【摘要】：目的：了解缺氧缺血性腦損傷（Hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型中松果體的損傷情況，了解凋亡、自噬及壞死相關(guān)蛋白的改變，初步探討E64d在HIBD后松果體損傷修復(fù)中的短期作用及可能機制。 方法：采用7日齡新生SD（Sprague Dawley）大鼠，根據(jù)改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。將新生大鼠隨機分為E64d干預(yù)組（E64d組）、不干預(yù)組（DMSO組）、假手術(shù)組（Sham組），并選取HIBD后2h、6h、12h、24h、48h五個時間點，通過Western blot法測定松果體Cleaved caspase-3、Beclin-1、Spectrin αⅡ蛋白濃度的變化；采用HE染色及免疫組織化學(xué)法觀察松果體組織Cleaved caspase-3、IL-21染色情況，從細胞層面了解松果體組織損傷情況并探討可能的機制。 結(jié)果：1、Western blot法提示：與Sham組比，DMSO組松果體細胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase-3在6h明顯升高，12h達到高峰，至少持續(xù)至24h，到48h開始下降（P0.05）；與DMSO組比，E64d組Cleaved caspase-3在6h、12h左右出現(xiàn)下降(P0.05)，但24h后已無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。免疫組化法提示：Cleaved caspase-3在間質(zhì)細胞及松果體細胞中均有表達，與Sham組比，DMSO組Cleaved caspase-3在2h即表達明顯增強，48h時仍高（P0.05）；與DMSO組比，E64d組2h表達Cleavedcaspase-3明顯下降(P0.05)，但48h已無作用（P0.05）。 2、與Sham組比，DMSO組自噬相關(guān)蛋白Beclin-1升高，在6h的時候出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異，24h達到高峰，至少持續(xù)至48h仍存在明顯升高(P0.05)；與DMSO組比，E64d組松果體組織表達Beclin-1在24h出現(xiàn)顯著下降（P0.05），其余時間點無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 3、與Sham組比，DMSO組松果體細胞質(zhì)膜骨架蛋白Spectrin αⅡ分解增多，除6h點外，各時間點上均有明顯升高，高峰在12h左右（P0.05）；與DMSO組比，，使用E64d在一定時間內(nèi)減少了細胞骨架的分解，保護了質(zhì)膜完整性，在12h、24h存在統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），但之后壞死仍在上升，48h已無明顯差異（P0.05）。 4、免疫組化顯示松果體組織細胞間質(zhì)中存在IL-21，2h三組之間無差別（P0.05），與Sham組比，DMSO組表達的IL-21在48h的時候明顯升高（P0.05）；與DMSO組比，E64d組松果體IL-21顯著下降（P0.05）。 結(jié)論：1、HIBD后松果體短期內(nèi)出現(xiàn)細胞損傷，表現(xiàn)為核溶解及碎裂，部分細胞分界模糊，并且牽涉到凋亡、自噬及壞死三種形式。 2、在本實驗中，腹腔注射E64d對HIBD后活體松果體有著直接的影響。對松果體凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase-3、細胞骨架蛋白Spectrin αⅡ影響較大，而對自噬相關(guān)蛋白Beclin-1的影響相對較小。該模型中，E64d早期能抑制凋亡，保護細胞質(zhì)膜完整性，但保護作用時間在24小時內(nèi)。E64d未能完全逆轉(zhuǎn)松果體組織的損傷進程。 3、HIBD后松果體損傷可能存在機體免疫機制參與，機體可能藉由局部組織IL-21的上調(diào)參與損傷進程，而E64d能明顯降低IL-21的表達。
[Abstract]:Objective: to investigate the changes of apoptosis, autophagy and necrotizing related proteins in the pineal gland in hypoxic-ischemic brain injury (Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD) model. To explore the short-term role and possible mechanism of E64d in the repair of pineal injury after HIBD. Methods: 7 day old neonatal SD (Sprague Dawley) rats were used to establish HIBD model according to the modified Rice-Vannucci method. Neonatal rats were randomly divided into four groups: E64d intervention group (E64d group), non-intervention group (DMSO group) and sham operation group (Sham group). Five time points were selected at 2 h, 6 h, 12 h, 24 h and 48 h after HIBD, and the pineal Cleaved caspase-3,Beclin-1, was measured by Western blot method. The change of Spectrin 偽 鈪

本文編號：2362091