【摘要】： 【目的】新生兒持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓(PPHN)是新生兒危童癥之一,以肺血管阻力增加引起肺動(dòng)脈壓持續(xù)升高為特征,伴有動(dòng)脈導(dǎo)管和(或)卵園孔的右向左分流,常引起嚴(yán)重的低氧血癥而危及生命。缺氧是PPHN發(fā)生和病情惡化的重要危險(xiǎn)因素之一。缺氧引起的肺血管收縮和肺血管重建是肺動(dòng)脈高壓的主要病理基礎(chǔ),后者主要表現(xiàn)為肺小動(dòng)脈中層肥厚,平滑肌細(xì)胞肥大、增生及非肌型小血管肌化。 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide-adenine dinucleotidephosphate,NADPH)氧化酶,簡(jiǎn)稱NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)是血管內(nèi)生成活性氧簇((reactive oxygen species,ROS)的主要酶體。近年來(lái)非吞噬細(xì)胞NOX的研究受到重視。在不同種類細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)一系列NOX催化亞單位即NOX主要功能亞單位gp91phox的同源物,后來(lái)被命名為NOX蛋白家族分別稱其為NOX1、NOX2(即gp91phox)、NOX3、NOX4、NOX5以及雙功能氧化酶Duox1和Duox2。為非吞噬細(xì)胞ROS的產(chǎn)生和功能提供了直接證據(jù)。非吞噬細(xì)胞NOX在很多的病理和生理過程中起重要的作用,包括參與基因的表達(dá)和蛋白合成的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)、細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞的分化和增殖和凋亡等。特別是在血管細(xì)胞的肥大,血管重塑,新生血管的形成中起重要的作用。2007年Mittal等首次報(bào)道NADPH氧化酶的各亞單位均在小鼠的肺部表達(dá),其中NOX4表達(dá)最高,并提示NOX4可能參與慢性缺氧肺血管平滑肌細(xì)胞的增生且可能與慢性缺氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生機(jī)制有。 NO作為一種細(xì)胞信息分子,不僅可調(diào)節(jié)肺血管張力,而且可調(diào)控平滑肌增生和血管改建,從而在慢性缺氧性肺動(dòng)脈高壓形成過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。肺血管內(nèi)皮細(xì)胞由內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)催化產(chǎn)生的NO進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞,激活可溶性鳥苷酸環(huán)化酶,使環(huán)鳥苷酸(cGMP)增加,導(dǎo)致cGMP依賴性蛋白激酶磷酸化,通過降低細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度,使平滑肌細(xì)胞松弛。在慢性缺氧條件下內(nèi)皮起源的NO可以減輕肺血管平滑肌細(xì)胞的增生。 目前肺組織中NOX4在慢性缺氧肺動(dòng)脈高壓形成過程中表達(dá)的改變和作用研究較少。慢性缺氧對(duì)肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)的影響報(bào)道不一。慢性缺氧條件下小鼠肺部NOX4和eNOS表達(dá)的改變是否存相關(guān)性目前沒有報(bào)道。本研究以C57BL/6J WT(+/+)小鼠為研究對(duì)象在慢性缺氧條件下形成肺動(dòng)脈高壓,觀察小鼠肺組織中NOX4和eNOS表達(dá)改變,并比較常氧條件下WT(+/+)和eNOS(-/-)小鼠肺組織中NOX4基因表達(dá)的差異。從而探討NOX4和eNOS之間的相互關(guān)系。 【方法】本實(shí)驗(yàn)將WT(+/+)c57BL/6J雄性小鼠40只隨機(jī)分成5組分別是C1組(正常)、H1組(缺氧1天)、H3組(缺氧3天)、H7組(缺氧7天)、H14組(缺氧14天)。C57BL/6J WT(+/+)雄性小鼠8只,10周,為C2組,C57BL/6J近交系的eNOS(-/-)雄性小鼠8只,10周,為K組。將缺氧組放入自制的常壓低氧箱中,以10±0.5%的氧濃度分別缺氧1、3、7、14天。C1、H1、H3、H7、H14組小鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后取肺組織,右肺各葉勻漿后用Real Time PCR法檢測(cè)小鼠慢性缺氧前后肺組織中eNOS和NOX4 mRNA的改變。左肺以10%的中性福爾馬林固定后做石蠟切片,再行HE染色和免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠慢性缺氧前后肺大中動(dòng)脈血管管壁形態(tài)學(xué)改變、非肌型小血管α—SMA和肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)的改變。C1和K組小鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后取肺組織,用Real Time PCR法檢測(cè)兩組小鼠NOX4 mRNA的表達(dá)。 【結(jié)果】WT(+/+)c57BL/6J小鼠慢性缺氧后肺大中動(dòng)脈血管管壁增厚、非肌型小血管出現(xiàn)α—SMA染色陽(yáng)性,非肌型小血管肌化、肺組織eNOS和NOX4 mRNA以及肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS蛋白的表達(dá)隨缺氧時(shí)間進(jìn)行性升高,兩者的表達(dá)呈正相關(guān)。常氧條件下eNOS(-/-)小鼠肺組織中NOX4 mRNA的表達(dá)較WT(+/+)小鼠的高。 【結(jié)論】 1.慢性缺氧可使小鼠肺動(dòng)脈血管發(fā)生重塑,肺血管中NOX4 mRNA、eNOS mRNA和蛋白表達(dá)升高。 2.小鼠肺組織中eNOS和NOX4的表達(dá)存在相互關(guān)系,在慢性缺氧條件下呈明顯的正相關(guān),eNOS基因敲除后小鼠肺組織中NOX4的表達(dá)升高。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R722.1
【圖文】：

圖1eNOS(一產(chǎn))小鼠肺組織勻漿PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖電泳圖。1.盯(+/+)小鼠2.eNOS。/一)小鼠3.Marker2C57BL/6JwT(+/+)小鼠慢性缺氧肺血管重塑2.1未經(jīng)缺氧和經(jīng)10士0.5%氧濃度慢性缺氧兩周的C57BL/6J盯(+/+)小鼠肺組織石蠟包埋切片，HE染色見肺大中動(dòng)脈血管壁增厚，官腔狹窄。(見圖2)

eNOS(一產(chǎn))小鼠肺組織勻漿PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖電泳圖

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本文編號(hào)：2720755