【摘要】： 目的 應(yīng)用全反式維甲酸(All-trans retinoic acid, ATRA)誘導(dǎo)建立C57BL/6J小鼠神經(jīng)管畸形(Neural tube defects, NTDs)動(dòng)物模型,研究凋亡在神經(jīng)管發(fā)育過程中的作用及其對(duì)NTDs發(fā)生發(fā)展的影響,探討凋亡在ATRA致NTDs中可能的作用機(jī)制。 方法 選取健康成年C57BL／6J小鼠,在懷孕至第8天以28mg/kg一次性灌胃大劑量ATRA誘導(dǎo)建立NTDs動(dòng)物模型,MoticK系列體視顯微鏡下觀察胎鼠畸形情況；HE染色,Olympus SZX-1LLB200顯微鏡下拍照觀察胚胎神經(jīng)管橫斷面形態(tài)學(xué)改變；TUNEL(TdT-mediate x-dUTP Nick End Labeling, TUNEL)技術(shù),檢測E11.5d時(shí)NTDs實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組凋亡情況；Image-pro plus軟件對(duì)所取圖像進(jìn)行圖像分析、測定陽性染色平均光密度(mean optical density, MOD)及陽性染色面積率,計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index, AI);免疫組化檢測caspase-3、-6、-9表達(dá),對(duì)照組與NTDs實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)的處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn),并對(duì)其進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果 1.過量ATRA具有明顯的胚胎致畸性,可致孕鼠子宮明顯充血淤血,造成無腦、脊柱裂等NTDs形態(tài)表現(xiàn)。 2. TUNEL陽性信號(hào)為綠色熒光,對(duì)照組組織細(xì)胞只有少量凋亡細(xì)胞,而NTDs實(shí)驗(yàn)組組織細(xì)胞濃度減少,凋亡細(xì)胞明顯增多。 3. NTDs實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞凋亡caspase-3、-6、-9蛋白表達(dá)量存在明顯差異。結(jié)論 1.應(yīng)用ATRA成功誘導(dǎo)建立C57BL/6J小鼠神經(jīng)管畸形動(dòng)物模型,為研究NTDs發(fā)病機(jī)制奠定了重要模型基礎(chǔ)。 2.凋亡在神經(jīng)管閉合中發(fā)揮一定作用,可能由于過度凋亡導(dǎo)致參與關(guān)鍵形態(tài)部位形成的細(xì)胞數(shù)量不足,而使神經(jīng)管閉合不完全。凋亡過度是導(dǎo)致NTDs發(fā)生的分子調(diào)控過程中的重要因素。 3.細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)因子caspase3、caspase6、caspase9蛋白表達(dá)參與了神經(jīng)管畸形的形成,可能是NTDs的發(fā)病機(jī)制之一,對(duì)于神經(jīng)干細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)因子進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)控,有可能成為治療NTDs的有效途徑。 目的 對(duì)Msx2C386T, Slug C1548A基因的多態(tài)性進(jìn)行綜合性分析,了解這2個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)同神經(jīng)管畸形發(fā)生的關(guān)系。 方法 采用PCR-ARMS,基因測序技術(shù),對(duì)59例有神經(jīng)管畸形兒生育史的婦女及73例同一時(shí)期妊娠期的婦女進(jìn)行多態(tài)性研究,并運(yùn)用計(jì)算機(jī)和有關(guān)分析軟件重構(gòu)兩個(gè)位點(diǎn)的三維空間結(jié)構(gòu)。 結(jié)果 病例組Msx2基因386位點(diǎn)T純合基因型和T等位基因頻率(分別為15.3%和31.4%)高于正常對(duì)照組(分別為4%和11.6%)。病例組Slug基因A純合基因型和A等位基因頻率(分別為25.4%和49.2%)高于正常對(duì)照組(分別為5.5%和21.6%)。Logistic回歸分析顯示：Msx2C386T位點(diǎn)T等位基因,Slug C1548A位點(diǎn)A等位基因均與神經(jīng)管畸形發(fā)病有關(guān)(P0.05),Msx2C386T位點(diǎn)T等位基因的比值比(OR)為3.466(95%CI 1.831-6.560)和Slug C1548A位點(diǎn)A等位基因的比值比(OR)為3.444(95%CI 2.021-5.868)。利用χ2檢驗(yàn)對(duì)Msx2 C386T和Slug C1548A兩個(gè)基因的綜合分析,兩個(gè)基因同時(shí)突變比單個(gè)基因突變與神經(jīng)管畸形的相關(guān)性高。三維空間結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn),由于Msx2386的C—T,在外顯子2的129位意味著蘇氨酸變成甲硫氨酸,Slug1548A—C被證明119位天冬氨酸轉(zhuǎn)變成谷氨酸,因此突變可能導(dǎo)致結(jié)構(gòu)或蛋白功能受損。 結(jié)論 山西省漢族人群Msx2 C386T和SlugC1548A基因位點(diǎn)突變與神經(jīng)管畸形發(fā)病有相關(guān)性
【圖文】：

ATRA致畸NTDs實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組En.sd鼠胚神經(jīng)管發(fā)育形態(tài)學(xué)比較圖l圖1一AEll.sd對(duì)照組正常鼠胚，可見神經(jīng)管閉合完全，腦泡發(fā)育良好(lSX)圖1一B，C，DEllsd實(shí)驗(yàn)組ATRA致畸鼠胚，體形較小，外觀可見頭部、尾部神經(jīng)管未閉合。(B，c圖可見出現(xiàn)腦裂、脊柱裂、尾裂:D圖可見腦部缺損處腦組織外露、尾裂)(14X)

ATRA致畸NTDs實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組En.sd鼠胚神經(jīng)管發(fā)育形態(tài)學(xué)比較圖l圖1一AEll.sd對(duì)照組正常鼠胚，可見神經(jīng)管閉合完全，腦泡發(fā)育良好(lSX)圖1一B，C，DEllsd實(shí)驗(yàn)組ATRA致畸鼠胚，體形較小，外觀可見頭部、尾部神經(jīng)管未閉合。(B，，c圖可見出現(xiàn)腦裂、脊柱裂、尾裂:D圖可見腦部缺損處腦組織外露、尾裂)(14X)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R748

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2661762