【摘要】：目的：建立同一病人神經(jīng)母細胞瘤(NB, neuroblastoma)細胞系來源的不同侵襲能力的細胞株,探討趨化因子受體CXCR4(趨化因子受體4)的表達水平對神經(jīng)母細胞瘤細胞株體外侵襲能力的影響。 方法：建立同一病人神經(jīng)母細胞瘤(NB, neuroblastoma)細胞系來源的不同侵襲能力的細胞株,探討趨化因子受體CXCR4(趨化因子受體4)的表達水平對神經(jīng)母細胞瘤細胞株體外侵襲能力的影響。 結(jié)果：成功建立了同一病人神經(jīng)母細胞瘤(NB, neuroblastoma)細胞系來源的不同侵襲能力的細胞株,CXCR4蛋白在篩選出的細胞株QDDQ-NM a中的表達明顯高于細胞株QDDQ-NM e, P0.01;CXCR4 mRNA在QDDQ-NM a中的表達明顯高于細胞株QDDQ-NM e, P0.01。QDDQ-NM a的體外趨化侵襲能力強于QDDQ-NM e,差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01,其與CXCR4蛋白和CXCR4 mRNA表達水平呈正相關(guān)。 結(jié)論：同一病人神經(jīng)母細胞瘤細胞系中的細胞具有異質(zhì)性,同一病人神經(jīng)母細胞瘤細胞系來源的不同細胞株侵襲能力不同,神經(jīng)母細胞瘤細胞株高度的體外侵襲能力與CXCR4的高表達呈高度相關(guān)性。 目的：構(gòu)建趨化因子受體4(CXCR4)小分子干擾RNA(siRNA)表達載體,研究其對體外神經(jīng)母細胞瘤侵襲能力的影響。 方法：選擇CXCR4高表達的神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞系,設(shè)計合成人CXCR4基因不同靶點的能編碼siRNA的3條雙鏈DNA序列,克隆到真核表達載體pSilencerTM neo中構(gòu)建siRNA表達載體,體外脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細胞,用半定量RT-PCR分析CXCR4基因mRNA的變化,用免疫組織化學(xué)和Western blot分析CXCR4蛋白表達,Transwell小室檢測細胞的侵襲能力。 結(jié)果：成功構(gòu)建了CXCR4-siRNA表達載體,轉(zhuǎn)染后半定量RT-PCR檢測神經(jīng)母細胞瘤細胞CXCR4mRNA豐度分別為siRl轉(zhuǎn)染組0.32±0.09、siR2轉(zhuǎn)染組0.35±0.13和siR3轉(zhuǎn)染組0.33±0.11,相對于對照組0.58±0.13表達下降(P0.05)；轉(zhuǎn)染后免疫組化檢測神經(jīng)母細胞瘤細胞CXCR4的蛋白表達分別為siRl轉(zhuǎn)染組75.98±4.81、siR2轉(zhuǎn)染組75.52±3.95和siR3轉(zhuǎn)染組76.35±6.51,相對于對照組92.196±3.89表達下降(P0.01)；轉(zhuǎn)染后Western blot檢測神經(jīng)母細胞瘤細胞CXCR4的蛋白表達分別為siR1轉(zhuǎn)染組0.1103±0.0023、siR2轉(zhuǎn)染組0.1203±0.0015和siR3轉(zhuǎn)染組0.1308±0.0018,相對于對照組0.4832±0.0012表達下降(P0.01)；且轉(zhuǎn)染后神經(jīng)母細胞瘤細胞侵襲能力較對照組53.11±3.72降低(P0.05),siRl轉(zhuǎn)染組為25.48±2.81、siR2轉(zhuǎn)染組為30.89±2.77、siR3轉(zhuǎn)染組為18.83±1.79。 結(jié)論：CXCR4-siRNA表達載體通過降低CXCR4基因的蛋白表達能顯著抑制神經(jīng)母細胞瘤細胞的體外侵襲能力,有望為神經(jīng)母細胞瘤的基因治療開辟新途徑。
【圖文】：

(圖4)6孔板中的單細胞克隆集落(200X)1cxCR4蛋白在5株單克隆細胞株中的表達(平均灰度澎DQ一NMa5.69QDDQ一眼bQDDQ一哪eQDDQ一NMdQDDQ一NM89·7955.2一80·1170.8

3.CXCR4mRNA的表達 CXCR4mRNA在5株單克隆細胞株中的表達見表2，QDDQ一NMa和QDDQ一NMe有顯著性差別(圖11)。表 2CXCR4InRNA在5株單克隆細胞株中的表達(條帶的相對值)QDDQ一咖 aQDDQ一咖 bQDDQ一 NMeQDDQ一NMdQDDQ一NMe 2.55 2.09 2.072.02相對值2.34 2.232.21 2.25 2.11 2.362.252.192.231.91二 2.0622.0561.828 2.264 2.09QDDQ一NMa和QDDQ一NMQDDQ一NMd和QDDQ一NMe樣本均數(shù)的差別有非常顯著性統(tǒng)計學(xué)意義，e樣本均數(shù)的差別有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義，P<0 P(0.01:.05;其余各組樣木均數(shù)兩兩比較差別沒有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義，，P>0.05。…覆碳…含鉀.縣}，l盆藍晚(圖11)QDDQ一NMa和QDDQ一 NMeCXCR4mRNA表達1泳道為陰性對照組;2泳道為QDDQ一 NMaCXCR4mRNA表達;3泳道為QDDQ一NMe CXCR4mRNA表達;4，5泳道為內(nèi)參
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R739.4

【參考文獻】

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本文編號：2591988