發(fā)布時(shí)間：2020-03-26 22:24

【摘要】：目的:利用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)誘導(dǎo)的炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)幼年大鼠模型,觀察鼠李糖乳桿菌GG株(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)治療后,IBD幼鼠結(jié)腸組織Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)的水平變化,探討益生菌對(duì)Th17細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。研究方法:選擇健康的4周鼠齡雄性Sprague-Dswley幼年大鼠共計(jì)36只,隨機(jī)分為4組,其中空白對(duì)照組、LGG對(duì)照組每組各8只,IBD組、IBD-LGG組每組各10只,所有小鼠禁食但不禁水24小時(shí):(1)空白對(duì)照組:第1天予0.9%生理鹽水灌腸,后予普通飼料喂養(yǎng),每日飲用水灌胃1次;(2)LGG對(duì)照組:第1天予0.9%生理鹽水灌腸,后予普通飼料喂養(yǎng),每日LGG灌胃1次;(3)IBD組:第1天予5%TNBS乙醇溶液灌腸,建造IBD模型,后予普通飼料喂養(yǎng),每日飲用水灌胃1次;(4)IBD-LGG組:第1天予5%TNBS乙醇溶液灌腸,建造IBD模型,后予普通飼料喂養(yǎng),每日LGG灌胃1次。造模后每天同一時(shí)間予每組幼鼠進(jìn)行稱重,觀察幼鼠一般狀態(tài)、大便性狀及隱血,依據(jù)Cooper評(píng)分進(jìn)行IBD疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分(Disease activity index,DAI)。于實(shí)驗(yàn)第7天處死4組幼鼠,留取結(jié)腸組織標(biāo)本,對(duì)組織進(jìn)行固定、石蠟包埋及切片。經(jīng)蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin,HE)染色后觀察黏膜損傷情況,采用免疫組化法檢測(cè)切片Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A的表達(dá)水平。結(jié)果:1、一般情況:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中空白對(duì)照組和LGG對(duì)照組幼鼠正常進(jìn)食,體毛光滑,大便性狀正常,便潛血均為陰性,IBD組、IBD-LGG組幼鼠出現(xiàn)飲食水減少,反應(yīng)遲鈍,精神萎靡,皮毛松散,無(wú)光澤等,隨著治療至3-4天,與IBD組相比,IBD-LGG組在便性狀及隱血方面明顯緩解。2、體重情況:7天后各組幼鼠體重均有增長(zhǎng),但各組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3、DAI評(píng)分:IBD組和IBD-LGG組前3天DAI評(píng)分無(wú)明顯差異,于第4天IBD組DAI評(píng)分均明顯高于IBD-LGG組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、大體組織及病理:對(duì)照組兩組幼鼠結(jié)腸大體組織及病理切片未見(jiàn)明顯異常。IBD-LGG組和IBD組幼鼠則顯示腸道炎癥改變明顯,大體組織可見(jiàn)明顯充血、水腫,甚至糜爛及潰瘍,鏡下可見(jiàn)腸黏膜大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),部分可見(jiàn)炎性肉芽腫形成,腺體正常結(jié)構(gòu)遭到破壞,但I(xiàn)BD-LGG組較IBD組減輕。5、IL-17A細(xì)胞因子的表達(dá)水平:IBD-LGG組結(jié)腸組織的陽(yáng)性細(xì)胞較IBD組明顯減少�？瞻讓�(duì)照組及LGG對(duì)照組結(jié)腸組織偶可見(jiàn)少許陽(yáng)性細(xì)胞。與空白對(duì)照組相比,LGG對(duì)照組IL-17A含量明顯降低(P0.05),IBD組IL-17A的含量顯著升高(P0.05),且IBD-LGG組IL-17A水平較IBD組降低,存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:益生菌治療可減輕IBD幼年大鼠癥狀及腸道炎癥,其機(jī)制可能與抑制Th17細(xì)胞的細(xì)胞因子IL-17A的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

體重增長(zhǎng)良好，一般活動(dòng)正常，反應(yīng)靈敏，體毛光滑，大便為正常干燥顆粒狀，便潛血均為陰性（圖1至圖4）。采用TNBS造模誘發(fā)IBD的幼鼠臨床表現(xiàn)：IBD組、IBD-LGG組在TNBS灌腸后即出現(xiàn)腹瀉及排粘液血便表現(xiàn)，而后出現(xiàn)體重增長(zhǎng)緩慢甚至下降，飲食水減少，反應(yīng)遲鈍，精神萎靡，體毛松散，無(wú)光澤等（圖5至圖8）。隨著治療至3-4天，IBD-LGG組較IBD組幼鼠在大便性狀、便血情況及精神狀態(tài)等方面明顯好轉(zhuǎn)（見(jiàn)圖9至圖12）。圖 1 空白對(duì)照組一般狀態(tài)（1d） 圖 2 LGG 對(duì)照組一般狀態(tài)（1d）圖 3 空白對(duì)照組便性狀（1d） 圖 4 LGG 對(duì)照組便性狀（1d）

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果1 各組大鼠的大體實(shí)驗(yàn)觀察空白對(duì)照組、LGG對(duì)照組幼鼠于實(shí)驗(yàn)期間正常進(jìn)食水，體重增長(zhǎng)良好，，活動(dòng)正常，反應(yīng)靈敏，體毛光滑，大便為正常干燥顆粒狀，便潛血均為陰性（圖4）。采用TNBS造模誘發(fā)IBD的幼鼠臨床表現(xiàn)：IBD組、IBD-LGG組在TN腸后即出現(xiàn)腹瀉及排粘液血便表現(xiàn)，而后出現(xiàn)體重增長(zhǎng)緩慢甚至下降，飲食少，反應(yīng)遲鈍，精神萎靡，體毛松散，無(wú)光澤等（圖5至圖8）。隨著治療至，IBD-LGG組較IBD組幼鼠在大便性狀、便血情況及精神狀態(tài)等方面明顯好見(jiàn)圖9至圖12）。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R725.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2602041