發(fā)布時(shí)間：2019-03-05 14:51

【摘要】：目的： 1.研究重組人促血小板生成素（recombinant human thrombopoietin,rhTPO）、粒細(xì)胞集落刺激因子（Granulocyte Colony-Stimulating Factor,G-CSF）在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后的神經(jīng)保護(hù)作用，并探討運(yùn)用rhTPO、G-CSF治療HIBD的可行性，揭示rhTPO、G-CSF可能的治療機(jī)制。 2.研究及比較rhTPO、G-CSF的神經(jīng)保護(hù)作用和副作用，為臨床上治療新生兒缺氧缺血性腦病尋找療效更為確切的新途徑及提供可能的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法： 250只7日齡新生SD大鼠(Sprague-Dawley rat)隨機(jī)分為：①假手術(shù)對照組(C組)；②TPO治療組(TPO組)；③G-CSF治療組(G-CSF組)；④缺氧缺血一組(HIBD1組)；⑤缺氧缺血二組(HIBD2組)共5組，各組樣本數(shù)均為50例。②③④⑤組大鼠用乙醚麻醉后兩端結(jié)扎左側(cè)頸總動脈并離斷，后置于缺氧艙2小時(shí)制備HIBD模型。①假手術(shù)對照組(C組)大鼠僅分離左側(cè)頸總動脈，不進(jìn)行結(jié)扎和缺氧。TPO組于造模成功后即刻給予rhTPO，按15U/10g腹腔注射一次性給藥；G-CSF組于造模成功后即刻給予G-CSF，按0.5μg/10g頸部皮下注射，每日一次，并連續(xù)5天給藥；HIBD1組于造模成功后立即參照TPO的給藥劑量和方式注射等量生理鹽水；HIBD2組于造模成功后立即參照G-CSF的給藥劑量和方式注射等量生理鹽水。于造模后1天、2天、5天、7天、10天、14天、21天取各組大鼠大腦，利用形態(tài)學(xué)、免疫組織化學(xué)等相關(guān)方法觀察、檢測大鼠腦組織病理改變以及對巢蛋白(Nestin)表達(dá)的影響。通過Image-Pro Plus6.0軟件在光學(xué)顯微鏡下統(tǒng)計(jì)大鼠腦組織切片上的Nestin陽性細(xì)胞數(shù)。各組大鼠于14、21、28、35日齡用誘發(fā)電位儀描繪大鼠腦干聽覺誘發(fā)電位(brainstem auditory evoked potentials, BAEP)波形。TPO組、HIBD1組、C組大鼠于造模后1天、7天、14天和21天時(shí)取外周血，進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)；G-CSF組、HIBD2組、C組大鼠于造模后1天、5天、14天和21天時(shí)取外周血，進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。 結(jié)果： 1.建模成功后，造模大鼠出現(xiàn)抖動抽搐、呼吸急促、平衡失調(diào)等不同程度的行為學(xué)異常。造模3天后HIBD1、HIBD2組大鼠左側(cè)大腦出現(xiàn)水腫、壞死灶；造模7天后左側(cè)大腦萎縮；造模14天后左側(cè)大腦萎縮明顯加重，HE染色可見大腦皮層有條索狀空洞、組織結(jié)構(gòu)紊亂。不同取樣時(shí)間點(diǎn)TPO、G-CSF組大鼠左側(cè)大腦也有類似改變，，但受損情況相對輕微許多，其大體結(jié)構(gòu)和組織形態(tài)更加接近假手術(shù)組大鼠。 2.TPO、G-CSF、HIBD1、HIBD2組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的腦質(zhì)量損傷％均大于同日齡C組大鼠(P0.05)；在14日齡時(shí)TPO組的腦質(zhì)量損傷％小于同日齡HIBD1組(P0.05)；G-CSF組在不同時(shí)間點(diǎn)的腦質(zhì)量損傷％均小于同日齡HIBD2組(P0.05)；在21日齡時(shí)TPO組的腦質(zhì)量損傷％大于G-CSF組(P0.05)。TPO、G-CSF、HIBD1、HIBD2組的腦質(zhì)量損傷％隨日齡增加而增大，且HIBD1、HIBD2組腦質(zhì)量損傷％隨日齡的增加趨勢分別較TPO、G-CSF組明顯。 3.用免疫組織化學(xué)法顯示各組大鼠大腦皮層Nestin陽性細(xì)胞的表達(dá)，TPO、G-CSF、HIBD1、HIBD2組大鼠在10、14、21日齡時(shí)Nestin陽性細(xì)胞數(shù)目均多于同日齡C組(P0.05)；在10、14、21日齡時(shí)TPO組與HIBD1組的Nestin陽性細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行比較無明顯差別；在10、14、21日齡時(shí)G-CSF組Nestin陽性細(xì)胞數(shù)目均多于同日齡HIBD2組(P0.05)；在10、14、21日齡時(shí)G-CSF組Nestin陽性細(xì)胞數(shù)目均多于同日齡TPO組(P0.05)；HIBD1組與HIBD2組大鼠在10、14、21日齡時(shí)Nestin陽性細(xì)胞數(shù)目無明顯差別。 4.