【摘要】：研究背景 胎兒在宮內(nèi)遭遇不良代謝環(huán)境因素,可導致其出生體重異常及日后一系列成人疾病的發(fā)生,包括2型糖尿病、肥胖等。而在此過程中,可能涉及到調(diào)控胎兒生長發(fā)育關(guān)鍵基因甲基化修飾的改變,通過影響基因表達,進而影響新生兒出生體重。但是這些關(guān)鍵基因甲基化及表達水平在個體出生時是否發(fā)生改變,其與孕母代謝環(huán)境及新生兒出生體重又存在什么樣的關(guān)系,目前尚不明確,且此方面研究較少。因此,本研究試圖通過對臍血中這些基因甲基化及其表達水平的研究來探索其與孕母代謝環(huán)境及新生兒出生體重的關(guān)系,進而可為異常出生體重和代謝綜合征的早期預防提供理論依據(jù)。 目的 1.分析孕母代謝環(huán)境(孕前BMI、血脂血糖代謝等)與新生兒出生體重的關(guān)系； 2.分析脂肪細胞因子及胰島素樣生長因子水平與孕母代謝環(huán)境及新生兒出生體重的關(guān)系； 3.分析調(diào)控胎兒發(fā)育關(guān)鍵基因甲基化及表達水平與孕母代謝環(huán)境及新生兒出生體重的關(guān)系；方法 1.選取2010年1月1日到2011年6月30日在永康、湖州、慈溪、寧海、紹興、義烏、東陽、溫嶺婦幼保健院進行定期產(chǎn)檢并準備在該醫(yī)院分娩的孕晚期(孕28-37周)孕婦作為研究對象,按照納入與排除標準建立研究隊列。獲取其知情同意后,入選孕婦填寫孕期膳食營養(yǎng)及背景情況調(diào)查表并抽取空腹靜脈血,待分娩后由醫(yī)生填寫新生兒出生情況調(diào)查表,同時抽取臍靜脈血。最終符合納入與排除標準且資料完整的研究對象為3021例。抽取的孕母血及臍血樣本均進行C肽、胰島素(insulin)、糖化血紅蛋白(Glycosylated hemoglobin, HBA1c)、甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein cholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平的測定。根據(jù)新生兒出生胎齡和出生體重,分為小于胎齡(Small for gestational age, SGA)、適于胎齡兒(Appropriate for gestational age, AGA)、大于胎齡兒(Large for gestational age, LGA),分層隨機抽樣,共抽取302對孕母-新生兒進行血漿脂肪細胞因子、胰島素樣生長因子水平及關(guān)鍵基因mRNA表達水平的測定。分層隨機抽取49例新生兒進行臍血中關(guān)鍵基因甲基化水平的測定。孕母代謝環(huán)境主要包括：孕母孕前BMI、孕母血脂血糖代謝及血壓。 2.302對孕母血、臍血血漿中總脂聯(lián)素(Total-adiponectin, Total-ADPN)、高分子量脂聯(lián)素(HMW-adiponectin, HMW-ADPN)、瘦素(Leptin)、胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1, IGF-1)、胰島素樣生長因子-2(insulin-like growth factor-2, IGF-2)水平測定采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。 3.臍血中相關(guān)代謝基因mRNA的表達水平測定采用實時熒光定量(Real-timeRT-PCR)方法。目的基因如下：脂肪量和肥胖相關(guān)基因(fat mass and obesity associated gene, FTO)、瘦素(leptin, LEP)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisomeproliferator-activated receptor γ, PPARγ)、低密度脂蛋白受體(Low density lipoprotein receptor, LDLR)、IGF2。 4.臍血目的基因甲基化水平測定采用亞硫酸氫鹽測序法(bisulfite sequencing PCR, BSP)法,選擇LEP、IGF2、PPARγ、胰十二指腸同源盒(pancreaticand duodenal homeobox1, PDX1)為目的基因。 