【摘要】： 【目的】新生兒持續(xù)性肺動脈高壓(PPHN)是新生兒危童癥之一,以肺血管阻力增加引起肺動脈壓持續(xù)升高為特征,伴有動脈導管和(或)卵園孔的右向左分流,常引起嚴重的低氧血癥而危及生命。缺氧是PPHN發(fā)生和病情惡化的重要危險因素之一。缺氧引起的肺血管收縮和肺血管重建是肺動脈高壓的主要病理基礎(chǔ),后者主要表現(xiàn)為肺小動脈中層肥厚,平滑肌細胞肥大、增生及非肌型小血管肌化。 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide-adenine dinucleotidephosphate,NADPH)氧化酶,簡稱NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)是血管內(nèi)生成活性氧簇((reactive oxygen species,ROS)的主要酶體。近年來非吞噬細胞NOX的研究受到重視。在不同種類細胞中發(fā)現(xiàn)一系列NOX催化亞單位即NOX主要功能亞單位gp91phox的同源物,后來被命名為NOX蛋白家族分別稱其為NOX1、NOX2(即gp91phox)、NOX3、NOX4、NOX5以及雙功能氧化酶Duox1和Duox2。為非吞噬細胞ROS的產(chǎn)生和功能提供了直接證據(jù)。非吞噬細胞NOX在很多的病理和生理過程中起重要的作用,包括參與基因的表達和蛋白合成的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)、細胞的信號傳導、細胞的分化和增殖和凋亡等。特別是在血管細胞的肥大,血管重塑,新生血管的形成中起重要的作用。2007年Mittal等首次報道NADPH氧化酶的各亞單位均在小鼠的肺部表達,其中NOX4表達最高,并提示NOX4可能參與慢性缺氧肺血管平滑肌細胞的增生且可能與慢性缺氧性肺動脈高壓的發(fā)生機制有。 NO作為一種細胞信息分子,不僅可調(diào)節(jié)肺血管張力,而且可調(diào)控平滑肌增生和血管改建,從而在慢性缺氧性肺動脈高壓形成過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。肺血管內(nèi)皮細胞由內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)催化產(chǎn)生的NO進入血管平滑肌細胞,激活可溶性鳥苷酸環(huán)化酶,使環(huán)鳥苷酸(cGMP)增加,導致cGMP依賴性蛋白激酶磷酸化,通過降低細胞內(nèi)的鈣離子濃度,使平滑肌細胞松弛。在慢性缺氧條件下內(nèi)皮起源的NO可以減輕肺血管平滑肌細胞的增生。 目前肺組織中NOX4在慢性缺氧肺動脈高壓形成過程中表達的改變和作用研究較少。慢性缺氧對肺動脈血管內(nèi)皮細胞eNOS表達的影響報道不一。慢性缺氧條件下小鼠肺部NOX4和eNOS表達的改變是否存相關(guān)性目前沒有報道。本研究以C57BL/6J WT(+/+)小鼠為研究對象在慢性缺氧條件下形成肺動脈高壓,觀察小鼠肺組織中NOX4和eNOS表達改變,并比較常氧條件下WT(+/+)和eNOS(-/-)小鼠肺組織中NOX4基因表達的差異。從而探討NOX4和eNOS之間的相互關(guān)系。 【方法】本實驗將WT(+/+)c57BL/6J雄性小鼠40只隨機分成5組分別是C1組(正常)、H1組(缺氧1天)、H3組(缺氧3天)、H7組(缺氧7天)、H14組(缺氧14天)。C57BL/6J WT(+/+)雄性小鼠8只,10周,為C2組,C57BL/6J近交系的eNOS(-/-)雄性小鼠8只,10周,為K組。將缺氧組放入自制的常壓低氧箱中,以10±0.5%的氧濃度分別缺氧1、3、7、14天。C1、H1、H3、H7、H14組小鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后取肺組織,右肺各葉勻漿后用Real Time PCR法檢測小鼠慢性缺氧前后肺組織中eNOS和NOX4 mRNA的改變。左肺以10%的中性福爾馬林固定后做石蠟切片,再行HE染色和免疫組織化學染色法觀察小鼠慢性缺氧前后肺大中動脈血管管壁形態(tài)學改變、非肌型小血管α—SMA和肺動脈血管內(nèi)皮細胞eNOS表達的改變。C1和K組小鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后取肺組織,用Real Time PCR法檢測兩組小鼠NOX4 mRNA的表達。 【結(jié)果】WT(+/+)c57BL/6J小鼠慢性缺氧后肺大中動脈血管管壁增厚、非肌型小血管出現(xiàn)α—SMA染色陽性,非肌型小血管肌化、肺組織eNOS和NOX4 mRNA以及肺動脈內(nèi)皮細胞eNOS蛋白的表達隨缺氧時間進行性升高,兩者的表達呈正相關(guān)。常氧條件下eNOS(-/-)小鼠肺組織中NOX4 mRNA的表達較WT(+/+)小鼠的高。 【結(jié)論】 1.慢性缺氧可使小鼠肺動脈血管發(fā)生重塑,肺血管中NOX4 mRNA、eNOS mRNA和蛋白表達升高。 2.小鼠肺組織中eNOS和NOX4的表達存在相互關(guān)系,在慢性缺氧條件下呈明顯的正相關(guān),eNOS基因敲除后小鼠肺組織中NOX4的表達升高。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R722.1
【圖文】：

圖1eNOS(一產(chǎn))小鼠肺組織勻漿PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖電泳圖。1.盯(+/+)小鼠2.eNOS。/一)小鼠3.Marker2C57BL/6JwT(+/+)小鼠慢性缺氧肺血管重塑2.1未經(jīng)缺氧和經(jīng)10士0.5%氧濃度慢性缺氧兩周的C57BL/6J盯(+/+)小鼠肺組織石蠟包埋切片，HE染色見肺大中動脈血管壁增厚，官腔狹窄。(見圖2)

eNOS(一產(chǎn))小鼠肺組織勻漿PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖電泳圖

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本文編號：2720755