【摘要】：目的:研究?jī)和撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMSC)在體外對(duì)T 淋巴細(xì)胞和造血干細(xì)胞的作用及移植治療造血損傷的可行性。 方法:收集正常兒童骨髓單個(gè)核細(xì)胞貼壁培養(yǎng),取第三代后的細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)表型;將其按1.0×10~3、1.0×10~4分別與活化T 淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),通過(guò)3H-TdR摻入,β液閃計(jì)數(shù),分析其對(duì)T 淋巴細(xì)胞增殖的影響;分別用1.0×10~3、1.0×10~4、1.0×105 個(gè)BMSC 培養(yǎng)后的上清液在24 孔趨化板中對(duì)T 淋巴細(xì)胞和臍血CD34+細(xì)胞進(jìn)行趨化;分別用1.0×103、1.0×104BMSC 作為飼養(yǎng)層,建立臍血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)體系,觀察其對(duì)造血干/祖細(xì)胞的數(shù)量及CFU-GM、CFU-E、CFU-GEMM 集落的擴(kuò)增效率;將SCID 小鼠經(jīng)60Co2.5Gy 照射后,建立造血損傷模型,將Hoechst33258體外標(biāo)記的BMSC 按不同數(shù)量聯(lián)合臍血單個(gè)核細(xì)胞移植給造血損傷的SCID 小鼠,觀察第21 天小鼠存活率及外周血白細(xì)胞和血小板恢復(fù)情況。 結(jié)果:(1)兒童BMSC 易培養(yǎng),流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析其高表達(dá)CD29、CD44、CD10~5,不表達(dá)CD19 、CD34、CD45;(2)在200ul 培養(yǎng)體系中1.0×10~3BMSC 促進(jìn)10×10~5T淋巴細(xì)胞增殖,而1.0×104BMSC 對(duì)1.0×105T 淋巴細(xì)胞增殖起抑制作用;(3)不同數(shù)量級(jí)BMSC 培養(yǎng)三天后的上清液對(duì)T 淋巴細(xì)胞和臍血CD_(34)~+細(xì)胞均有趨化作用,但以1.0×10~5的作用最強(qiáng); (4) 在200μl 培養(yǎng)體系中,以1.0×10~4BMSC 作為飼養(yǎng)層的培養(yǎng)體系對(duì)造血干祖細(xì)胞及集落擴(kuò)增效率較高,培養(yǎng)早期(第8 天) CD_(34)~+細(xì)胞擴(kuò)增明顯,培養(yǎng)后期(第15 天)則主要向定向祖細(xì)胞分化;(5)移植實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在相同的植活率下,較高數(shù)量(1.0×105)的BMSC 聯(lián)合臍血單個(gè)核細(xì)胞移植,可降低一個(gè)數(shù)量級(jí)的造血單個(gè)核細(xì)胞用量,提高小鼠存活率,加快外周血白細(xì)胞的回升。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R725.5

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本文編號(hào)：2595301