【摘要】：目的:利用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)誘導(dǎo)的炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)幼年大鼠模型,觀察鼠李糖乳桿菌GG株(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)治療后,IBD幼鼠結(jié)腸組織Th17細胞相關(guān)細胞因子白細胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)的水平變化,探討益生菌對Th17細胞的調(diào)節(jié)作用。研究方法:選擇健康的4周鼠齡雄性Sprague-Dswley幼年大鼠共計36只,隨機分為4組,其中空白對照組、LGG對照組每組各8只,IBD組、IBD-LGG組每組各10只,所有小鼠禁食但不禁水24小時:(1)空白對照組:第1天予0.9%生理鹽水灌腸,后予普通飼料喂養(yǎng),每日飲用水灌胃1次;(2)LGG對照組:第1天予0.9%生理鹽水灌腸,后予普通飼料喂養(yǎng),每日LGG灌胃1次;(3)IBD組:第1天予5%TNBS乙醇溶液灌腸,建造IBD模型,后予普通飼料喂養(yǎng),每日飲用水灌胃1次;(4)IBD-LGG組:第1天予5%TNBS乙醇溶液灌腸,建造IBD模型,后予普通飼料喂養(yǎng),每日LGG灌胃1次。造模后每天同一時間予每組幼鼠進行稱重,觀察幼鼠一般狀態(tài)、大便性狀及隱血,依據(jù)Cooper評分進行IBD疾病活動指數(shù)評分(Disease activity index,DAI)。于實驗第7天處死4組幼鼠,留取結(jié)腸組織標(biāo)本,對組織進行固定、石蠟包埋及切片。經(jīng)蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin,HE)染色后觀察黏膜損傷情況,采用免疫組化法檢測切片Th17細胞相關(guān)細胞因子IL-17A的表達水平。結(jié)果:1、一般情況:實驗過程中空白對照組和LGG對照組幼鼠正常進食,體毛光滑,大便性狀正常,便潛血均為陰性,IBD組、IBD-LGG組幼鼠出現(xiàn)飲食水減少,反應(yīng)遲鈍,精神萎靡,皮毛松散,無光澤等,隨著治療至3-4天,與IBD組相比,IBD-LGG組在便性狀及隱血方面明顯緩解。2、體重情況:7天后各組幼鼠體重均有增長,但各組之間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3、DAI評分:IBD組和IBD-LGG組前3天DAI評分無明顯差異,于第4天IBD組DAI評分均明顯高于IBD-LGG組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、大體組織及病理:對照組兩組幼鼠結(jié)腸大體組織及病理切片未見明顯異常。IBD-LGG組和IBD組幼鼠則顯示腸道炎癥改變明顯,大體組織可見明顯充血、水腫,甚至糜爛及潰瘍,鏡下可見腸黏膜大量炎癥細胞浸潤,部分可見炎性肉芽腫形成,腺體正常結(jié)構(gòu)遭到破壞,但IBD-LGG組較IBD組減輕。5、IL-17A細胞因子的表達水平:IBD-LGG組結(jié)腸組織的陽性細胞較IBD組明顯減少�？瞻讓φ战M及LGG對照組結(jié)腸組織偶可見少許陽性細胞。與空白對照組相比,LGG對照組IL-17A含量明顯降低(P0.05),IBD組IL-17A的含量顯著升高(P0.05),且IBD-LGG組IL-17A水平較IBD組降低,存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:益生菌治療可減輕IBD幼年大鼠癥狀及腸道炎癥,其機制可能與抑制Th17細胞的細胞因子IL-17A的表達有關(guān)。
【圖文】：

體重增長良好，一般活動正常，反應(yīng)靈敏，體毛光滑，大便為正常干燥顆粒狀，便潛血均為陰性（圖1至圖4）。采用TNBS造模誘發(fā)IBD的幼鼠臨床表現(xiàn)：IBD組、IBD-LGG組在TNBS灌腸后即出現(xiàn)腹瀉及排粘液血便表現(xiàn)，而后出現(xiàn)體重增長緩慢甚至下降，飲食水減少，反應(yīng)遲鈍，精神萎靡，體毛松散，無光澤等（圖5至圖8）。隨著治療至3-4天，IBD-LGG組較IBD組幼鼠在大便性狀、便血情況及精神狀態(tài)等方面明顯好轉(zhuǎn)（見圖9至圖12）。圖 1 空白對照組一般狀態(tài)（1d） 圖 2 LGG 對照組一般狀態(tài)（1d）圖 3 空白對照組便性狀（1d） 圖 4 LGG 對照組便性狀（1d）

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果1 各組大鼠的大體實驗觀察空白對照組、LGG對照組幼鼠于實驗期間正常進食水，體重增長良好，，活動正常，反應(yīng)靈敏，體毛光滑，大便為正常干燥顆粒狀，便潛血均為陰性（圖4）。采用TNBS造模誘發(fā)IBD的幼鼠臨床表現(xiàn)：IBD組、IBD-LGG組在TN腸后即出現(xiàn)腹瀉及排粘液血便表現(xiàn)，而后出現(xiàn)體重增長緩慢甚至下降，飲食少，反應(yīng)遲鈍，精神萎靡，體毛松散，無光澤等（圖5至圖8）。隨著治療至，IBD-LGG組較IBD組幼鼠在大便性狀、便血情況及精神狀態(tài)等方面明顯好見圖9至圖12）。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R725.7

【參考文獻】

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本文編號：2602041