【摘要】：目的：新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)嚴重危害了新生兒生命健康，是我國兒童致殘的重要原因。骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)可分泌多種生長因子及神經(jīng)營養(yǎng)因子，且具有向神經(jīng)細胞分化的潛能，故期望通過移植并定向誘導MSCs分化為神經(jīng)細胞而實現(xiàn)HIE后腦功能的康復，減少后遺癥的發(fā)生。目前研究結(jié)果表明：經(jīng)腦外系統(tǒng)注射的MSCs可以遷入腦實質(zhì)并有向神經(jīng)細胞分化的趨勢，但針對HIE的研究尚不充分。本實驗旨在研究經(jīng)腹腔注射的MSCs能否透過新生大鼠血腦屏障進入腦實質(zhì)，MSCs在腦組織的分布特點及分化特性，并觀察新生大鼠HIE對其透過率及分化有無影響。 方法：采用全骨髓貼壁篩選法體外擴增幼年Wistar大鼠MSCs，移植前加入5-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)連續(xù)標記MSCs 72h。Rice法建立新生Wistar大鼠HIE模型，，模型建立后2h經(jīng)腹腔注射4×10~6 MSCs細胞懸液0.5ml(n=8)；對照組(n=8)采用同齡正常Wistar大鼠腹腔注射相同劑量MSCs。移植后14天取大腦作冰凍切片，SP免疫組化DAB顯色檢測并計數(shù)進入腦組織的MSCs，觀察其主要分布特點；免疫熒光雙標記法分析進入腦實質(zhì)的MSCs是否表達神經(jīng)細胞分 重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文 化抗原。 結(jié)果:細胞移植后14天，SP免疫組化法在腦實質(zhì)檢測到MSCs， 細胞計數(shù)HIE組為3626士461，正常組為24巧士226，兩組差別有顯著 性(t=6.68，尸0.05);HIE組右側(cè)大腦半球(缺血側(cè))的MSCs為 1904士267，左側(cè)腦組織MSCs為1723士204，配對t檢驗有顯著性差 異(t二4.47，PO.05);對照組右側(cè)及左側(cè)大腦半球MSCs計數(shù)分別為 1193士127和1222士212，無顯著性差別(t=0.31，P0.05)。HIE組細 胞分布更廣，并有局灶性聚集現(xiàn)象。免疫熒光雙標記法觀察到少量 MSCs表達神經(jīng)前體細胞標志物一巢蛋白(Nestin)，未檢測到神經(jīng)元特 異性烯醇化酶(NSE)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GEAP)的表達。 結(jié)論:1.MSCs可以透過血腦屏障進入腦實質(zhì)。2.新生鼠HIE 能增加MSCs透過率，促進其在腦組織內(nèi)遷移聚集。3.移植入腦內(nèi)的 MSCsl4天內(nèi)未能分化為成熟神經(jīng)元和星型膠質(zhì)細胞。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

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本文編號：2596245