【摘要】： 孤獨(dú)癥(Autism)是一種嚴(yán)重的廣泛性神經(jīng)發(fā)育障礙性疾病,多數(shù)三歲內(nèi)起病,男女發(fā)病比例為4:1。盡管有針對(duì)一些行為異常的治療,但無法治愈,預(yù)后大多較差,嚴(yán)重影響兒童的身心發(fā)展,使它成為對(duì)家庭、社會(huì)還有患兒最具有災(zāi)難性的兒童疾病之一�，F(xiàn)在已經(jīng)清楚孤獨(dú)癥是一個(gè)綜合征,并且具有很強(qiáng)的遺傳性。孤獨(dú)癥的病因在細(xì)胞和分子水平都還沒有被闡明�，F(xiàn)在很多學(xué)者認(rèn)為孤獨(dú)癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中興奮與抑制功能失衡所致。研究表明,孤獨(dú)癥病人有合成GABA的谷氨酸脫羧酶(GAD)水平的下降;相反,谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)水平上升。 小清蛋白(Parvalbumin,PV)是一種低分子量的Ca~(2+)結(jié)合蛋白(CaBPS),PV陽性神經(jīng)元是一種抑制性中間神經(jīng)元,它標(biāo)記了那些高代謝和高電活動(dòng)的GABA能中間神經(jīng)元亞群。電鏡可見PV陽性神經(jīng)末梢可以與周圍的錐體細(xì)胞的軸突始段形成對(duì)稱性突觸(抑制性突觸)。而且PV陽性神經(jīng)元在發(fā)育過程中出現(xiàn)較晚,可能參與突觸的形成和功能的成熟。所以PV及PV陽性神經(jīng)元必定在孤獨(dú)癥的發(fā)生過程中起到一定的作用。而PV在孤獨(dú)癥模型大鼠腦內(nèi)的變化也可以在一定程度上反映抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的變化情況,可為孤獨(dú)癥的研究提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。 通過對(duì)孤獨(dú)癥病人腦的神經(jīng)解剖學(xué)檢查和功能與結(jié)構(gòu)MRI的研究,發(fā)現(xiàn)孤獨(dú)癥有邊緣系統(tǒng)、小腦、胼胝體、基底節(jié)、腦干和和皮層等主要腦區(qū)的病變。對(duì)孤獨(dú)癥患者腦的神經(jīng)病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),海馬、杏仁體和內(nèi)嗅皮層等腦區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)架都發(fā)生了異常(細(xì)胞體積變小,密度增大)。邊緣系統(tǒng)和大腦皮層都是與孤獨(dú)癥相關(guān)的情緒與認(rèn)知的重要腦區(qū)。這些腦區(qū)中尤以情緒與認(rèn)知相關(guān)的腦區(qū)最重要。其中以邊緣系統(tǒng)的杏仁體、海馬與前額葉皮層更具代表性。杏仁體的基底外側(cè)核(BLA)被認(rèn)為是進(jìn)入杏仁體的感覺輸入?yún)^(qū),它與新皮層、丘腦和海馬結(jié)構(gòu)存在廣泛的聯(lián)系。 那么,在孤獨(dú)癥的主要情緒與認(rèn)知相關(guān)腦區(qū)內(nèi)PV的表達(dá)是否會(huì)產(chǎn)生變化?這種變化是在發(fā)育過程中哪個(gè)階段出現(xiàn)的?它在孤獨(dú)癥發(fā)病過程中起到什么作用?是值得研究的問題。為此,本實(shí)驗(yàn)做了如下研究: 第一部分:通過孕鼠腹腔注射VPA和反復(fù)冷凍刺激(RCS)的方法建立兩種成熟的孤獨(dú)癥大鼠動(dòng)物模型。用免疫組化的方法,觀察成年(12w)孤獨(dú)癥模型大鼠腦內(nèi)情緒與認(rèn)知相關(guān)腦區(qū):杏仁體、前額葉皮層和海馬區(qū)PV陽性神經(jīng)元的表達(dá)情況,并與正常對(duì)照組進(jìn)行比較。