【摘要】： 圍產(chǎn)期窒息缺氧引起的多器官功能障礙綜合征(MODS)，是新生兒主要死亡原因之一，其中心、肺損害甚為常見。目前，應(yīng)用一氧化氮(NO)吸入治療新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓(PPHN)已取得了良好療效，但由于NO吸入治療需借助呼吸機(jī)和嚴(yán)格的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，價(jià)格昂貴，臨床應(yīng)用受到一定的限制；并且NO吸入突然中斷可能會(huì)造成反跳性肺動(dòng)脈高壓。因此，尋求新的治療肺動(dòng)脈高壓的方法有臨床實(shí)用價(jià)值。近年有研究報(bào)道，霧化吸入NO供體可選擇性降低肺動(dòng)脈壓力，然而霧化吸入NO供體是否能通過改善肺動(dòng)脈壓力緩解缺氧性心肌損害尚未明確。另一方面，研究發(fā)現(xiàn)NO吸入能減輕中性粒細(xì)胞引起的肺損傷，霧化吸入NO供體對(duì)低氧性肺損傷有何影響，能否抑制肺部炎癥反應(yīng)、是否增加肺的含水量、是否影響肺磷脂含量等均未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究應(yīng)用霧化吸入兩種常用的NO供體：硝酸甘油(NTG)和硝普鈉(SNP)，治療新生豬急性低氧性心肺損害，觀察其在降低肺動(dòng)脈壓的同時(shí)對(duì)心肌損害是否有緩解作用及其對(duì)急性低氧性肺損傷的影響。 第一部分霧化吸入一氧化氮供體治療新生豬急性低氧性心肌損害的研究 研究目的 觀察霧化吸入一氧化氮供體降低新生豬急性低氧性肺動(dòng)脈高壓的療效及其對(duì)低氧后心肌功能的保護(hù)作用。 材料與方法 利用吸入10％O_2維持1h建立急性低氧性肺動(dòng)脈高壓和心肌損害的模型。將30頭上海種新生白豬隨機(jī)分成5組：S組(假手術(shù)組)；C組(對(duì)照組)；N1組(缺氧結(jié)束后霧化吸入NTG 0.5h)、N2組(缺氧狀態(tài)0.5h后即霧化吸入NTG0.5h)和SNP組(缺氧結(jié)束后霧化吸入SNP 0.5h)。實(shí)驗(yàn)過程中連續(xù)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓(MAP)和平均肺動(dòng)脈壓(MPAP)，基礎(chǔ)狀態(tài)、缺氧0.5h、缺氧1h、缺氧結(jié)束后0.5h、1h、3h和5h測(cè)定動(dòng)脈血?dú)夥治��；A(chǔ)狀態(tài)、缺氧1h、缺氧結(jié)束后5h時(shí)監(jiān)測(cè)血清肌酸激酶心肌同功酶(CK-MB)和肌鈣蛋白I(cTnI)濃度。缺氧后5h，超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心功能，，心肌組織切片蘇木精-伊紅(HE)和堿性復(fù)紅苦味酸(BFP)染色，TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡，免疫組織化學(xué)(IHC)法檢測(cè)心肌組織肌紅蛋白(Mb)和心肌細(xì)胞縫隙連接蛋白Cx43的含量。實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)心肌組織Mb mRNA和Cx43 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 1．缺氧1h，N2組的MPAP顯著低于C組(P＜0.01)；缺氧結(jié)束后0.5h，N1組和SNP組的MPAP顯著低于C組(P＜0.05)。5組新生豬在相同時(shí)點(diǎn)的MAP差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2．缺氧結(jié)束后5h，SNP組的血清CK-MB濃度顯著低于C組(P＜0.01)，N1組、N2組和SNP組的血清cTnI濃度均顯著低于C組(P＜0.01)。 3．超聲心動(dòng)圖結(jié)果顯示，N1組、N2組和SNP組的左室等容舒張期校正值(LIRTc)顯著低于C組(P＜0.05)。 4．心肌組織切片HE染色顯示，S組心肌細(xì)胞排列整齊，橫紋清楚，未見明顯壞死心肌細(xì)胞，其余4組缺氧心肌橫紋欠清楚及心肌纖維內(nèi)散在出血。BFP染色顯示，S組心肌細(xì)胞呈黃色，其余4組可見缺氧心肌細(xì)胞呈紅色。 5．TUNNEL法顯示，N1組、N2組和SNP組的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著低于C組(P＜0.05)。免疫組織化學(xué)法顯示心肌Mb在N1組、N2組和SNP組的表達(dá)顯著強(qiáng)于C組(P＜0.01)；心肌Cx43在N1組、N2組和SNP組的表達(dá)也顯著強(qiáng)于C組(P＜0.05)。 6．實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，5組心肌組織Mb mRNA和Cx43 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論 1．予新生豬吸入10％O_2 1h可造成肺動(dòng)脈高壓和心肌損害。 