【摘要】： 目的 呼吸道合胞病毒(RSV)是全球嬰幼兒下呼吸道感染的首位病毒病原體，兒童2歲前都至少感染過(guò)一次RSV[ 1 ]，多數(shù)會(huì)發(fā)生再感染，與日后發(fā)生喘息密切相關(guān)，它是嚴(yán)重危害嬰幼兒健康的一種病毒。重組人干擾素α-1b是我國(guó)第一個(gè)自主開發(fā)的基因工程新藥，據(jù)研究報(bào)告稱，與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品相比，重組人干擾素α-1b在抗病毒治療中不僅療效高，而且不良反應(yīng)輕，中和抗體產(chǎn)生率低，是適合中國(guó)人使用的基因工程藥物。已有實(shí)驗(yàn)表明重組人干擾素α-1b作為一種較為安全和不產(chǎn)生耐藥性的廣譜抗病毒制劑，在RSV感染治療中有巨大的優(yōu)勢(shì)。但到目前為止，國(guó)內(nèi)應(yīng)用重組人干擾素α-1b治療RSV感染，多選肌肉注射給藥，兒童依從性較差，且會(huì)引起發(fā)熱、肌肉酸痛等不良反應(yīng)，也有關(guān)于霧化吸入此藥治療呼吸道病毒感染的臨床報(bào)告，但在霧化吸入干擾素α-1b治療RSV感染方面缺乏相關(guān)實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。為此，我們建立了RSV感染的小鼠模型，觀察改變給藥途徑后（即經(jīng)霧化吸入干擾素α-1b）其在小鼠體內(nèi)對(duì)RSV的抑制作用，通過(guò)與霧化吸入利巴韋林的療效比較，探討霧化吸入干擾素α-1b治療呼吸道合胞病毒感染的有效性，為今后的臨床試驗(yàn)提供理論依據(jù)。 方法 將40只BALB/c小鼠滴鼻感染RSV，制備成RSV感染模型后隨機(jī)分為4組：生理鹽水對(duì)照組；干擾素α-1b治療組；利巴韋林治療組；干擾素α-1b+利巴韋林治療組。分別霧化吸入生理鹽水、干擾素α-1b、利巴韋林、干擾素α-1b+利巴韋林。第5天各組中隨機(jī)抽取5只小鼠處死，取左肺組織處理后用于光鏡觀察肺組織病理改變，并計(jì)算病理積分(PS)，將右肺組織處理后用于透射電鏡觀察；各組中其它5只小鼠處死后無(wú)菌分離氣管，用生理鹽水進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，收集支氣管肺泡灌洗液（BALF），使用血球計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)，離心處理沉淀物涂片后，按淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)分類計(jì)數(shù)，上清液用于RSV實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR的測(cè)定。 結(jié)果 1.病理學(xué)檢查光鏡形態(tài)學(xué)觀察：三個(gè)治療組小鼠肺病理變化較對(duì)照組明顯減輕,且干擾素α-1b治療組較利巴韋林治療組病變更輕；經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理光鏡PS結(jié)果：三個(gè)治療組較對(duì)照組顯著減少，治療組間無(wú)差異；電鏡下觀察：三個(gè)治療組病理變化較對(duì)照組明顯減輕。 2.細(xì)胞學(xué)檢查：三個(gè)治療組BALF白細(xì)胞計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞比例顯著低于對(duì)照組（P＜0.05)，干擾素α-1b治療組和干擾素α-1b+利巴韋林治療組無(wú)顯著差異，兩組均顯著低于利巴韋林治療組；各組BALF白細(xì)胞分類都以淋巴細(xì)胞為主。 3.支氣管肺泡灌洗液RSV實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR的測(cè)定結(jié)果：三個(gè)治療組顯著低于生理鹽水對(duì)照組（P＜0.05)，干擾素α-1b治療組及干擾素α-1b+利巴韋林治療組無(wú)顯著差異，兩組均顯著低于利巴韋林治療組。