結(jié)果顯示:兩種孤獨(dú)癥模型鼠杏仁體、前額葉皮層和海馬區(qū)內(nèi)的PV免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元的胞體形態(tài)、大小、突起的長度和密度等與正常對(duì)照組(CTL)相比,都發(fā)生了不同程度的變化。而且兩種模型中前額葉皮層與杏仁體區(qū)PV陽性神經(jīng)元的變化一致,海馬區(qū)則不同;兩種模型在各個(gè)腦區(qū)的變化也不盡相同。這些結(jié)果提示:PV中間神經(jīng)元在孤獨(dú)癥的發(fā)病過程中發(fā)揮了重要的作用,它們的改變可能削弱了對(duì)孤獨(dú)癥相關(guān)的神經(jīng)環(huán)路中錐體神經(jīng)元的抑制作用;前額葉皮層與杏仁體區(qū)在孤獨(dú)癥發(fā)病過程的作用可能相近,而海馬區(qū)則不同;兩種模型的干預(yù)措施對(duì)各腦區(qū)的影響也不同,孕鼠腹腔注射VPA可能主要影響仔鼠杏仁體和前額葉皮層的發(fā)育,而孕鼠RCS可能主要影響仔鼠海馬區(qū)的發(fā)育。 第二部分:用孕鼠腹腔注射VPA的方法,獲得子代孤獨(dú)癥模型大鼠。根據(jù)孤獨(dú)癥發(fā)病特點(diǎn)及PV的表達(dá)特點(diǎn),分別取發(fā)育過程中不同時(shí)間點(diǎn)的孤獨(dú)癥模型大鼠杏仁體區(qū)、前額葉皮層區(qū)和海馬區(qū),用Golgi染色和RT-PCR等方法,觀察VPA模型組大鼠和正常大鼠發(fā)育過程中情緒與認(rèn)知相關(guān)腦區(qū)PV的表達(dá)情況,并進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示:正常大鼠在出生至第一周末,各個(gè)腦區(qū)內(nèi)mRNA水平的PV表達(dá)量很少,幾乎檢測(cè)不到;第二周出現(xiàn)PV表達(dá)量的顯著增加,這種增加持續(xù)到第三周末,但是第四周期間又出現(xiàn)PV表達(dá)量的急劇減少,四周之后海馬區(qū)的PV表達(dá)量將維持在較低的水平,而杏仁體(BLA)區(qū)和前額葉皮層區(qū)的PV表達(dá)量則緩慢恢復(fù)到三周時(shí)的高水平。孤獨(dú)癥模型鼠不同腦區(qū)各個(gè)時(shí)間段的PV表達(dá)水平均較正常對(duì)照組低,尤其在第二周到第四周。而這段時(shí)間是突觸形成和功能成熟的關(guān)鍵時(shí)期,大約有90%的突觸在這段時(shí)間發(fā)育成熟。而且,雖然VPA孤獨(dú)癥模型成年大鼠PV的表達(dá)量與對(duì)照組無差異,但是Golgi染色示神經(jīng)元及神經(jīng)纖維均出現(xiàn)形態(tài)學(xué)異常。所以,我們認(rèn)為孤獨(dú)癥模型大鼠發(fā)育過程中情緒與認(rèn)知相關(guān)腦區(qū)內(nèi)PV的表達(dá)變化可能影響了突觸的正常發(fā)育與功能成熟。 綜上所述,PV陽性神經(jīng)元在孤獨(dú)癥模型大鼠腦內(nèi)發(fā)生了明顯的變化。作為CNS一種重要的GABA能神經(jīng)遞質(zhì),PV的正常發(fā)育對(duì)于突觸的形成和功能成熟具有重要的意義。我們認(rèn)為:PV在突觸形成和功能成熟的關(guān)鍵時(shí)期出現(xiàn)表達(dá)的異常,嚴(yán)重地影響突觸的正常形成和功能的成熟,導(dǎo)致興奮性突觸與抑制性突觸的失衡,后者引起這些腦區(qū)信息傳遞的紊亂,繼而導(dǎo)致整個(gè)腦功能的失常和孤獨(dú)癥的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R749.94

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 曾衛(wèi)東,謝桂萍;兒童孤獨(dú)癥的成因及干預(yù)治療[J];疾病控制雜志;2005年01期

2 王廷華,吳良芳,廖德陽,周雪;成年貓L_6DRG神經(jīng)元按大小分類的形態(tài)學(xué)證據(jù)[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年01期

本文編號(hào)：2739759