【摘要】：背景:川崎病(Kawasaki disease)是在兒童中最常見的一種自身免疫性血管炎綜合癥,病在世界各個(gè)范圍中均有報(bào)道。典型的臨床表現(xiàn)為持續(xù)性發(fā)熱,球結(jié)合膜充血,口唇潮紅,手足硬性腫脹和脫屑以及全身皮膚、粘膜、淋巴結(jié)炎等等。川崎病主要是免疫系統(tǒng)的異常活化和血管內(nèi)皮的廣泛損害,受累器官主要為全身的中小動(dòng)脈,尤其是心臟的冠狀動(dòng)脈,而且一部分患兒可有冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張及冠狀動(dòng)脈瘤的形成,有一部分患兒冠狀動(dòng)脈有發(fā)生狹窄的危險(xiǎn),甚至是造成心肌梗死;目前KD已經(jīng)超過風(fēng)濕熱(Rheumatic Fever,RF)成為兒童成年后心臟疾病的重要原因之一,也是成年后發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的重要原因之一。 全世界的醫(yī)學(xué)研究者們多年來一直不斷對(duì)川崎病進(jìn)行著研究,對(duì)這個(gè)病的病因,發(fā)病機(jī)制以及治療和相關(guān)的干預(yù)等多方面都進(jìn)了廣泛而深入的研究,但其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚,從臨床和流行病學(xué)等多方面進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),免疫反應(yīng)的異�；罨瘜�(dǎo)致的全身血管炎發(fā)生是一個(gè)重要的因素。目前已有報(bào)道發(fā)現(xiàn)多種病毒,細(xì)菌,及其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致免疫細(xì)胞產(chǎn)生多種炎癥細(xì)胞因子,如:TNF-α,L-6等在KD患兒急性期中表達(dá)增高,且IL-6在川崎病中表達(dá)特別高。但STAT3作為細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要分子,它是否參與IL-6介導(dǎo)的炎癥過程還不清楚,所以研究STAT3在川崎病中的作用機(jī)制,為探討川崎病中血管炎損傷提供科學(xué)依據(jù)。 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3 (signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)是一種存在于細(xì)胞漿,與酪氨酸磷酸化信號(hào)通道相偶聯(lián)的關(guān)鍵雙功能蛋白。它廣泛分布于機(jī)體不同類型的細(xì)胞和組織中。作為一條重要的介導(dǎo)細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)的通路[4],STAT3及活化形式pSTAT3具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、分化等一系列生物學(xué)活性[6],在腦、肝、心、胸腺等組織中均有表達(dá)。STAT3可由IL-6,PDGF,IGF-1,非受體酪氨酸激酶及G蛋白等的誘導(dǎo)而活化[7-9]。在前期研究已發(fā)現(xiàn)[10],有研究報(bào)道IL-6通過激活STAT3信號(hào)通路[11,12],參與多種炎癥遞質(zhì)的產(chǎn)生,如MMP-9、IL-17等調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫反應(yīng)[13]。我們推測川崎病患兒大量升高的IL-6通過介導(dǎo)STAT3的大量活化參與川崎病全身血管炎的發(fā)病過程,但有關(guān)STAT3與川崎病的炎癥關(guān)系還未見相關(guān)報(bào)道。 本文通過探討KD患兒急性期信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3的表達(dá)及意義,IL-6在STAT3信號(hào)通路中的影響,探討川崎病患兒的血管損傷機(jī)制。 目的: 1、臨床總結(jié)64例急性期川崎病患兒(KD)史資料了解川崎病的臨床特點(diǎn)和危險(xiǎn)性; 2、檢測PBMC STAT3、pSTAT3的蛋白表達(dá)、分布情況,了解急性期KD時(shí)STAT3活化、入核、傳到信號(hào)的情況; 3、QRT-PCR檢測川崎病(KD)、正常兒童及發(fā)熱患兒PBMC中STAT3 mRNA表達(dá)水平,及經(jīng)IL-6R抗體阻斷后KD患兒PBMC STAT3 mRNA表達(dá)水平,探討IL-6/STAT3信號(hào)通路是否在急性期KD時(shí)炎癥過程中起主導(dǎo)作用,為用IL-6R抗體作為治療川崎病提供一定科學(xué)依據(jù)。 4、通過對(duì)STAT3與相關(guān)臨床炎癥因子的相關(guān)性分析,初步探討STAT3與臨床炎癥表現(xiàn)的關(guān)系及意義。 方法: 1.總結(jié)64例急性期川崎病患兒臨床病史資料; 2. western blot技術(shù)分別檢測KD患兒急性期(IVIG前)、正常兒童外周血PBMC中STAT3,pSTAT3分布情況; 3.熒光定量PCR檢測KD患兒、發(fā)熱患兒、正常兒童STAT3基因mRNA的表達(dá); 4.用IL-6R抗體阻斷STAT3信號(hào)通路后,熒光定量PCR檢測KD患兒STAT3基因mRNA的表達(dá)。 結(jié)果:1、64例患兒中年齡在9月～5.7歲,平均年齡為(24. 17±15. 16)月,男有40例,女有24例。