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)光鏡形態(tài)學(xué)顯示單用霧化吸入干擾素α-1b能明顯減輕小鼠RSV肺炎的病理改變，效果同干擾素α-1b+利巴韋林，但優(yōu)于單用利巴韋林；光鏡病理積分顯示霧化吸入干擾素α-1b、霧化吸入干擾素α-1b+利巴韋林及霧化吸入利巴韋林能顯著減輕肺部病理改變，三種方法效果相同；電鏡顯示霧化吸入干擾素α-1b、霧化吸入干擾素α-1b+利巴韋林及霧化吸入利巴韋林能減輕小鼠肺病理改變，三種方法效果相同；BALF細(xì)胞學(xué)檢查顯示霧化吸入干擾素α-1b、霧化吸入干擾素α-1b+利巴韋林均可明顯減少氣道炎癥細(xì)胞，兩種方法效果相同，但顯著優(yōu)于單用利巴韋林；支氣管肺泡灌洗液RSV實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定結(jié)果也顯示霧化吸入干擾素α-1b、霧化吸入干擾素α-1b+利巴韋林均能有效降低病毒的拷貝數(shù)，兩種方法效果相同，但明顯優(yōu)于單獨(dú)霧化吸入利巴韋林。因此單獨(dú)霧化吸入干擾素α-1b與干擾素α-1b+利巴韋林合用治療呼吸道合胞病毒感染的效果相同，但明顯優(yōu)于單獨(dú)霧化吸入利巴韋林。故單獨(dú)霧化吸入干擾素α-1b是治療RSV感染的有效方法。
【圖文】：

A： 生 理鹽 水對(duì) 照 組 B： 干擾 素 α- 1 b治 療 組 ； C： 利 巴韋 林 治療 組 D ：干 擾 素α - 1 b+ 利 巴韋 林 治療 組 圖1 小 鼠肺 組 織光 鏡 病理 學(xué)檢 查 (H E ,× 4 00 ) 3. 2. 2 光 鏡病 理 積 分 B 組 、 C 組、 D 組和 A 組 比 較 有 顯 著 性 差 異 ，， 病 理 積分 明顯 低 于 A組 ； B 組、 C 組 、D 組 三組 間 無(wú) 顯著 性 差 異。 結(jié) 果 見表 1 。 表1 4組 小鼠 肺 組 織的 P S 積分 比 較 ( x ±s ) 注： 1 ） 與A 組 比 較， P ＜ 0. 0 5 組別 n PS 積 分 A組 B組 C組 D組 55552. 8 0 ± 0 .4 5 1. 0 0 ± 0 .7 1 1）1. 4 0 ± 0

3. 2. 3 電 鏡下 肺 組 織 改 變 A 組： 肺 泡 壁 大 部 分 呈 破 壞 、 溶 解 狀 ， 有 細(xì)胞 融合 ， 肺 泡 腔 內(nèi) 富 含 細(xì) 胞 碎 片 ， 有 單 核 細(xì) 胞 和 淋 巴 細(xì) 胞 浸 潤(rùn) ， 其 胞 質(zhì) 中可 見大 小不 一 、形 態(tài) 各 異的 R SV 顆粒 及 R S V包 涵 體( 圖2 A )； B 組 ： 肺 泡 壁結(jié) 構(gòu) 僅 有部 分 破 壞 , Ⅰ 型 、 Ⅱ 型肺 泡 上 皮 細(xì) 胞 腫 脹 ， 無(wú) 細(xì) 胞 融 合 ， 單 核 細(xì) 胞 中未 見到 R S V顆 粒 及 RS V 包 涵 體( 圖 2 B) ； C 組 及D 組 : 病理 變 化 同B 組 。 圖 2 小 鼠肺 組織 電 鏡病 理 學(xué)檢 查 (× 2 00 0 0 ) 3. 3 支氣 管 肺 泡灌 洗 液 結(jié)果 3. 3. 1 白 細(xì)胞 計(jì) 數(shù) B組 、 C 組和 D組 BA L F 中 白 細(xì) 胞 總 數(shù) 及 淋 巴 細(xì) 胞 比 例 與A 組比 較 有 顯著 性 差 異 ，明 顯 低于 A 組 ； B 組、 D 組 B AL F 中 白細(xì) 胞 總 數(shù) 及淋 巴 細(xì) 胞比 例 無(wú) 顯著 性 差 異, 兩 組 與 C組 比 較 均有 顯 著 性 差異 ， 明 顯低 于 C 組； 各 組 BA L F白 細(xì) 胞分 類 都以 淋 巴細(xì) 胞 為主 。 結(jié)果 見 表2 。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R725.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2643408