發(fā)布時間：2019-08-26 20:10

【摘要】：研究目的：探討兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡(pediatric systemic lupus erythematosus, pSLE)患者基因組DNA甲基化水平在發(fā)病過程中的變化、LINE-1序列甲基化水平的變化及其與病情活動度、補(bǔ)體C3及血漿同型半胱氨酸的相關(guān)性。研究方法：一、對象為2010-2012年在我院風(fēng)濕免疫科確診的pSLE患兒。選取pSLE患兒外周血單個核細(xì)胞的DNA標(biāo)本為病例組,同期采集健康查體兒童DNA標(biāo)本為對照組。SLEDAI≥10分為疾病活動組,10分為相對靜止組；按年齡分為12歲和≥12歲組。取100ng DNA標(biāo)本,加入0.25U Benzonase核酸酶,0.3 mU磷酸二酯酶I和0.2 U堿磷酸酶,用Tris緩沖液控制pH值在7.9,37℃水解6小時。利用Agilent1200-6410B液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀和Agilent ZORBAX SB-AQ C18 (2.1×50 mm,3.5肛)色譜柱對水解后樣品分離定量。優(yōu)化方法在5 min內(nèi)完成一份樣品檢測,并行方法的日內(nèi)穩(wěn)定和日間穩(wěn)定性評價,證明方法穩(wěn)定可靠。實際樣品進(jìn)樣量為10此,檢測模式為MRM模式。測定5mdC和dG的峰面積比。以dG為內(nèi)標(biāo),用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算標(biāo)本中DNA總體甲基化水平。二、通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法(MALDI-TOF)聯(lián)合RNA堿基特異性剪切法(MassCLEAVE)測定外周血單個核細(xì)胞中LINE-1甲基化水平,以及應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法測定血漿總同型半胱氨酸(tHcy)水平。研究結(jié)果：一、病例組38例,男女比8:30,年齡4-18歲,對照組30例,男女比11：19,年齡8-18歲。病例組12歲16例,≥12歲22例；對照組12歲28例,≥12歲2例。SLEDAI≥10分12例,SLEDAI10分26例。病例組基因組DNA甲基化水平(5.89%±0.41%)低于對照組(6.75±0.79%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-5.613,P0.001)。病例組按12歲組與≥12歲組組間比較,其基因組DNA甲基化水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義,對照組依同樣方法分組比較,組間甲基化水平無明顯差異。分別比較兩組中男女間甲基化水平,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。SLEDAI10分和SLEDAI≥10分組分別與對照組比較,甲基化水平均存在差異(p0.001);SLEDAI10分和≥10分組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.993)。二、病例組59例,男女比16:43,年齡4-18歲,對照組47例,男女比16:31；年齡6-18歲。pSLE病例組及健康對照組的LINE-1甲基化水平分別為60.93%及62.88%,二者比較差異顯著(p=0.001)。病例組LINE-1甲基化水平與SLEDAI評分相關(guān)(r=-0.285,P=0.032)。病例組LINE-1甲基化水平與C3顯著相關(guān)(r=0.317,P=0.044)。低甲基化水平者pSLE發(fā)病風(fēng)險升高(AOR:14.5; 95% CI:2.8,75.6)。病例組血漿同型半胱氨酸水平顯著高于對照組,(分別為15. 11μmol/L及11.022μmol/L, P= 0.028), LINE-1甲基化與血漿同型半胱氨酸顯著相關(guān)(r=-0.4,P=0.013)。結(jié)論：pSLE患者基因組DNA甲基化水平降低,LINE-1序列甲基化水平降低,LINE-1甲基化水平與pSLE病情活動度及補(bǔ)體C3顯著相關(guān),與血漿同型半胱氨酸水平顯著相關(guān)。
【圖文】：

圖３所示，５ｍｄＣ的ＬＯＤ和逡逑ＬＯＱ分別為１ｘ１０－ｉ７Ｍ，，ＩｘｌＯ－ｉＳＭ

６０．０４％、６１．６７％、６２．８８％，Ｐ＝０．００１）。中重度活動狼瘡與緩解及輕度活動狼瘡ＬＩＮＥ－逡逑１甲基化水平相比，差異顯著（Ｐ＝０．０３）。（表４）評估位于ＬＩＮＥ－１的每一個坤Ｇ位逡逑點(diǎn)的甲基化水平，（圖２），不同ＣｐＧ位點(diǎn)甲基化水平不同，ＣｐＧ－５位點(diǎn)甲基化水平逡逑最低（２０．６３％），相反，位于５１尾端的ＣｐＧ－１１、ＣｐＧ－１２位點(diǎn)則甲基化水平最高逡逑（８５．５４％）。ＣｐＧ－ｌ，２，５位點(diǎn)甲基化水平明濕低于健康對照姐（Ｐ＜０．０５）。依據(jù)病情活逡逑動性分析，將ＬＩＮＥ－１上每一個ＣｐＧ位點(diǎn)的甲基化水平進(jìn)行比較，中重度活動狼瘡逡逑ＣｐＧ－ｌ，２，５甲基化水平顯著低于緩解及哲度活動狼瘡（分別Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。逡逑表４．不同疾病活動度病例組與對照組ＬＩＮＥ－１甲基化水平比較逡逑ｎ邐ＬＩＮＥ－１甲基化水平（％）邋Ｐ逡逑中重度活動邋ｐＳＬＥ邐２８邐６０．０４±２．６７邐０．００１＊逡逑緩解及輕度活動邋ｐＳＬＥ邐２８邐６１．６７±３．１３邐０．００１２逡逑病例組邐５６＊邐６０．８５巧．００邐０．００１３逡逑對照組邐４７邐化８８±２．７６逡逑１：中重度活動ｐＳＬＥ與對照組相比差異顯著逡逑２：緩解及容度活動ｐＳＬＥ與對照}D相比差異顯著逡逑３：病例組與對照組相比差異顯著逡逑＊３個病例無實驗結(jié)果逡逑２５逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R725.9

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7 徐酩;呂京o

本文編號：2529519