結(jié)果 1.孕母孕前BMI與新生兒出生體重呈正性相關(guān)；新生兒男孩中LGA的發(fā)生率明顯高于女孩；孕母血C肽、HBA1c、insulin、TG及臍血C肽、insulin水平與新生兒出生體重呈正性相關(guān),而孕母血HDL-C、TC及臍血TG水平是SGAAGALGA組,差異均具顯著性(p0.05)。校正混雜因素后,臍血C肽和TG水平以及孕母高齡、孕前BMI、新生兒性別與SGA獨立相關(guān)；孕母血HBA1c、HDL-C、 LDL-C、TG與臍血insulin水平、孕前BMI、新生兒性別與LGA獨立相關(guān)。 2.孕母血Total-ADPN水平是SGAAGALGA組,而臍血Total-ADPN、 IGF-1、Leptin, IGF-2水平是SGAAGALGA組,差異均具顯著性(p0.05)；孕母血IGF-1、Leptin、IGF-2及臍血IGF-1、leptin水平隨孕前BMI的增高而明顯上升,孕母血HWM-ADPN水平在孕母超重／肥胖組明顯升高,臍血HWM-ADPN水平在孕母消瘦組明顯下降；在糖耐量異常及糖尿病組孕母血HWM-ADPN水平明顯降低,而IGF-2水平明顯升高,Leptin水平在糖耐量異常組明顯升高。校正混雜因素后,孕母血Total-ADPN、Leptin、IGF-2以及臍血Leptin、IGF-2水平是SGA的獨立影響因素；孕母血Total-ADPN及臍血Leptin、IGF-1、IGF-2水平是影響LGA的獨立影響因素。 3.孕母血高TG組臍血PPAR-γ基因mRNA水平明顯高于正常組(p0.05); LEP基因oRNA表達水平在孕母高HDL-C組明顯下降(p0.05)；男孩臍血FTO、IGF2、 PPAR-γ基因mRNA表達水平明顯高于女孩(p0.05)。校正混雜因素后,IGF2.LDLR基因mRNA表達水平仍與SGA呈獨立相關(guān)。 4.男孩臍血中PDX1-DMR1、PPARγ-DMR1甲基化水平明顯低于女孩(p0.05)。結(jié)論 1.孕母孕前BMI18.5kg/m2及孕母高齡(35歲)均是SGA發(fā)生的獨立危險因素；孕母孕前BMI≥25kg/m2與新生兒男孩是LGA的獨立危險因素。臍血高C肽水平是SGA發(fā)生的獨立保護因素,而臍血高TG水平是SGA發(fā)生獨立危險因素；孕母血高HBA1c、TG水平及臍血高insulin水平是LGA發(fā)生的獨立危險因素,孕母血高HDL-C及低LDL-C水平是LGA發(fā)生的獨立保護因素。 2.與正常組相比,GDM組孕母血HMW-ADPN水平明顯降低,提示孕母血低HMW-ADPN水平可能參與孕母GDM中的胰島素抵抗；孕母血HMW-ADPN水平隨孕前BMI的增高而明顯降低,提示高BMI孕母體內(nèi)可能存在胰島素抵抗；孕母血高Total-ADPN水平、臍血低leptin、IGF-2水平是SGA發(fā)生的獨立危險因素,其中孕母血高Total-ADPN水平可在一定程度上預測SGA的發(fā)生。臍血高IGF-1、IGF-2.leptin水平是LGA發(fā)生的獨立危險因素,臍血高IGF-1及l(fā)eptin水平可在一定程度上預測LGA的發(fā)生。孕母血高Total-ADPN水平、臍血低leptin水平是LGA發(fā)生的獨立保護因素。 3.孕母血高TG組PPAR-γ基因mRNA表達水平明顯升高,提示PPAR-γ基因mRNA表達水平高可能是LGA發(fā)生的機制之一；臍血LEP基因mRNA表達在孕母高HDL-C組明顯下降,LEP低表達水平可能是LGA發(fā)生風險降低的其中一個介導機制；與女孩相比,男孩臍血FTO、IGF2、PPAR-γ基因mRNA表達水平明顯升高,提示這些基因表達水平高可能是男孩更易成為LGA的機制之一；臍血LDLR基因mRNA表達水平低和SGA發(fā)生呈獨立相關(guān),提示LDLR基因mRNA表達水平低可能是SGA導致血脂代謝紊亂的部分機制。 4.男孩臍血中PPARγ-DMR1甲基化水平明顯低于女孩,說明PPARγ-DMR1基因的表觀調(diào)控可能是男孩更易成為LGA的發(fā)生機制之一
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

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本文編號：2566705