【摘要】：目的：1.建立OVA致敏和激發(fā)的哮喘小鼠模型,觀察支氣管哮喘急性期、慢性期小鼠和正常小鼠肺組織病理變化；2.觀察支氣管哮喘急性期、慢性期小鼠與正常小鼠肺組織PPAR-γ的表達(dá)以及肺泡灌洗液中細(xì)胞分類、IL-13和VEGF水平的變化；3.探討PPAR-γ在支氣管哮喘氣道炎癥及氣道重塑中的作用。 方法：4～6周齡、18～22g健康清潔級雌性昆明小鼠30只（由大連醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供），隨機(jī)分為急性哮喘組（急性組，10只）、慢性哮喘組（慢性組，10只）、正常對照組（對照組，10只），以雞卵清蛋白（OVA）致敏和激發(fā)的方法建立哮喘模型：急性組、慢性組在實(shí)驗(yàn)第0、7、14天予20μg OVA＋150μlAL(OH)_3＋50μl NS(100mg/L)混懸液腹腔注射致敏；第27、28、29天，給予50μl OVA-NS(2g/L)滴鼻激發(fā)；急性組在第30天處死；慢性組在第31～59天每天予2%OVA霧化吸入；對照組予等量生理鹽水腹腔注射及霧化吸入，處置時(shí)間與B組相同；第60天處死慢性組及對照組。取肺組織病理切片HE染色觀察小鼠氣道炎癥、總氣管壁厚度（Wat/pbm）、氣管內(nèi)壁厚度（Wai/pbm）及氣道平滑肌厚度（Wam/pbm）；對支氣管肺泡灌洗液（BALF）進(jìn)行細(xì)胞分類；分別用生物素雙抗夾心酶聯(lián)免疫法測定白細(xì)胞介素-13（IL-13）及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的水平；采用免疫組織化學(xué)法測定過氧化物酶體增殖物激活受體γ（Peroxisome proliferators activatedreceptor-γ PPAR-γ）蛋白的表達(dá)。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1.哮喘小鼠模型成功建立的表現(xiàn)及比較：急性組、慢性組小鼠均出現(xiàn)煩躁不安，呼吸急促，擦鼻，打噴嚏，口唇尾部紫紺，活動頻繁，毛發(fā)豎起失去光澤，腹肌痙攣，大小便失禁等表現(xiàn)；慢性組表現(xiàn)的尤其顯著，更易驚，嚴(yán)重者呼吸節(jié)律不齊，俯伏不動，四肢癱軟；對照組未出現(xiàn)上述癥狀。 2.肺組織病理學(xué)觀察：急性、慢性組小鼠與對照組小鼠對比顯示肺臟表面腫脹，體積增大，切面可見滲出白色泡沫,肺組織切片HE染色示支氣管管腔狹窄，黏膜水腫，黏液腺增生，黏膜皺襞增多，肺泡膈增厚，水腫形狀不規(guī)則，肺泡腔融合擴(kuò)大。急性組哮喘支氣管黏膜、黏膜下層、平滑肌及血管周圍可見大量炎性細(xì)胞浸潤，呼吸道黏膜杯狀細(xì)胞增生明顯，膠原沉積明顯；慢性組哮喘則在急性期的病理基礎(chǔ)上出現(xiàn)氣道上皮下纖維化，基底膜增厚且不規(guī)則，支氣管平滑肌肥厚，新生血管形成，管壁增厚，出現(xiàn)氣道重塑。對照組小鼠氣管及肺泡結(jié)構(gòu)正常，，支氣管粘膜上皮完整，未見明顯炎癥細(xì)胞及氣道重塑改變。 3.氣道形態(tài)學(xué)分析：急、慢性組及對照組小鼠總氣管壁厚度（Wat/pbm）為9.64±1.36μm~2/μm、15.25±1.43μm~2/μm、5.59±1.41μm~2/μm，慢性組小鼠Wat/pbm較急性組及對照組明顯升高（P0.01）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，急性組小鼠Wat/pbm較對照組明顯升高（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；氣管內(nèi)壁厚度（Wai/pbm）分別為4.68±1.22μm~2/μm、9.49±1.19μm~2/μm、2.38±0.62μm~2/μm，慢性組小鼠Wai/pbm較急性組及對照組明顯升高（P0.01）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，急性組小鼠Wai/pbm較對照組明顯升高（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；氣道平滑肌厚度（Wam/pbm）厚度分別10.64±1.30μm~2/μm、15.67±2.02μm~2/μm、5.05±0.85μm~2/μm，慢性組小鼠Wam/pbm厚度較急性組及對照組明顯升高（P0.01）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，急性組小鼠Wam/pbm厚度較對照組明顯升高（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.PPAR-γ水平：急性組小鼠PPAR-γ陽性率為11.23±3.27，慢性組為13.05±0.82，兩組肺組織可見大量的PPAR-γ表達(dá)，主要位于氣道上皮、黏膜下、氣道周圍和肺泡區(qū)的細(xì)胞，且PPAR-γ的表達(dá)以胞漿為主；對照組小鼠PPAR-γ陽性率為7.63±0.74，在肺組織陽性表達(dá)較少。慢性組PPAR-γ水平明顯高于急性及對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；急性組PPAR-γ水平明顯高于對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5.