大鼠腦干聽覺誘發(fā)電位的結(jié)果顯示，14、21、28日齡時(shí)TPO組大鼠各波波峰潛伏期(peak latency, PL)與C組大多無明顯差別(除21日齡的Ⅲ波，28日齡的Ⅱ波、Ⅲ波有延長外)，35日齡時(shí)TPO組Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ波的PL與C組比較延長；14日齡時(shí)G-CSF組各波PL與C組大多無明顯差別（除Ⅲ波的PL相比C組延長），21、28、35日齡時(shí)G-CSF組各波PL與C組比較延長（除21日齡的Ⅳ波、Ⅴ波，28日齡的Ⅴ波，35日齡的Ⅰ波以外）；14日齡時(shí)HIBD1、HIBD2組的Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ波的PL長于C組(P0.05)；21、28、35日齡時(shí)HIBD1、HIBD2組的各波（Ⅰ波至Ⅴ波）的PL均長于C組(P0.05)；14日齡時(shí)TPO組Ⅰ波、Ⅲ波和Ⅳ的PL均短于HIBD1組各對應(yīng)PL(P0.05)，G-CSF組Ⅰ波、Ⅳ波的PL均短于HIBD2組各對應(yīng)PL(P0.05)，21、28、35日齡時(shí)TPO、G-CSF組Ⅰ波至Ⅴ波均短于HIBD1、HIBD2組各對應(yīng)PL(P0.05)；28日齡時(shí)G-CSF組Ⅱ、Ⅳ波的PL分別長于TPO組各對應(yīng)各波PL(P0.05)；35日齡時(shí)TPO組Ⅳ波PL長于G-CSF組Ⅳ波PL(P0.05)。14、21、28、35日齡時(shí)TPO、G-CSF、HIBD1、HIBD2組大鼠的各波峰間潛伏期(inter-peak latency, IPL)大部分長于C組(P0.05)，其中TPO、G-CSF組各波PL大多短于HIBD1、HIBD2組(P0.05)；14日齡時(shí)TPO組Ⅰ~Ⅲ波IPL短于G-CSF組Ⅰ~Ⅲ波IPL(P0.05)；21日齡時(shí)G-CSF組的Ⅰ~Ⅴ波IPL長于TPO組Ⅰ~Ⅴ波IPL(P0.05)；28日齡時(shí)TPO組的Ⅲ~Ⅴ波、Ⅰ~Ⅴ波IPL分別長于G-CSF組的各對應(yīng)IPL(P0.05)，G-CSF組的Ⅰ~Ⅲ波IPL長于TPO組Ⅰ~Ⅲ波IPL(P0.05)；隨著大鼠日齡的增長，各組大鼠BAEP的PL和IPL均隨日齡的增長而縮短。 5.8日齡時(shí)TPO組血小板計(jì)數(shù)與同日齡HIBD1組、C組大鼠比較出現(xiàn)一過性升高(P0.05)；14、21、28日齡時(shí)TPO、HIBD1組大鼠血小板計(jì)數(shù)與同日齡C組大鼠的血小板計(jì)數(shù)均無明顯差別；8、14、21日齡時(shí)G-CSF組、HIBD2組大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)與同日齡C組大鼠比較出現(xiàn)一過性升高(P0.05)；28日齡時(shí)G-CSF組、HIBD2組大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)與同日齡C組大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)均無明顯差別。 結(jié)論： 1.在HIBD發(fā)生的早期及時(shí)應(yīng)用TPO能夠起到神經(jīng)保護(hù)的作用，TPO能明顯提高新生大鼠缺氧缺血后的腦功能，改善缺氧缺血新生大鼠的形態(tài)學(xué)指標(biāo)，有利于腦功能的發(fā)育。 2.在HIBD發(fā)生的早期及時(shí)應(yīng)用G-CSF能夠起到神經(jīng)保護(hù)的作用，其作用機(jī)制可能與動員及促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞增殖分化，減少神經(jīng)細(xì)胞的變性和壞死有關(guān)。 3.合理劑量應(yīng)用TPO、G-CSF治療HIBD未見明顯副作用。
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【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 夏文杰;項(xiàng)鵬;楊默;馮國培;羅廣平;張麗蓉;付涌水;汪傳喜;李樹濃;;血小板生成素thrombopoietin對神經(jīng)保護(hù)作用的體外研究[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2007年07期

2 陳惠金,周澤漢,周建德,周偉,吳圣楣;新生大鼠缺氧實(shí)驗(yàn)裝置的研制[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);1999年01期

3 王靜敏,董麗媛,郝翼中,陳連元,楊永弘;尼莫地平對新生大鼠缺氧缺血性腦病的防治作用[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

4 楊默,夏文杰,李桂霞,龐雅軒,戚其威,李志光,吳香玲,吳浩強(qiáng),馮國培,霍泰輝;中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)TPO受體的初步研究(英文)[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2004年04期

5 何斯純,林興會,周卓妍,周麗麗,李善民;大鼠腦干聽覺誘發(fā)電位和中潛伏期反應(yīng)的生后發(fā)育[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2001年02期

本文編號：2435026