【摘要】：神經管畸形是指在胚胎發(fā)育的早期,由于神經管的不閉合或者閉合不完全而引起的嚴重的出生缺陷,主要包括無腦兒、腦膨出、顱脊柱裂以及脊柱裂等。前者主要是頭部神經管不閉合,表現(xiàn)出嚴重腦發(fā)育不全、顱骨損傷等,這些患病兒多在孕期或者出生后很短時間內死亡。而大部分脊柱裂的患兒卻可以存活下來,但給家庭和社會帶來了嚴重的精神負擔和經濟壓力。神經管畸形在世界的平均發(fā)病率為1-2%o,而在我國的平均發(fā)病率是3‰,在部分地區(qū)其發(fā)病率高達8‰,在我國的出生缺陷中排名第二 神經管畸形是多因素疾病,它不僅受到遺傳因素的影響,還與環(huán)境因素有關。近年來,通過對神經管畸形小鼠的研究表明,平面細胞極化信號通路(Planar cell polarity, PCP)中的基因的敲除對神經管的閉合起到重要作用。目前發(fā)現(xiàn)的PCP信號通路的核心基因有：Frizzled (Fz)、Dishevelled (Dsh/Dvl)、Strabismus/Van Gogh (Stam/Vang)、Flamingo (Fmi)、Prickle (Pk)和Diego (Dgo)。本文選擇了和PCP信號通路相關的三個基因(CELSR1基因、FUZZY基因和WNT11基因)做為研究對象。采用的是病例-對照的研究方法,在課題組現(xiàn)有的163例神經管畸形致死性胎兒樣本中篩查病例中特有的突變,通過分子生物學、遺傳學以及模式動物的研究,來驗證這些突變與神經管畸形發(fā)生的關系。另外本課題從實驗室發(fā)現(xiàn)的人類神經管已知的Vangl基因的三個特有突變,研究其與神經管畸形發(fā)生的關系。 在163例神經管畸形的樣本中,我們共檢測到CELSR1的十個錯義突變：A1408T、N1884S、V1897I、C1898R、G1973D、L1995R、I2107V、P2385L、R2901H、 E2903Q。而通過SNaPshot分型的方法確定了五個特有的突變：A1408T、N1884S、 V1897I、G1973D、R2901H。而通過脊椎動物氨基酸序列保守性分析發(fā)現(xiàn),這五個特有的突變位點都并非保守,只有A1408T和G1973D這兩個位點在脊椎動物進化上十分保守。說明這幾個突變位點可能與人類的神經管畸形有關。 在163例神經管畸形樣本中,我們找到了一個WNT11的特有突變位點但沒有找到FUZZY的稀有突變位點。在WNT11基因中總共發(fā)現(xiàn)了三個突變：C.374GA、 C.408CTT、C.1037GT。其中C.408CT和C.1037GT是同義突變,C.374GA是錯義突變,通過對照樣本的測序,發(fā)現(xiàn)這個位點是神經管畸形樣本特有的。在FUZZY基因中,只發(fā)現(xiàn)了一個同義突變：C.1199CT,且這個同義突變在13例樣本中都有發(fā)現(xiàn)。這可能與我們神經管畸形樣本量有限有關。 在對VANGL基因的三個突變位點：G39S、N313S、S84F的研究中,我們成功的構建了含這三個突變位點的表達載體。我們把這三個突變位點分別構建在pCMV6-Myc載體和帶有綠色熒光標記的載體上。通過細胞生物學實驗,發(fā)現(xiàn)這三個突變位點對它編碼蛋白的磷酸化水平沒有太大的影響,但卻增加了蛋白的表達量。 對神經管畸形發(fā)生的遺傳因素研究有著重要的臨床和社會意義,希望我們的研究為這一重要課題的進展提供有用線索。
【學位授予單位】：陜西師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R748

【參考文獻】

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2 張艷萍;劉凱;武玉玲;;維甲酸致小鼠胚胎畸形發(fā)生過程中維甲酸受體α/β及β-catenin和caspase-3基因的表達變化 (英文)[J];生物化學與生物物理進展;2007年11期

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本文編號：2534269