【摘要】：目的 新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是指在圍產(chǎn)期因窒息而造成腦的缺氧缺血性損害,是導致新生兒神經(jīng)功能障礙的重要原因。近年來研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)衍生因子-1(SDF-1)對缺氧缺血性腦損傷有保護作用,本實驗通過建立新生小鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型,腹腔注射外源性重組鼠基質(zhì)衍生因子(Recombinant murine SDF-1α,SDF-1)。通過①稱量大腦半球重量變化,評估腦損傷嚴重程度；②觀察各組小鼠腦組織大體變化；③采用實時RT-PCR技術(shù)檢測小鼠海馬組織SDF-1 mRNA表達；④采用免疫組化方法觀察各個時段各組小鼠腦組織SDF-1蛋白的表達；⑤采用western blot法檢測各個時段各組小鼠海馬組織caspase-3蛋白的表達水平。探討SDF-1對新生小鼠HIBD的神經(jīng)損傷的保護作用,為進一步研究新生兒缺氧缺血性腦病有效治療方式提供動物實驗依據(jù)。 方法 將7日齡新生小鼠,隨機分為假手術(shù)組、生理鹽水組、SDF-1干預組,每組30只。各組動物根據(jù)處死時間隨機分為24h、3d、7d三個亞組。生理鹽水組及SDF-1干預組參照Rice法制備標準HIBD模型,SDF-1治療組于造模后30min腹腔注射SDF-12.0μg/d,連續(xù)7d,假手術(shù)組與生理鹽水組腹腔注射生理鹽水。分別于造模前及造模后對每只小鼠進行翻身能力、夾尾右旋測試。各組新生小鼠于相應時間點斷頭取腦組織后肉眼觀察腦組織大體形態(tài)的改變,其中7d組小鼠分離海馬前先離斷大腦為左右半球,快速稱量大腦半球重量,檢測大腦半球萎縮程度；分別利用RT-PCR技術(shù),免疫組織化學及Western Blot方法檢測三組小鼠不同時間點右側(cè)海馬組織SDF-1 mRNA.SDF-1蛋白及caspase-3的表達。 結(jié)果 1.行為能力檢查 術(shù)前每只小鼠均做翻身能力、夾尾右旋測定,90只均無翻身不能及夾尾右旋。術(shù)后假手術(shù)組測定結(jié)果同前；經(jīng)歷缺氧缺血的60只小鼠,19只不能翻身,46只出現(xiàn)夾尾右旋,16只表現(xiàn)不能翻身和夾尾右旋同時存在。 2.腦大體標本觀察 假手術(shù)組腦組織外觀正常,未見任何病理變化。新生小鼠HIBD后生理鹽水組結(jié)扎側(cè)半球腦組織受損嚴重,在24h時蒼白、水腫明顯,體積明顯大于對側(cè),72h可看到結(jié)扎側(cè)半球局部出現(xiàn)淤血,液化壞死灶,7d可見結(jié)扎側(cè)半球體積較未結(jié)扎側(cè)減��；SDF-1干預組小鼠腦組織外觀改變與同時間點生理鹽水組相比病理變化明顯減輕。 3.腦萎縮程度的比較 術(shù)后7d假手術(shù)組小鼠大腦半球左右對稱,無萎縮；生理鹽水組結(jié)扎側(cè)半球萎縮最明顯[(29.95±2.05)%],較假手術(shù)組[(1.27±0.01)%]有顯著的差異(P0.05)；SDF-1干預組結(jié)扎側(cè)半球輕度萎縮[(12.20±1.78)%],與生理鹽水組相比差異也具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4.SDF-1表達檢測結(jié)果 假手術(shù)組小鼠的腦組織SDF-1mRNA及蛋白呈低水平表達；生理鹽水組小鼠在HIBD后24h表達開始增高,3d時表達達高峰,此后逐漸下降,但在7d時仍維持較高的水平,各時間點與假手術(shù)組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；在SDF-1干預組各時間點SDF-1mRNA及蛋白持續(xù)性高表達,與生理鹽水組的差異顯著(P0.05)。 5. Caspase-3蛋白表達檢測結(jié)果假手術(shù)組在各時間點僅見微弱的表達,生理鹽水組caspase-3在HIBD后24h達高峰,以后逐漸降低,7d時caspase-3蛋白表達仍高于假手術(shù)組,而SDF-1干預組較同時間點的生理鹽水組能夠明顯降低caspase-3表達水平(P0.05)。 結(jié)論 1.新生小鼠缺氧缺血性腦損傷模型建立成功。 2.SDF-1在新生小鼠缺氧缺血性腦損傷后的腦組織中表達明顯增加,先呈遞增趨勢,后逐漸下降。 3.外源性SDF-1可通過血腦屏障進入腦組織發(fā)揮腦保護作用,并能刺激損傷區(qū)腦組織SDF-1表達增加。 4.早期外源性的SDF-1治療可減輕HIBD后腦萎縮的程度。 5.SDF-1能夠抑制凋亡蛋白酶caspase-3的表達,抑制神經(jīng)細胞凋亡,從而對缺氧缺血引起的神經(jīng)細胞損傷起到一定的保護作用,進一步為臨床治療新生兒缺氧缺血性腦損傷提供新的治療思路。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R722.12

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