分為有冠狀動(dòng)脈損傷組(KDCAL+)和無冠狀動(dòng)脈損傷組(KDCAL-),其中,KDCAL+ 40例:平均熱程在7. 43±1. 76天,均有高熱,發(fā)熱超過5日,其中1例冠脈瘤患兒熱程有10天;楊梅舌38例(59.3%);雙側(cè)結(jié)膜充血48例(75.0%);皮疹40例(62.5%);唇紅、皸裂58例(90.6%);手足硬腫、指趾端、肛周脫屑有44例(68.7%);頸淋巴結(jié)腫大有47例(73.4%);冠狀動(dòng)脈有損害(CAL)者40例(62.5%),其中冠脈瘤1例;實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn)急性期患兒白細(xì)胞總數(shù)及粒細(xì)胞增高(15. 87±11. 56×109/L),C反應(yīng)蛋白增高(91.12±74. 36 mg/L),血沉明顯增快(50. 78±27.83 mm/1 h),1例冠脈瘤患兒血沉、CRP明顯升高;在IVIG治療后這些炎性指標(biāo)顯著下降(P0.05); 2、急性期KD患兒KD患兒PBMCs用IL-6刺激前、后總蛋白中STAT3,pSTAT3表達(dá)水平高于正常兒童;IL-6刺激前KD患兒核蛋白中STAT3,pSTAT3表達(dá)與正常兒童無明顯差異;IL-6刺激后KD患兒核蛋白STAT3,pSTAT3表達(dá)明顯高于正常兒童。 3、急性期KD患兒外周血PBMCs STAT3 mRNA的表達(dá)IL-6刺激前、后,KD患兒STAT3 mRNA水平(1.15±0.19,1.74±0.59)均高于正常兒童(0.56±0.37,1.03±0.51,)及感染發(fā)熱組患兒(1.07±0.21,1.45±0.32),(P0.05)。 4、用IL-6R抗體阻斷STAT3信號(hào)通路后急性期KD患兒STAT3 mRNA水平(0.99±0.15)顯著低于阻斷前后KD患兒(1.15±0.19,1.74±0.59)高于正常兒童(0.56±0.37,1.03±0.51),低于感染發(fā)熱組患兒(1.07±0.21,1.45±0.32),(P0.05)。 結(jié)論:1、本組KD病例臨床特征:64例急性期KD患兒中包括:心臟彩超中發(fā)現(xiàn)冠脈擴(kuò)張有40例,其中冠脈瘤1例;實(shí)驗(yàn)室檢查白細(xì)胞,血小板、血沉、CRP升高,一部分免疫球蛋白水平和心肌酶譜升高,其中冠狀動(dòng)脈瘤的患兒熱程明顯較長,炎性指標(biāo)明顯較高;但經(jīng)IVIG治療后,CRP、白細(xì)胞等炎性指標(biāo)均明顯下降,僅血小板無明顯下降部分部分輕度升高; 2、KD患兒STAT3,pSTAT3蛋白分布情況:急性期KD患兒外周血IL-6刺激前,后KD組患兒PBMCs總蛋白STAT3,pSTAT3表達(dá)較正常兒童高;IL-6刺激前,核蛋白STAT3,pSTAT3的表達(dá)與正常兒童無顯著差異,IL-6刺激后,核蛋白STAT3,pSTAT3表達(dá)較正常兒童高;推測在急性期KD患兒體內(nèi),川崎病患兒異�；罨难苎仔苑磻�(yīng)與STAT3信號(hào)通路的活化有關(guān),且IL-6對(duì)STAT3的活化和入核起到關(guān)鍵作用,從而起動(dòng)核內(nèi)相關(guān)轉(zhuǎn)錄基因,加劇炎癥反應(yīng)。 3、熒光定量檢測外周血PBMCs STAT3 mRNA的表達(dá):IL-6刺激前,后KD患兒PBMCs STAT3 mRNA表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組及感染發(fā)熱組(P均0.05)。IL-6刺激后,三組兒童PBMCs STAT3 mRNA的表達(dá)均高于各自未刺激組(P均0.05)且KD冠脈損傷患兒STAT3 mRNA表達(dá)水平均明顯高于冠脈未損傷患兒(P 0. 05);推測由于川崎病是一種與體內(nèi)免疫反應(yīng)異常活化有關(guān)的全身血管炎性疾病,所以患兒體內(nèi)異�；罨拿庖呒�(xì)胞特別是淋巴細(xì)胞的大量產(chǎn)生,引起IL-6的大量釋放,從而激活STAT3信號(hào)通路,導(dǎo)致多種炎性因子的釋放和級(jí)聯(lián)反應(yīng),促進(jìn)了KD的炎癥發(fā)展和血管損傷; 4、經(jīng)IL-6R阻斷劑阻斷以后,KD患兒STAT3表達(dá)水平顯著下降,略高于正常兒童;說明在川崎病發(fā)病機(jī)制中,IL-6在STAT3信號(hào)通路中的起主導(dǎo)作用,為IL-6R阻斷劑治療川崎病提供一定的理論依據(jù)。
【圖文】：

STAT3擴(kuò)增效率圖

GADPH擴(kuò)增效率圖
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R725.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉艷明;農(nóng)光民;李樹全;;哮喘小鼠氣道IL-6、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3的表達(dá)與活化及其與氣道炎癥的關(guān)系[J];臨床兒科雜志;2011年02期

2 陳白玉;李熙芹;陳曉利;;腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1β、-6水平與充血性心力衰竭關(guān)系的臨床研究[J];臨床內(nèi)科雜志;2006年03期

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5 沈文婷;蔣利萍;李淑娟;劉瑋;李欣;楊錫強(qiáng);;川崎病急性期患者Th17細(xì)胞檢測及意義[J];中國免疫學(xué)雜志;2010年05期

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本文編號(hào)：2592121