【摘要】： 前言 白血病是小兒時期最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著小兒的健康和生命。隨著化療方案的不斷改進，白血病的完全緩解率和長期生存率已大大提高，但耐藥的發(fā)生仍是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。其中多藥耐藥(MDR)是一個重要的機制，而藥物外排增多和滯留減少是MDR最常發(fā)生的現(xiàn)象。肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)是繼P-糖蛋白(P-gp)和多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)之后又發(fā)現(xiàn)的藥物轉(zhuǎn)運蛋白，可以降低細胞內(nèi)藥物濃度，而導(dǎo)致耐藥，，已有研究證明，LRP與白血病的耐藥有關(guān)。 LRP是從非小細胞肺癌中發(fā)現(xiàn)的一種非糖類蛋白質(zhì)，分子量約為110KD，其cDNA序列包含一個2688個bp的開放閱讀框架，編碼896個氨基酸的蛋白質(zhì)，LRP基因位于人類染色體16P~(11.2)，LRP可能作為人的主要穹窿蛋白(MVP)參與細胞內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)運過程，最終導(dǎo)致細胞內(nèi)藥物濃度下降，而產(chǎn)生耐藥。有研究認為，檢測LRP基因的表達情況，可以預(yù)測耐藥的發(fā)生，可以作為預(yù)測預(yù)后的指標之一。 本實驗采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)的方法，對43例急性白血病患兒共計52份標本進行LRP基因表達水平的檢測，以進一步探討兒童白血病的耐藥機制及與臨床分期，化療反應(yīng)和預(yù)后的關(guān)系。 實驗材料 一、研究對象 1．病例組：1999年9月－以D1年5月期間在我院兒科住院患 者 43例，經(jīng) MIC分型確診為 ALL者 28例，AML者 15例；男 29 例，女14例，年齡3刁 歲，平均8歲。共采集標本52例次，分為 初發(fā)組24例，完全緩解組19例，復(fù)發(fā)組9例。初發(fā)組中ALL 15 例，其中 B－ALL 9例，T－ALL 6例；AML 9例。復(fù)發(fā)組中＊例為 第二次復(fù)發(fā)病例＊例先后得到初發(fā)和復(fù)發(fā)兩份標本，二例先后得 到完全緩解和復(fù)發(fā)兩份標本。初發(fā)組中5例經(jīng)系統(tǒng)治療達完全緩 解，他們的緩解期標本均人組完全緩解組。 2．對照組J 例為ITP患兒骨髓。其中男6例，女4例，年齡 4－12歲，平均8歲。 二＼實驗儀器和試劑 主要試劑及實驗儀器：FICOll淋巴細胞分離液購于上海試劑 二廠；Trizof購于 GIBCO BRL USA；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、TaqDNA聚合 酶購于上海 Sangon公司；引物由上海 Sangon公司合成；DNA marker：DL上000購于大連TAKARA公司。 實驗方法 一、標本采集：于化療前采集2毫升骨髓，并用肝素抗凝。 二、骨髓中分離單個核細胞：采用FICOll淋巴細胞分離液分離 單個核細胞。 三、RT—PCR方法檢測LRP基因的表達：按照TriZOI試劑盒 說明提取總RNA，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明合成CDNA第一鏈后進行 PCR擴增。LRP和p。MG基因的CDNA引物序列分別為： Ly上游引物：5’GTC’ITC－CTGAGCTGGTGTCG 3’ LRP下游5！物：5’C皿GCC刪皿GGG0CCn 3’ p。MG上游引物：5’ACCCCCAC…AAGAM 3’ p。MG下游引物：5’ATC’trr’nAithCCTCCAltAI’n 3’ ·2· LIp擴增片段為240hP，p。MG擴增片段為120hP。 以L礬 p。MG的比值作為LRPmmA的相對表達水平。 四、統(tǒng)計處理：采用F分析人檢驗，配對t檢驗，秩和檢驗。 實驗結(jié)果 一、初發(fā)組、復(fù)發(fā)組、完全緩解組和對照組W基因的表達 LRP基因表達水平：初發(fā)組N．65。0．22入復(fù)發(fā)組O．14。 0．24入完全緩解組N．40 t 0．14X對照組①．41。0．11八初發(fā)組 和復(fù)發(fā)組分別與對照組相比，差異均非常顯著門均＜o．01人完 全緩解組和對照組的差異不顯著（P＞0．05人LRP基因在復(fù)發(fā)組 的表達水平明顯高于初發(fā)組和完全緩解組汀均＜o．01人初發(fā)組 和完全緩解組之間差異也非常顯著K＜0．01人 h人RP基因的表達與＊［C分型的關(guān)系 初發(fā)Au組（O．62 L O．25），初發(fā)AML組（0．7O L O．15），兩者 差異不顯著（P＞0．05）。B－＊u組（0．＊ 土O．25），T－＊u組 （O．＊。0．＊），兩者差異顯著（P＜0．05）。 三上RP基因表達與臨床特征和臨床分型的關(guān)系 初發(fā)ALL組Lgy基因表達水平在不同性別、年齡、外周血 白細胞計數(shù)以及不同的臨床分型（高危、低危）之間差異均不顯著 ＊均＞0．05）。 卞 論 隨著人們對LRP研究的深人，I．lu在多種腫瘤上過度表達而 導(dǎo)致MDR現(xiàn)象也引起人們越來越多的關(guān)注。此前研究證明人RP 廣泛分布在正常組織和腫瘤組織中，但在正常組織中其表達水平 較低，腫瘤組織中LRP表達水平較高，化療后耐藥的腫瘤組織表 ·3· 達水平更高。SchePer等研究認為LIp是一個高度保守的主穹隆 蛋白（Maior Vault Protein，MVP入與細胞的核漿轉(zhuǎn)運有關(guān)，并引起 腫瘤細胞的 MDR。 我們的研究發(fā)現(xiàn)，對照組LRP基因表達水平較低，而在白血 病初發(fā)組和復(fù)發(fā)組中表達較高，與對照組相比，差異均顯著u均 ＜0．01八復(fù)發(fā)組＊RP基因表達水平又明顯高于初發(fā)組（P＜ 0．05h而完全緩解組與對照組表達水平無明顯差異。提示小兒 白血病的臨床耐藥與LRP基因表達?
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R733.71

【共引文獻】

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本文編號：2619562