【摘要】：研究目的 探討谷氨酰胺(Glutamine，GLN)對(duì)不同新生兒外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)的增殖和不同階段的激活，以及對(duì)PMBC中T細(xì)胞亞群分化和自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)活性的影響。 研究方法和內(nèi)容 分別對(duì)健康早產(chǎn)兒、健康足月兒和感染性疾病患兒的PBMC經(jīng)添加GLN(GLN組)或不添加GLN(非GLN組)培養(yǎng)后進(jìn)行以下研究： 1、PBMC的增殖度：四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT法)檢測(cè)經(jīng)T細(xì)胞絲裂原—植物血凝素(Phytohemagglutinin，PHA)刺激96小時(shí)后PBMC的增殖度； 2、PBMC早期激活標(biāo)志IL-2mRNA的表達(dá)：逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)檢測(cè)經(jīng)PHA刺激48小時(shí)后PBMC中IL-2mRNA的表達(dá)； 3、PBMC晚期激活標(biāo)志CD25的表達(dá)：流式細(xì)胞儀(Flow-cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)經(jīng)T細(xì)胞絲裂原—刀豆蛋白(Concanavalin A，ConA)刺激66—72小時(shí)后PBMC中CD25分子的表達(dá)； 4、T細(xì)胞亞群分化：FCM檢測(cè)經(jīng)ConA刺激66—72小時(shí)后PBMC中CD4、CD8T細(xì)胞亞群的陽性細(xì)胞表達(dá)率(Positive expression cell rate，PECR)； 5、NK細(xì)胞活性：FCM檢測(cè)經(jīng)脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)和白介素—2(Interleukin-2，IL-2)刺激96小時(shí)后PBMC中表型為CD3—CD16+CD56+的成熟NK細(xì)胞陽性細(xì)胞表達(dá)率。 結(jié)果 1、免疫細(xì)胞增殖度：GLN組健康早產(chǎn)兒和足月兒、感染患兒PBMC受PHA刺激96小時(shí)后其細(xì)胞增殖度的水平均明顯高于非GLN組(P＜0.05)。 2、IL-2mRNA的表達(dá)：經(jīng)RT-PCR檢測(cè)，GLN對(duì)PHA激活的不同新生兒PBMC的早期激活標(biāo)志IL-2mRNA表達(dá)均無明顯影響(P＞0.05)。 3、CD25分子的表達(dá)：經(jīng)FCM檢測(cè)，GLN能使健康早產(chǎn)兒和足月兒外周血中ConA 谷氨酞胺對(duì)新生兒外周血單個(gè)核細(xì)胞免疫特性的彭響中文提要 激活的PBMC表面表達(dá)的晚期激活標(biāo)志CD25陽性細(xì)胞表達(dá)率升高(P0.05)及健康 足月)匕外周血中ConA激活的PBMC表面表達(dá)晚期激活標(biāo)志的CD25表達(dá)水平升高 (P0 .05);而對(duì)健康早產(chǎn)兒外周血中ConA激活的PBMC表面CD25表達(dá)水平和感 染患兒外周血中ConA激活的PBMC表面CD25分子的表達(dá)無明顯影響(P0.05)。 4、T細(xì)胞亞群:GLN明顯增加受ConA刺激后不同新生兒外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD4+ 淋巴細(xì)胞數(shù)量和比例(P0.05)，同時(shí)提高CD4/CDS的比值。 5、NK細(xì)胞的活性:GLN對(duì)健康早產(chǎn)兒和足月兒的PBMC受LPS和IL一2刺激%小 時(shí)后cD3一cD16十cD56十分子的陽性細(xì)胞表達(dá)率無明顯影響(P0.05)，但能提高感染患 兒PBMC表面的eo3一en 16+CD56+分子的陽性表達(dá)(p0.05)。 結(jié)論 1、GLN能提高體外新生兒PBMC的增殖水平，同樣是體外新生兒細(xì)胞培養(yǎng)中增殖和 存活必不可少的物質(zhì); 2、GLN能增強(qiáng)體外新生兒PBMC的激活，可能有利于其免疫功能的發(fā)揮;; 3、GLN能促進(jìn)CD4十T細(xì)胞增殖，提高CD4+/ CDS+比例，從而提示GLN可能對(duì)新 生兒T細(xì)胞亞群的分化成熟有明顯促進(jìn)作用; 4、GLN對(duì)感染患兒NK細(xì)胞的活性恢復(fù)有一定的促進(jìn)作用，提示在感染情況下GLN 可減輕NK細(xì)胞功能抑制。 總之，GLN能在一定程度上能促進(jìn)新生兒外周血單個(gè)核細(xì)胞體外的增殖和免疫功 能的成熟。
【圖文】：

(a0eg為非GLN組;bdfg為GLN組)圖2IL一ZmRNA擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖表2各組IL一ZmRNA的表達(dá)水平的比較(與p一actin的灰度比)例數(shù)非GLN組0.96士0.210.92士0.240.76士0.18GLN組0，95士0.210.99士0.370.85士0.02>0.05>0.05>0.050，..1CU月.1月.1j..1早產(chǎn)組足月組感染組對(duì)照組哥。nl叮2。RNA達(dá)水表平
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R722.1

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本文編號(hào)：2627579