【摘要】：背景呼吸是維持機(jī)體新陳代謝和其他功能活動(dòng)所必需的基本生理過程之一。正常穩(wěn)定的節(jié)律性呼吸則是機(jī)體得以存活的必要條件,其源自于在各級呼吸中樞中有著重要作用的延髓呼吸中樞。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)存在內(nèi)源性孕酮和孕酮受體,其對外傷性顱腦損傷和腦血管意外等疾病具有顯著地中樞性神經(jīng)保護(hù)作用,但是孕酮及其受體對中樞神經(jīng)電生理活動(dòng)是否也具有一定的調(diào)節(jié)作用和效應(yīng)機(jī)制目前還尚未得知。因此,研究孕酮和孕酮受體對新生大鼠離體延髓腦片呼吸性基本節(jié)律放電(respiratory-related rhythmic discharge activity,RRDA)的調(diào)節(jié)作用和機(jī)制,能夠有助于研究哺乳動(dòng)物延髓呼吸中樞的發(fā)育,達(dá)到對中樞呼吸性疾病預(yù)防和治療的目的。目的探討孕酮受體是否參與調(diào)節(jié)離體延髓腦片RRDA和吸氣神經(jīng)元放電,明確孕酮受體介導(dǎo)該作用的機(jī)制,為中樞性相關(guān)呼吸疾病的臨床預(yù)防和治療提供思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法取出生2 d的Sprague-Dawley新生大鼠,雌雄不拘。制備新生大鼠離體延髓腦片標(biāo)本,并持續(xù)通入體積分?jǐn)?shù)95%O_2+體積分?jǐn)?shù)5%CO_2的混合氣體,25~27℃條件下,記錄RRDA和mNRF區(qū)吸氣神經(jīng)元放電。通過BL-420F生物信號采集系統(tǒng)分析記錄RRDA的三個(gè)指標(biāo):吸氣時(shí)程(inspiratory time,TI)、吸氣幅度(inspiratory strength,IA)、和呼吸頻率(respiratory frequency,RF)以及吸氣神經(jīng)元放電的三個(gè)指標(biāo):放電時(shí)程(bursting time,BT)、放電幅度(bursting amplitude,BA)、放電頻率(bursting frequency,BF)。1.研究孕酮受體對新生大鼠離體延髓腦片RRDA的調(diào)節(jié)作用。本部分實(shí)驗(yàn)分為4組:對照組、孕酮組(受體激動(dòng)劑)、米非司酮組(受體抑制劑)以及孕酮和孕酮+米非司酮混合組。每組6個(gè)腦片,分別使用空白ACSF、含濃度為5、10、20、40μmol/L孕酮的ACSF、含濃度為5、10、20、40μmol/L米非司酮的ACSF以及最適濃度孕酮和最適濃度孕酮+最適濃度米非司酮灌流腦片。記錄并對比分析各組離體延髓腦片RRDA的TI、IA、RF三個(gè)指標(biāo)的變化情況,明確孕酮對新生大鼠離體延髓腦片RRDA的最適濃度,并判斷孕酮和米非司酮對RRDA的作用是否經(jīng)孕酮受體途徑。2.在記錄到RRDA放電的離體延髓腦片上,采用細(xì)胞外記錄法使用玻璃微電極記錄孕酮受體對新生大鼠離體延髓腦片面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)(the medial area of nucleus retrofacialis,mNRF)吸氣神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響。記錄到細(xì)胞放電后對腦片依次灌流含20μmol/L孕酮的ACSF、空白ACSF沖洗、含20μmol/L米非司酮的ACSF,根據(jù)吸氣神經(jīng)元放電的變化情況,分析孕酮濃度與孕酮受體發(fā)揮作用和RRDA的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果1.對照組新生大鼠腦片RRDA在灌流10、20、30、40、50min時(shí)TI、IA、RF比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),說明50min內(nèi)灌流的腦片標(biāo)本RRDA無衰弱現(xiàn)象,本模型具有可靠的穩(wěn)定性。2.