【摘要】： 目的 Dandy-walker綜合癥(DWS)是一類先天性神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常的疾病,是由于小腦發(fā)育畸形和第四腦室中側(cè)孔閉鎖,引起第四腦室囊性擴(kuò)大和繼發(fā)梗阻性腦積水,預(yù)后不良。目前,由于尚未發(fā)現(xiàn)DWS與某特定基因具有決定性的聯(lián)系,很多DWS與染色體異常有關(guān)的報(bào)道,幾乎涵蓋了人類全部染色體。因此,產(chǎn)前診斷時(shí)對(duì)DWS病例進(jìn)行分子遺傳學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)尤為重要�，F(xiàn)在大部分醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)對(duì)DWS的遺傳學(xué)檢測(cè)手段主要為染色體核型分析,熒光原位雜交等方法,發(fā)現(xiàn)部分病例有染色體的三體,部分三體,部分缺失等染色體異常。本研究是在染色體核型分析,熒光原位雜交及多色熒光原位雜交技術(shù)等基礎(chǔ)上,對(duì)DWS病例進(jìn)行DNA提取,采用最新的基因芯片比較基因組雜交技術(shù),詣在尋找更小片段的不平衡染色體異常及特定基因片段的丟失以期發(fā)現(xiàn)與其相關(guān)的致病基因,同時(shí)探討簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的產(chǎn)前診斷手段。 方法 1、細(xì)胞培養(yǎng),并用秋水仙素阻斷有絲分裂,進(jìn)行核型分析 外周血取加入長(zhǎng)氏培養(yǎng)液,37℃溫箱中孵育二天,加秋水仙素,后孵育1天。收取細(xì)胞,甲醇-冰醋酸固定液固定,滴片,干燥24小時(shí)后G-顯帶,核型分析。 2、熒光原位雜交 將外周血加入細(xì)胞裂解液,37℃水浴鍋中20分鐘,甲醇-冰醋酸固定液固定,滴片,干燥后加入探針,放入雜交爐內(nèi)雜交。 3、基因芯片比較基因組雜交 苯酚法提取外周血,或羊水或死胎組織中DNA,用數(shù)字聲裂儀(用1.0檔)裂解與病人相同性別的WT DNA及病人DNA。病人的基因用Cy3標(biāo)記。WTDNA用Cy5標(biāo)記。將樣品放入PCR儀中10分鐘(98℃)使其變性。在冰水中冷去1分鐘,加入Klenow反應(yīng)混合物。放入PCR儀中37℃孵化2小時(shí),加入10.5M EDTA結(jié)束Klenow反應(yīng),將每個(gè)樣本置于暗室中10分鐘,最大轉(zhuǎn)數(shù)離心10分鐘,用冰凍的80%酒精沖洗平板,最大速離心2分鐘。再用20ul HPLC水再次脫水干燥平板。輕輕拍打使其重新懸起,測(cè)量。將13病人的與WT樣本混合在一起,在95℃下5分鐘使之變性后加樣到Nim385 VI基因芯片上后加上Maui SL蓋。將密封的芯片放入Maui雜交裝置中42℃孵化,運(yùn)用B程序(前后混合程序)16到20小時(shí)雜交。后洗片,掃描,采用Nimblescan v2進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果 在24例染色體分析中,核型為46,XX 12例,46,XY 7例,檢出染色體異常5例,其中9例基因芯片檢測(cè)中,未發(fā)現(xiàn)染色體微缺失及微擴(kuò)增病例。其中兩例羊水標(biāo)本存在染色體非整倍體異常：一例13三體(47,XX,+13),一例47,XXX；一例死胎組織標(biāo)本為三倍體：69,XXX；一例MVA綜合癥病例；及一例復(fù)雜染色體3,4,6,8,9平衡易位(46,XY,t(3,4,6,8,9))。 結(jié)論 我們的24例Dandy-Walker綜合癥患兒中發(fā)現(xiàn)了5例具有染色體異常,約占患兒的20.83%,實(shí)驗(yàn)表明1.部分DWS由染色體數(shù)目異常引起；2.DWS并非由特定基因片段拷貝數(shù)異常所致；3.Array-CGH可快速,精確的對(duì)基因拷貝數(shù)異常導(dǎo)致的先天畸形做出診斷,是可靠準(zhǔn)確先進(jìn)的最新檢測(cè)技術(shù),可以為更好地產(chǎn)前診斷胎兒染色體異常提供了一個(gè)有益的手段。
【圖文】：

加入10ulTE溶解DNA{用Nano一drop測(cè)DNA濃度4、基因芯片比較基因組雜交(Array一CGH)靦ay一CGH技術(shù)是將病人DNA與對(duì)照DNA(購(gòu)買的商品正常男性或女性全基因組DNA)分別標(biāo)記為紅色熒光與藍(lán)色熒光，等量雜交在DNA芯片上以取代原來的分裂中期的染色體，如果病人的DNA拷貝數(shù)增多，則紅色熒光較多;如果病人DNA拷貝數(shù)減少，則藍(lán)色熒光較多(見圖llz]);后運(yùn)用軟件分析，比較病人DNA與對(duì)照DNA，描繪線性圖，可直觀的分析出基因片段的丟失或擴(kuò)增(見圖2)。采用高密度的基因芯片一比較基因組雜交技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)細(xì)微到50一100kb的堿基序列，，而一般致病基因多在lookb左右，是目前最為精準(zhǔn)的基因診斷技術(shù)。

果病人DNA拷貝數(shù)減少，則藍(lán)色熒光較多(見圖llz]);后運(yùn)用軟件分析，比較病人DNA與對(duì)照DNA，描繪線性圖，可直觀的分析出基因片段的丟失或擴(kuò)增(見圖2)。采用高密度的基因芯片一比較基因組雜交技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)細(xì)微到50一100kb的堿基序列，而一般致病基因多在lookb左右，是目前最為精準(zhǔn)的基因診斷技術(shù)。圖1，基因芯片一比較基因組雜交技術(shù)(Array一CGH)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R748

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 石元洪,胡紀(jì)源,楊任民;表現(xiàn)為腦性癱瘓的Dandy-Walker綜合征1例[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2003年01期

2 薛淵博;宋鑫;;腫瘤染色體畸變分析方法新進(jìn)展[J];遺傳;2008年12期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 晉云;肝細(xì)胞癌SuperArray腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因芯片篩選及Cathepsin L表達(dá)實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 鐘蕓詩(shī);CUGBP1基因?qū)Y(jié)直腸癌增殖侵襲功能的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 符芳;微陣列比較基因組雜交技術(shù)在診斷和產(chǎn)前診斷不平衡染色體畸變中的應(yīng)用[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

2 薛淵博;鼻咽癌組織中EB病毒編碼的LMP-1與Ets-1和CyclinD1三蛋白之間的相關(guān)性研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

本文編號(hào)：2655880