2．霧化吸入NTG或SNP均能選擇性地降低急性低氧引起的肺動(dòng)脈高壓。 3．霧化吸入NTG或SNP能減少心肌細(xì)胞的凋亡，緩解心肌組織CK-MB、cTnI、Mb的外漏及Cx43的改變，對(duì)缺氧后心肌功能有保護(hù)作用。 4．缺氧后心肌組織Mb和Cx43蛋白表達(dá)減少，但其mRNA水平無改變，提示缺氧影響了Mb和Cx43的表達(dá)或分布。 第二部分霧化吸入一氧化氮供體對(duì)新生豬急性低氧性肺損傷的影響 研究目的 觀察霧化吸入一氧化氮供體對(duì)新生豬急性低氧性肺損傷的影響及安全性。 材料與方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組同第一部分�；A(chǔ)狀態(tài)、缺氧0.5h、缺氧1h、缺氧結(jié)束后0.5h、1h、3h和5h測(cè)定呼吸動(dòng)態(tài)順應(yīng)性(Cdyn)、呼吸系統(tǒng)阻力(Rrs)。霧化吸入NTG或SNP結(jié)束時(shí)測(cè)定全血高鐵血紅蛋白(MetHb)和血漿亞硝酸根／硝酸根(NO_2~-／NO_3~-)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)束行右側(cè)肺灌洗、左側(cè)肺灌流固定和組織形態(tài)學(xué)檢查。檢測(cè)肺組織濕重／干重比值(W／D)反應(yīng)肺的含水量，檢測(cè)肺組織髓過氧化物酶(MPO)含量和支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WCC)反應(yīng)肺炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。檢測(cè)BALF中總蛋白(TP)、總磷脂(TPL)和飽和磷脂(DSPC)含量反應(yīng)磷脂的含量和功能。肺組織切片HE染色，觀察肺組織病理變化及進(jìn)行肺損傷評(píng)分。 結(jié)果 1．缺氧1h，新生豬的Cdyn有一定程度的降低，Rrs有一定程度的升高，但各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2．5組新生豬的肺組織W／D差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3．C組、N1組、N2組的BALF中WCC較S組顯著升高(P＜0.05)，SNP組較S組未見顯著升高(P＞0.05)；C組、N1、N2和SNP組肺組織MPO含量顯著高于S組(P＜0.01)，N1、N2和SNP組肺組織MPO含量顯著低于C組(P＜0.05)。 4．5組新生豬BALF中DSPC和TPL含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。C組BALF中TP含量顯著高于S組，DSPC／TP顯著低于S組(P＜0.05)。 5．肺組織HE染色結(jié)果顯示，缺氧后肺組織以水腫、白細(xì)胞浸潤(rùn)和出血為主。肺損傷評(píng)分：C組和N2組的水腫評(píng)分顯著高于S組(P＜0.05)；N1、N2和SNP組的白細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分顯著低于C組(P＜0.05)；C組的出血評(píng)分顯著高于S組(P＜0.01)，N1組、N2組和SNP組的出血評(píng)分顯著高于S組(P＜0.05)。 6．霧化吸入NTG或SNP結(jié)束時(shí)，N1、N2和SNP組全血MetHb和血漿NO_2~-／NO_3~-水平與S組和C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論 1．予新生豬吸入10％O_2 1h可造成低氧性肺損傷。 2．霧化吸入NTG或SNP減少新生豬缺氧后肺組織中MPO含量，減輕肺組織白細(xì)胞浸潤(rùn)，緩解低氧造成的炎癥性肺損傷。 3．霧化吸入NTG或SNP不影響肺磷脂代謝和肺含水量。 4．霧化吸入NTG或SNP不造成高鐵血紅蛋白血癥。 總結(jié) 霧化吸入NTG或SNP能選擇性降低新生豬急性低氧性肺動(dòng)脈高壓，能減少心肌細(xì)胞的凋亡，緩解心肌組織CK-MB、cTnI、Mb的外漏及Cx43的改變，對(duì)缺氧后心肌功能有保護(hù)作用。霧化吸入NTG或SNP能減輕缺氧后炎癥性肺損傷，不影響肺磷脂代謝和肺含水量，不造成高鐵血紅蛋白血癥。由于該方法操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，因此有較好的臨床應(yīng)用前景。
【圖文】：

MR和TR的比較

圖17電泳結(jié)果actin引物擴(kuò)增出一條227bP的片斷擴(kuò)增出一條，Cx43引物擴(kuò)增出一條152bp的片斷，23sbp的片斷。0睡資閱3t奮而獷，力.，加10.，000崖后侶口a皓的1之3湯幾5，珍…艾扭.凈ot，，之，，，礴，5，‘，了，a10202，22”2‘25262，2a油3。。李的33洲3弓如分乏勸陽40C勺c抽倪婦的ber圖18標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增曲線
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2699201