不同濃度孕酮組與對照組使用空白ACSF灌流10min和給藥前相比具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),說明在5μmol/L-20μmol/L濃度范圍內(nèi),孕酮能夠興奮RRDA,且20μmol/L的孕酮是興奮RRDA的最適濃度。3.不同濃度米非司酮組與對照組使用空白ACSF灌流10min和給藥前相比具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),說明在5μmol/L-20μmol/L濃度范圍內(nèi),米非司酮能夠抑制RRDA,且20μmol/L的米非司酮是抑制RRDA的最適濃度。4.混合組使用20μmol/L孕酮和20μmol/L孕酮+20μmol/L米非司酮與對照組使用空白ACSF灌流10min和給藥前相比,單獨(dú)使用孕酮TI、IA、RF之間具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),對RRDA具有興奮作用;聯(lián)合使用孕酮+米非司酮TI、IA、RF之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),對RRDA無任何作用,說明孕酮對RRDA的興奮作用是通過受體途徑實(shí)現(xiàn)的。5.孕酮能增強(qiáng)新生大鼠離體延髓腦片mNRF區(qū)吸氣神經(jīng)元的興奮性,延長BT、提高BA、增加BF;孕酮受體拮抗劑米非司酮能抑制mNRF區(qū)吸氣神經(jīng)元的興奮性,縮短BT、降低BA、減少BF。結(jié)論1.新生大鼠離體延髓腦片有孕酮受體的存在,對RRDA具有正性調(diào)節(jié)作用。2.吸氣神經(jīng)元細(xì)胞膜上有孕酮受體的存在,其參與調(diào)節(jié)mNRF區(qū)吸氣神經(jīng)元放電過程。3.孕酮受體參與調(diào)節(jié)延髓呼吸中樞的呼吸功能。
【圖文】：

min 98.67±5.16 98.67±5.63 98.55±8.4450 min 96.54±4.21 98.33±4.26 97.02±8.67F 0.751 0.812 0.887P 0.680 0.644 0.720圖 2 對照組不同時(shí)間點(diǎn) RRDA 圖2.2 不同濃度孕酮組 RRDA本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與給藥前和對照組 10min 時(shí)數(shù)據(jù)相比，5μmol/L 的孕酮對RRDA 無作用；10μmol/L 的孕酮延長 TI、增強(qiáng) IA、增加 RF，對 RRDA 產(chǎn)生興奮作

圖 3 不同濃度孕酮對 RRDA 的作用2.3 不同濃度米非司酮組 RRDA本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與給藥前和對照組 10min 時(shí)數(shù)據(jù)相比，5μmol/L 的米非司已縮短 TI、降低 IA、降低 RF；10μmol/L 的米非司酮對 RRDA 產(chǎn)生全面抑制作用20μmol/L 的米非司酮對 RRDA 的抑制作用達(dá)到最強(qiáng)，相較于 10μmol/L 的米非司酮一步縮短 TI、降低 IA、降低 RF。繼續(xù)增加米非司酮濃度至 40μmol/L，其對 RRD的抑制作用無明顯變化。結(jié)果提示米非司酮能夠降低 TI 和 IA，降低 RF，對 RRD具有抑制作用，且 20μmol/L 的米非司酮為抑制 RRDA 的最適濃度。為確保實(shí)驗(yàn)中所測得的各濃度孕酮受體拮抗劑米非司酮對腦片 RRDA 的作用達(dá)到充分穩(wěn)定狀態(tài)，，我們將在每個(gè)濃度的米非司酮灌流第 7min 和第 10min 時(shí)測RRDA 并與前一個(gè)濃度第 10min 的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較（此數(shù)據(jù)為 100%）。如若同一濃米非司酮在灌流第 7min 和第 10min 時(shí) RRDA 數(shù)據(jù)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而與前一個(gè)濃
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2624549