發(fā)布時間：2020-06-02 01:11

【摘要】：目的:研究雙歧桿菌對實(shí)驗(yàn)性新生鼠NEC模型回腸形態(tài)學(xué)的影響,同時,通過熒光定量PCR的方法檢測回腸iNOS、EGF基因的表達(dá),探討補(bǔ)充雙歧桿菌對腸道的保護(hù)作用是否與抑制iNOS的升高和EGF的下調(diào)有關(guān),為應(yīng)用雙歧桿菌防治新生兒NEC提供分子生物學(xué)依據(jù)。 方法: 1、實(shí)驗(yàn)動物及分組:生后12小時內(nèi)的新生鼠分3組,A組:實(shí)驗(yàn)組,13只,添加雙歧桿菌并建立NEC模型;B組:模型組,13只,建立NEC模型;C組:空白對照組,13只,不添加任何益生菌,亦不建立NEC模型。 2、雙歧桿菌的添加方法:喂奶前臨時在配方奶中加入雙歧桿菌活菌,使配方奶中雙歧桿菌的菌濃度為1*108cfu/ml,2次/日。 3、建立NEC模型:對生后12小時內(nèi)的新生鼠予部分配方奶喂養(yǎng)(4次/日),100%氮?dú)馊毖?0秒,4℃冷刺激10分鐘,每天2次連續(xù)3天,在最后1次缺氧冷刺激后給予內(nèi)毒素(LPS)20ul/只灌胃(濃度2.5mg/ml),建立新生鼠NEC模型。 4、標(biāo)本的制取:在建模結(jié)束后12小時(空白對照組在同一時間點(diǎn)),頸椎脫臼處死新生鼠,在距盲腸0.5cm處,剪取長約0.5cm的遠(yuǎn)端回腸置4%甲醛溶液中固定,為制作病理切片用;另再取約2cm回腸,迅速置-80℃冰箱為檢測iNOS、EGF基因表達(dá)用。 5、實(shí)驗(yàn)方法和檢測指標(biāo):各組新生鼠建立NEC模型前后的體重變化;NEC模型建立過程中的死亡率;甲醛溶液固定過的回腸經(jīng)石蠟包埋、H.E染色制成病理切片后,鏡下觀察各組新生鼠腸損傷評分及NEC的發(fā)生率;將-80℃保存的腸組織提取總RNA,然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用熒光定量PCR方法檢測iNOS、EGF基因在各組間表達(dá)的差異。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示,組間比較采用方差分析或Kruskal-Wallis H檢驗(yàn),LSD-t檢驗(yàn)或Nemenyi法檢驗(yàn);發(fā)生率間的比較采用χ2檢驗(yàn),P0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。。 結(jié)果: 1.B組建模結(jié)束后體重低于建模前水平[-(0.23±0.61)g],A組體重稍高于建模前水平[(0.41±0.59)g];C組整個實(shí)驗(yàn)期間體重增加滿意[(2.45±0.34)g],各組間比較P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.A、B、C組建模過程中新生鼠死亡率分別為7.69%、15.38%和0,各組死亡率的比較P㧐0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.A、B、C組NEC的發(fā)生率為38.46%(5/13)、84.62%(11/13)和0(0/13),各組間比較,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A、B、C組腸損傷組織病理學(xué)評分(?x±s)分別為(1.50±0.52)、(2.35±0.41)、(0.27±0.37),各組間比較P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;。 4.熒光定量PCR方法檢測iNOS、EGF基因表達(dá)的結(jié)果顯示,對iNOS:以C組為對照,iNOS在A、B兩組均顯著升高,A組是C組的2.74倍,B組是C組的12.46倍,P0.05;A、B兩組比較,A組表達(dá)較B組降低(P0.05);對EGF:以C組為對照,EGF在A、B兩組均有降低,但A組是C組的0.52倍,P0.05,B組是C組的0.85倍,P0.05;A、B兩組比較,兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論: 1.生后早期的新生鼠可通過部分配方奶喂養(yǎng)、100%氮?dú)馊毖酢?℃冷刺激和灌服低濃度LPS模擬與人類相類似的實(shí)驗(yàn)性NEC動物模型; 2.添加雙歧桿菌可減輕因配方奶喂養(yǎng)、缺氧、冷刺激和灌服LPS引起的體重減輕。 3.添加雙歧桿菌可降低實(shí)驗(yàn)性新生鼠NEC的發(fā)生率和腸損傷的嚴(yán)重程度。 4.新生鼠NEC時其回腸iNOS的基因表達(dá)增加;雙歧桿菌可能通過抑制iNOS的激活,減輕了腸道粘膜的損害,從而降低了NEC的發(fā)生率及其嚴(yán)重程度。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 趙紅梅,朱恩波;雙歧桿菌對動物腸道細(xì)菌和內(nèi)毒素移位的影響[J];中國獸醫(yī)科技;2004年12期

2 白愛平,歐陽欽,胡仁偉;雙歧桿菌抑制小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎腸道炎癥反應(yīng)的研究[J];中華消化雜志;2005年06期

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本文編號：2692362