁瑣。同時,由于消除了抗體非特異性結(jié)合的情形而使檢測結(jié)果具備較高的準(zhǔn)確度。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R725.5
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文28圖1-1 XLP-2患者及其母親XIAP基因序列分析Figure 1-1 XIAP sequencing analysis of patients with XLP-2 and their mothers表1-6 13例XLP-1患者基因突變分析Table 1-6 Genetic features of 13 patients with XLP-1Patient Gene Exon/intron cDNA Protein Mutation typeP1 SH2D1A Exon 2 c.163C>T p. R55X NonsenseP2 SH2D1A Exon 2 c.163C>T p. R55X NonsenseP3.1 SH2D1A Exon 2 c.164G>T p. R55L MissenseP3

其中 5 例患者（P12、P13、P14.1、P15 和 P16）的 XIAP 蛋白表達(dá)水平明顯降低，而患者 P11 的 XIAP 蛋白無降低。圖1-4 XLP-1患者SAP蛋白表達(dá)Figure 1-4 Expression of SAP in patients with XLP-1XIAP/BIRC4 geneXIAP N-terATGTAAC-ter1 497BIR1 BIR2 BIR3UBA RINGExon 1 2 3 4 Exon 5 Exon 6962C>G(A321G)224A>G(Y75C)P12* 1100A>G(D367G)P13951G>A(W317X)P15*Del.Exon4P16*26 93 163 230 265 330 446 485

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文31圖1-5 XLP-2患者XIAP蛋白表達(dá)Figure 1-5 Expression of XIAPin patients with XLP-22.5 XLP-1患者免疫學(xué)表型分析為了評估伴持續(xù)性低丙種球蛋白血癥的 XLP-1 患者的免疫學(xué)特性，進(jìn)行 B 淋巴細(xì)胞亞群分析。如表 5 所示，在 7 例 XLP-1 伴持續(xù)低丙種球蛋白血癥患者中，B 細(xì)胞總數(shù)與健康對照相比無差異，但記憶 B 細(xì)胞數(shù)量顯著降低。此外，7 例患者中有 4 名患者的漿母 B 細(xì)胞數(shù)量也有所下降。（見表 1-8）表1-8持續(xù)性低丙種球蛋白血癥的XLP-1患者B細(xì)胞亞群及免疫球蛋白分析Table 1-8 Immunological features of SAP-deficient patients with hypogammaglobulinemiaB-lymphocyte subset Ig levelPatientCD19+B(cells/μl)Na veB(cells/μl)MemoryB(cells/μl)Plasmablasts(cells/μl)TransitionalB (cells/μl)IgG(g/L)%糏gA(g/L)%糏gM(g/L)%糏gE(IU/mL)P11113

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本文編號：2789444