【摘要】： 目的高膽紅素血癥(hyperbilirubinemia)是新生兒期最常見的疾病,嚴(yán)重者可致死或造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)傷殘而終生受累。激活素A(activin A,ACT A)是一種糖蛋白激素,最新研究證實(shí),ACT A參與缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的發(fā)病過程,并且外源性ACT A對新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護(hù)作用。Caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中的關(guān)鍵酶,通過降解Caspase-3及相應(yīng)底物可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本研究采用動物實(shí)驗(yàn)的方法,研究新生大鼠高膽紅素血癥不同程度腦損傷后ACT A、Caspase-3表達(dá)的變化規(guī)律,旨在為進(jìn)一步探討高膽紅素血癥新生兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的發(fā)病機(jī)制與有效的防治措施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法將100只新生7日齡SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組(C組,n=10)和實(shí)驗(yàn)組(T組,n=90),T組又根據(jù)腹腔注射膽紅素劑量的依次增加分為T1,T2和T3組,每組30只。C組SD大鼠腹腔注射生理鹽水1.0ml,T1組SD大鼠腹腔注射膽紅素50μg/g,T2組腹腔注射膽紅素100μg/g,T3組腹腔注射膽紅素200μg/g。各實(shí)驗(yàn)組根據(jù)造模結(jié)束后不同時(shí)間點(diǎn)(0h、4h、8h、12h、24h)分為5組,每組6只大鼠。觀察各組幼鼠不同時(shí)間點(diǎn)的神經(jīng)行為異常如抽搐、翻滾、俯伏、對外界刺激的逃避反應(yīng)減弱等;檢測各組幼鼠血清膽紅素濃度、腦組織膽紅素濃度及腦組織含水量;取各組幼鼠腦組織置4%多聚甲醛固定、常規(guī)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋,冠狀切片(厚4μm),常規(guī)蘇木素-伊紅(hematoxylin eosin,HE)染色,光鏡下觀察組織病理改變,免疫組織化學(xué)方法檢測腦組織內(nèi)源性ACTA和Caspase-3的表達(dá)。數(shù)據(jù)以(?)±s表示,應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果C組及T1組幼鼠于造模結(jié)束后各時(shí)間點(diǎn)均未見明顯的神經(jīng)行為異常。T2組、T3組幼鼠分別于造模后12h、8h出現(xiàn)翻滾、震顫、俯伏及對外界刺激的逃避反應(yīng)減弱等表現(xiàn),T3組幼鼠行為異常表現(xiàn)較T2組明顯。造模結(jié)束后0h,各組幼鼠血清膽紅素濃度、腦組織膽紅素濃度及腦組織含水量無顯著性差異(P＞0.05)。T1組血清膽紅素濃度于造模后8h、12h均高于C組(P＜0.05),T1組腦組織膽紅素含量、腦組織含水量及ACT A、Caspase-3表達(dá)于造模后各時(shí)間點(diǎn)與C組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。T2、T3組血清膽紅素濃度、腦組織膽紅素濃度、腦組織含水量及ACT A、Caspase-3表達(dá)于造模后各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于C組(P＜0.01)。腦組織膽紅素濃度與腦組織含水量及腦組織ACT A、Caspase-3表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.876,P＜0.01;r=0.886,P＜0.01;r=0.900,P＜0.01)。C組、T1組大腦皮質(zhì)、海馬區(qū)神經(jīng)元排列整齊,結(jié)構(gòu)完整,未見膽紅素沉積;T2、T3組神經(jīng)元數(shù)量減少,結(jié)構(gòu)紊亂,并可見不等量的膽紅素沉積。ACT A陽性細(xì)胞主要出現(xiàn)在大腦皮質(zhì)及海馬區(qū),陽性反應(yīng)主要位于細(xì)胞漿及突起,胞核不著色;Caspase-3陽性細(xì)胞以神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞為主,陽性免疫反應(yīng)位于細(xì)胞核,也有一些位于胞漿及突起。 結(jié)論 1.高膽紅素血癥模型鼠均存在不同程度的腦損傷及神經(jīng)行為異常;其程度與造模后腦組織膽紅素含量成正相關(guān)。 2.高膽紅素血癥可誘導(dǎo)模型鼠腦組織Caspase-3表達(dá)增加,表明高膽紅素血癥可加速神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 3.高膽紅素血癥可誘導(dǎo)模型鼠腦組織ACT A表達(dá)增加,提示內(nèi)源性ACT A參與了高膽紅素血癥所致新生大鼠腦組織損傷的發(fā)病過程,可望成為新生兒高膽紅素血癥及其后所致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷病情判定的敏感指標(biāo)之一。
【圖文】：

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文3腦組織病理改變C組、Tl組各時(shí)間點(diǎn)腦組織細(xì)胞排列整齊，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，，均未見膽紅素沉積。T2、T3組在造模結(jié)束后0h，未見膽紅素沉積，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，神經(jīng)基質(zhì)無水腫;以后各時(shí)間點(diǎn)大腦皮層及海馬等不同部位神經(jīng)元數(shù)量減少逐漸明顯，結(jié)構(gòu)紊亂，可見細(xì)胞腫脹，核固縮、碎裂、溶解等，部分細(xì)胞呈嗜酸性變，腦組織膽紅素沉積逐漸增多(見圖l)。圖IHE染色圖片

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文3腦組織病理改變C組、Tl組各時(shí)間點(diǎn)腦組織細(xì)胞排列整齊，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，均未見膽紅素沉積。T2、T3組在造模結(jié)束后0h，未見膽紅素沉積，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，神經(jīng)基質(zhì)無水腫;以后各時(shí)間點(diǎn)大腦皮層及海馬等不同部位神經(jīng)元數(shù)量減少逐漸明顯，結(jié)構(gòu)紊亂，可見細(xì)胞腫脹，核固縮、碎裂、溶解等，部分細(xì)胞呈嗜酸性變，腦組織膽紅素沉積逐漸增多(見圖l)。圖IHE染色圖片
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R722.1

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本文編號：2641239