小鼠支氣管肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞所占百分比（EOS%）：急性組小鼠EOS%為13.69±3.37%，慢性組小鼠為23.33±2.03%，對照組小鼠為2.80±0.65%，慢性組EOS%明顯高于急性組及對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；急性組細(xì)胞總數(shù)和EOS%明顯高于對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6.支氣管肺泡灌洗液IL-13水平：急性組小鼠為77.69±25.55ng/L，慢性組為246.14±15.77ng/L，對照組為32.24±9.61ng/L；慢性組IL-13水平明顯高于急性及對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；急性組IL-13水平明顯高于對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 7.支氣管肺泡液VEGF水平：急性組小鼠為40.45±3.76ng/L，慢性組為59.82±16.97ng/L，對照組為27.75±3.78ng/ml。慢性組VEGF水平明顯高于急性及對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；急性組VEGF水平明顯高于對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 8．慢性組：IL-13與VEGF水平呈正相關(guān)(r=0.944，P0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PPAR-γ與總氣管壁厚度呈正相關(guān)(r=0.863，P0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.哮喘小鼠模型建立成功，急性期、慢性期的病理變化符合哮喘的病理生理改變。 2. IL-13、VEGF及EOS在哮喘的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用，參與哮喘炎癥反應(yīng)及氣道重塑過程，并且IL-13、VEGF及EOS的水平能在一定程度上反應(yīng)哮喘病情的嚴(yán)重程度。 3. PPAR-γ參與哮喘氣道慢性炎癥及氣道重塑的全過程，與哮喘的嚴(yán)重程度有關(guān)。 4. PPAR-γ在支氣管哮喘中的表達(dá)與依賴Th2細(xì)胞的嗜酸性粒細(xì)胞、Th2細(xì)胞分泌的炎性因子IL-13及其相關(guān)的細(xì)胞因子VEGF的水平有關(guān)，提示PPAR-γ在哮喘的發(fā)生發(fā)展中的作用是多靶點(diǎn)的，為PPAR激動劑運(yùn)用于哮喘的臨床治療提供了實(shí)驗(yàn)室理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1 各組小鼠氣道壁各層標(biāo)化后比較四、各組小鼠 PPAR-γ 水平的比較結(jié)果各組小鼠 PPAR-γ 水平的比較結(jié)果顯示：急性、慢性兩組小鼠肺組織 PPAR-γ 表達(dá)，主要位于氣道上皮、黏膜下、氣道周圍和肺泡區(qū)的細(xì)-γ 的表達(dá)以胞漿為主；對照組小鼠在肺組織陽性表達(dá)較少（見附圖 7、組 PPAR-γ 水平明顯高于急性及對照組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義AR-γ 水平明顯高于對照組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表 2，表 2:各組小鼠的 PPAR-γ 水平的比較(x±s)別 例數(shù)（n） PPAR-γ性組性組照組10101011.23±3.27ab13.05±0.82abc7.63±0.74

、各組小鼠 PPAR-γ 水平的比較結(jié)果組小鼠 PPAR-γ 水平的比較結(jié)果顯示：急性、慢性兩組小鼠肺組織PAR-γ 表達(dá)，主要位于氣道上皮、黏膜下、氣道周圍和肺泡區(qū)的細(xì)γ 的表達(dá)以胞漿為主；對照組小鼠在肺組織陽性表達(dá)較少（見附圖 7、 PPAR-γ 水平明顯高于急性及對照組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義R-γ 水平明顯高于對照組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表 2，圖表 2:各組小鼠的 PPAR-γ 水平的比較(x±s) 例數(shù)（n） PPAR-γ性組性組照組10101011.23±3.27ab13.05±0.82abc7.63±0.7419.086照組比較，Pa<0.01;與急性組比較，Pc<0.01.
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R725.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2548310