【摘要】： 目的: 應用基因芯片技術對ALL患兒的基因表達譜進行初步研究,尋找與ALL早期診斷分型、治療及預后判斷等具有重要價值的新基因;并通過實時定量RT-PCR方法對差異性基因進行驗證,發(fā)現基因與疾病的關系,對臨床治療起指導意義。 方法: 1.按照CCLG-2008方案,選擇3例初診為標危再評估轉入高危(B組)的ALL患兒與3例初診和再評估均為標危(A組)的ALL患兒作為實驗組,及3例ITP患者作為正常對照組;分離骨髓單個核細胞,提取總RNA;合成cDNA,反轉錄cRNA后與Illumina Human-6全基因組表達譜微珠芯片雜交。洗片后用Illumina BeadSation基因芯片掃描儀進行雜交結果掃描,芯片圖像分析軟件BeadStudio對芯片數據分析,比較B組和A組兩者的差異性基因。 2.選取82例ALL患兒作為實驗組和15例正�；純鹤鳛閷φ战M,應用實時定量RT-PCR方法對ABCC4、BCL11A和TOP2A 3個差異性基因進行定量分析,并分析這3個目的基因在實驗組與對照組之間差異性表達的意義及與臨床指標的關系。 結果: 1.①基因芯片結果顯示,B組與A組有19個基因差異性表達,包括ABCC4、BCL11A等14個上調基因和TOP2A等5個下調基因。 ②研究表明ABCC4和TOP2A為兩個多藥耐藥基因,BCL11A為一個與血液系統(tǒng)惡性疾病致病機制可能有關的基因,其余基因與血液系統(tǒng)惡性疾病的相關性尚待研究。 ③差異性基因功能聚類分析發(fā)現其與凋亡、細胞粘附、細胞信號、細胞分化、細胞骨架結構形成、代謝過程等相關。 2.①上調基因ABCC4和BCL11A經實時定量RT-PCR驗證,發(fā)現高危組的表達量高于標危組,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);白血病患者組的表達量均高于正常對照組,差異也有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。其余白血病患者組(除高危組和標危組)之間的差異沒有統(tǒng)計學意義。 ②下調基因TOP2A經實時定量RT-PCR驗證,發(fā)現高危組的表達量低于標危組,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);白血病患者組的表達量均低于正常對照組,差異也有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。其余白血病患者組(除高危組和標危組)之間的差異沒有統(tǒng)計學意義。 ③各臨床指標間的差異對BCL11A mRNA表達量均無顯著性差異(P值＞0.05)。各臨床指標中只有緩解和不緩解因素之間的差異對ABCC4 mRNA的表達量有顯著性差異(P值＜0.05);各臨床指標中只有緩解和不緩解、潑尼松試驗敏感與不敏感兩組因素之間的差異對TOP2A mRNA的表達量有顯著性差異(P值均＜0.05)。 結論: 1.基因芯片技術能發(fā)現與兒童ALL相關的差異性基因,這些基因分別參與細胞凋亡、細胞信號、細胞分化、細胞骨架結構形成及代謝過程等。 2.定量RT-PCR發(fā)現ABCC4基因為一個可用于評估臨床療效的上調耐藥基因,BCL11A基因為一個與兒童ALL發(fā)病機制可能相關的上調基因,TOP2A基因為一個與兒童ALL治療靶點可能相關的下調耐藥基因。 3.基因芯片技術結合定量RT-PCR對兒童ALL精確分型、預后判斷、早期干預和靶向治療的研究等具有重要的臨床應用價值。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R733.7
【圖文】：

的OD260/OD28。界于 1.7一2.0之間。同時經聚丙烯酞胺凝膠電泳檢測示:185、285兩，條帶清晰可見，且無拖尾現象示完整性好，電泳圖見圖1。28芝31855芝3圖1實驗組與對照組骨髓總RNA電泳圖2二芯片雜交結果2.1散點圖圖2一4中的每一個數據點代表芯片上每一個基因點的雜交信號，Y軸與X軸的比值在0.5至2.0之間的數據點，基本屬于非差異性表達;Y軸與X軸的比值在0.5至2.0之外的數據點，可能存在差異性表達。

圖4B組(高危組)芯片與A組(標危組)芯片信號值比較的散點圖2.2芯片的掃描圖截圖圖5為1#一7#芯片的掃描圖截圖，其中每一個亮點代表熒光信號點，從圖中可以看出熒光信號點距分布均勻、規(guī)則、亮度適中;無背景色干擾，示芯片雜交效果良好。1#芯片2#芯片3#芯片

【引證文獻】

相關期刊論文 前1條

1 許宏;宋文琪;徐樨巍;;兒童急性淋巴細胞白血病治療中甲氨蝶呤血藥濃度監(jiān)測分析[J];中國新藥與臨床雜志;2010年11期

本文編號：2762071