發(fā)布時(shí)間：2020-04-08 16:20

【摘要】： 前言 白血病是小兒時(shí)期最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著小兒的健康和生命。隨著化療方案的不斷改進(jìn)，白血病的完全緩解率和長(zhǎng)期生存率已大大提高，但耐藥的發(fā)生仍是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。其中多藥耐藥(MDR)是一個(gè)重要的機(jī)制，而藥物外排增多和滯留減少是MDR最常發(fā)生的現(xiàn)象。肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)是繼P-糖蛋白(P-gp)和多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)之后又發(fā)現(xiàn)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可以降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，而導(dǎo)致耐藥，，已有研究證明，LRP與白血病的耐藥有關(guān)。 LRP是從非小細(xì)胞肺癌中發(fā)現(xiàn)的一種非糖類(lèi)蛋白質(zhì)，分子量約為110KD，其cDNA序列包含一個(gè)2688個(gè)bp的開(kāi)放閱讀框架，編碼896個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，LRP基因位于人類(lèi)染色體16P~(11.2)，LRP可能作為人的主要穹窿蛋白(MVP)參與細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，最終導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物濃度下降，而產(chǎn)生耐藥。有研究認(rèn)為，檢測(cè)LRP基因的表達(dá)情況，可以預(yù)測(cè)耐藥的發(fā)生，可以作為預(yù)測(cè)預(yù)后的指標(biāo)之一。 本實(shí)驗(yàn)采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)的方法，對(duì)43例急性白血病患兒共計(jì)52份標(biāo)本進(jìn)行LRP基因表達(dá)水平的檢測(cè)，以進(jìn)一步探討兒童白血病的耐藥機(jī)制及與臨床分期，化療反應(yīng)和預(yù)后的關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)材料 一、研究對(duì)象 1．病例組：1999年9月－以D1年5月期間在我院兒科住院患 者 43例，經(jīng) MIC分型確診為 ALL者 28例，AML者 15例；男 29 例，女14例，年齡3刁 歲，平均8歲。共采集標(biāo)本52例次，分為 初發(fā)組24例，完全緩解組19例，復(fù)發(fā)組9例。初發(fā)組中ALL 15 例，其中 B－ALL 9例，T－ALL 6例；AML 9例。復(fù)發(fā)組中＊例為 第二次復(fù)發(fā)病例＊例先后得到初發(fā)和復(fù)發(fā)兩份標(biāo)本，二例先后得 到完全緩解和復(fù)發(fā)兩份標(biāo)本。初發(fā)組中5例經(jīng)系統(tǒng)治療達(dá)完全緩 解，他們的緩解期標(biāo)本均人組完全緩解組。 2．對(duì)照組J 例為ITP患兒骨髓。其中男6例，女4例，年齡 4－12歲，平均8歲。 二＼實(shí)驗(yàn)儀器和試劑 主要試劑及實(shí)驗(yàn)儀器：FICOll淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)于上海試劑 二廠；Trizof購(gòu)于 GIBCO BRL USA；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、TaqDNA聚合 酶購(gòu)于上海 Sangon公司；引物由上海 Sangon公司合成；DNA marker：DL上000購(gòu)于大連TAKARA公司。 實(shí)驗(yàn)方法 一、標(biāo)本采集：于化療前采集2毫升骨髓，并用肝素抗凝。 二、骨髓中分離單個(gè)核細(xì)胞：采用FICOll淋巴細(xì)胞分離液分離 單個(gè)核細(xì)胞。 三、RT—PCR方法檢測(cè)LRP基因的表達(dá)：按照TriZOI試劑盒 說(shuō)明提取總RNA，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明合成CDNA第一鏈后進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。LRP和p。MG基因的CDNA引物序列分別為： Ly上游引物：5’GTC’ITC－CTGAGCTGGTGTCG 3’ LRP下游5！物：5’C皿GCC刪皿GGG0CCn 3’ p。MG上游引物：5’ACCCCCAC…AAGAM 3’ p。MG下游引物：5’ATC’trr’nAithCCTCCAltAI’n 3’ ·2· LIp擴(kuò)增片段為240hP，p。MG擴(kuò)增片段為120hP。 以L礬 p。MG的比值作為L(zhǎng)RPmmA的相對(duì)表達(dá)水平。 四、統(tǒng)計(jì)處理：采用F分析人檢驗(yàn)，配對(duì)t檢驗(yàn)，秩和檢驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一、初發(fā)組、復(fù)發(fā)組、完全緩解組和對(duì)照組W基因的表達(dá) LRP基因表達(dá)水平：初發(fā)組N．65。0．22入復(fù)發(fā)組O．14。 0．24入完全緩解組N．40 t 0．14X對(duì)照組①．41。0．11八初發(fā)組 和復(fù)發(fā)組分別與對(duì)照組相比，差異均非常顯著門(mén)均＜o(jì)．01人完 全緩解組和對(duì)照組的差異不顯著（P＞0．05人LRP基因在復(fù)發(fā)組 的表達(dá)水平明顯高于初發(fā)組和完全緩解組汀均＜o(jì)．01人初發(fā)組 和完全緩解組之間差異也非常顯著K＜0．01人 h人RP基因的表達(dá)與＊［C分型的關(guān)系 初發(fā)Au組（O．62 L O．25），初發(fā)AML組（0．7O L O．15），兩者 差異不顯著（P＞0．05）。B－＊u組（0．＊ 土O．25），T－＊u組 （O．＊。0．＊），兩者差異顯著（P＜0．05）。 三上RP基因表達(dá)與臨床特征和臨床分型的關(guān)系 初發(fā)ALL組Lgy基因表達(dá)水平在不同性別、年齡、外周血 白細(xì)胞計(jì)數(shù)以及不同的臨床分型（高危、低危）之間差異均不顯著 ＊均＞0．05）。 卞 論 隨著人們對(duì)LRP研究的深人，I．lu在多種腫瘤上過(guò)度表達(dá)而 導(dǎo)致MDR現(xiàn)象也引起人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注。此前研究證明人RP 廣泛分布在正常組織和腫瘤組織中，但在正常組織中其表達(dá)水平 較低，腫瘤組織中LRP表達(dá)水平較高，化療后耐藥的腫瘤組織表 ·3· 達(dá)水平更高。SchePer等研究認(rèn)為L(zhǎng)Ip是一個(gè)高度保守的主穹隆 蛋白（Maior Vault Protein，MVP入與細(xì)胞的核漿轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)，并引起 腫瘤細(xì)胞的 MDR。 我們的研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組LRP基因表達(dá)水平較低，而在白血 病初發(fā)組和復(fù)發(fā)組中表達(dá)較高，與對(duì)照組相比，差異均顯著u均 ＜0．01八復(fù)發(fā)組＊RP基因表達(dá)水平又明顯高于初發(fā)組（P＜ 0．05h而完全緩解組與對(duì)照組表達(dá)水平無(wú)明顯差異。提示小兒 白血病的臨床耐藥與LRP基因表達(dá)?
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類(lèi)號(hào)】：R733.71

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2619562