發(fā)布時間：2020-05-16 19:09

【摘要】：前言 巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)是導致垂直傳播最常見的病原體,新生兒CMV感染可累及多個器官,從而表現(xiàn)出癥狀的多樣性。目前CMV感染新生兒的致病性研究多集中在母嬰傳播途徑和臨床治療等方面,而對不同基因型CMV的致病性差異方面的研究較少。本實驗以111例CMV感染患兒尿中CMV為模板,應用巢式PCR擴增CMV gB基因片段后,應用限制性內(nèi)切酶Rsa Ⅰ和Hinf Ⅰ,酶切分型。對引起新生兒感染CMV gB基因型進行分析,研究不同gB基因型CMV致病性的差異。 方法 1.擴增模板制備:具有臨床資料的111例CMV感染新生兒尿樣本中提取CMV DNA。 2.目的基因片段擴增:采用巢式PCR擴增CMV gB基因片段。外側(cè)引物應用文獻所應用的引物。5’引物1:5’-GTTCCGAAGC-CGAAGACTCG;5’引物2:5’-GCAGCACCTGGCTCTATCG;5’引物3:5’-GCCAGCTCACCTTCTGG,3’引物:3’-GCACCTTGACGCTGGTTTGG。內(nèi)側(cè)引物引自文獻:5’-TGGAACTCGAACGTTTGGC 3’-GAAACGCGCG-GCAATCG。(引物由上海博亞生物技術有限公司合成)。PCR擴增體系為50μl。反應程序如下:95℃預變性4min后開始循環(huán),95℃變性1min,55℃退火4.5sec,72℃延伸45sec,共35個循環(huán),最終72℃延伸5min。2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。 3.限制性內(nèi)切酶酶切:將擴增的CMV gB基因片段分別用限制性內(nèi)切酶Rsa Ⅰ(購自promega公司)和Hinf Ⅰ(購自大連寶生物)酶切,3%瓊脂糖凝膠電泳鑒定分型。 4.統(tǒng)計學分析:分析引起新生兒感染的CMV gB基因型,以及新生兒感
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

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本文編號：2667171