發(fā)布時(shí)間：2018-11-10 14:27

【摘要】：第一部分癲癇患兒外周血多藥耐藥基因及P-糖蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)及意義 研究背景： 癲癇在兒童和青少年時(shí)期有較高的發(fā)病率，對(duì)兒童的生長(zhǎng)發(fā)育、生活和學(xué)習(xí)造成了很大的影響。癲癇治療仍以長(zhǎng)期口服抗癲癇藥物（AEDs）為主，大約30%的患兒治療無效呈難治性癲癇(RE)。多藥耐藥是臨床治療的難點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)多藥耐藥基因1（MDR1）及其表達(dá)產(chǎn)物P-糖蛋白（P-gp）的過度表達(dá)使AEDs進(jìn)入腦組織的能力下降，血藥濃度降低，進(jìn)而使藥物療效降低癲癇發(fā)作不能有效控制。目前關(guān)于MDR1和P-gp在評(píng)估兒童AEDs的療效、預(yù)測(cè)兒童難治性癲癇的研究較少。 目的： 研究癲癇患兒外周血多藥耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物P-糖蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，探討其與癲癇耐藥的關(guān)系及預(yù)測(cè)兒童抗癲癇藥物療效的價(jià)值。 方法： 選取2011年1月至2012年12月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診和病房就診的難治性癲癇患兒30例、初診癲癇患兒40例及健康體檢兒童30例，分別于入組前、治療后6、12和18個(gè)月，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）半定量法檢測(cè)外周血MDR1mRNA的表達(dá)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P-gp的表達(dá)，分析MDR1mRNA、P-gp表達(dá)及其表達(dá)水平與癲癇發(fā)作頻率和應(yīng)用AEDs抗癲癇療效的關(guān)系。 結(jié)果： （1）兒童外周血MDR1mRNA表達(dá)水平與P-gp表達(dá)高度正相關(guān)（r＝0.82，P＜0.05）。 （2）難治性癲癇組、初診癲癇組入組前，治療后6、12和18個(gè)月MDR1mRNA、P-gp表達(dá)較對(duì)照組均顯著增高（P＜0.01）；難治性癲癇組各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)MDR1mRNA、P-gp表達(dá)較初診癲癇組顯著增高（P＜0.01）；難治性癲癇組MDR1mRNA、P-gp表達(dá)治療18個(gè)月較入組前明顯增高（P＜0.01），治療12個(gè)月較入組前及治療6個(gè)月、治療18個(gè)月較治療6個(gè)月、12個(gè)月均增高（P＜0.05）；初診癲癇組各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)MDR1mRNA、P-gp的表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 （3）難治性癲癇組入組前MDR1mRNA、P-gp表達(dá)陽性19例中16例（84.2%）治療無效，表達(dá)陰性11例中3例（27.3%）無效，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；初診癲癇組入組前MDR1mRNA、P-gp表達(dá)陽性13例中9例（69.2%）轉(zhuǎn)化為難治性癲癇，表達(dá)陰性27例中2例（7.5%）轉(zhuǎn)化為難治性癲癇，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 （4）發(fā)作頻繁患兒MDR1mRNA、P-gp水平明顯高于發(fā)作較少患兒（P＜0.01）。 （5）使用4種AEDs患兒MDR1mRNA、P-gp水平明顯高于使用2種及3種AEDs（P＜0.01）。 結(jié)論： （1）癲癇患兒外周血MDR1mRNA、P-gp表達(dá)升高，難治性癲癇升高更明顯，可能是癲癇臨床耐藥的重要原因。 （2）外周血MDR1mRNA、P-gp可作為評(píng)估AEDs療效的客觀指標(biāo)，可預(yù)測(cè)難治性癲癇發(fā)生的可能。 （3）定時(shí)定量檢測(cè)癲癇患兒外周血MDR1mRNA、P-gp表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，可評(píng)估AEDs的療效，指導(dǎo)用藥，盡量減少難治性癲癇的發(fā)生。 第二部分常用抗癲癇藥對(duì)癲癇兒童外周血P-gp表達(dá)的影響 研究背景： 臨床多藥耐藥是癲癇治療的難點(diǎn)，目前研究認(rèn)為MDR1基因編碼的P-gp的過度表達(dá)與癲癇耐藥密切相關(guān)。其表達(dá)增高是否為先天耐藥亦或是癲癇發(fā)作或AEDs應(yīng)用誘導(dǎo)的結(jié)果，具體原因不清楚，且評(píng)估兒童AEDs療效的客觀指標(biāo)較少。 目的： 以50例初診癲癇患兒為研究對(duì)象，探討丙戊酸鈉、左乙拉西坦、奧卡西平對(duì)初診癲癇患兒外周血P-gp表達(dá)的影響及P-gp在預(yù)測(cè)兒童難治性癲癇的價(jià)值。 方法： 50例初診癲癇患兒根據(jù)治療方案分為丙戊酸鈉組（n=19）、左乙拉西坦組（n=16）和奧卡西平組（n=15），20例健康體檢兒童為對(duì)照組。分別于治療前、治療后6和12個(gè)月應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組兒童外周血P-gp的表達(dá)。分析P-gp表達(dá)及其表達(dá)水平與抗癲癇療效的關(guān)系。 結(jié)果: （1）丙戊酸鈉組、左乙拉西坦組和奧卡西平組治療前，治療后6和12個(gè)月P-gp表達(dá)較對(duì)照組均顯著增高（P＜0.01）；丙戊酸鈉組、左乙拉西坦組、奧卡西平組各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)P-gp水平組內(nèi)及組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。 （2）治療無效患兒外周血P-gp表達(dá)明顯高于治療有效和對(duì)照組患兒（P均＜0.01）；治療有效患兒和對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 （3）50例患兒治療前P-gp表達(dá)陽性15例中9例（69.2%）轉(zhuǎn)化為難治性癲癇，表達(dá)陰性35例中3例（7.5%）轉(zhuǎn)化為難治性癲癇，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論： （1）癲癇患兒外周血P-gp表達(dá)升高，難治性癲癇升高更明顯，可能是癲癇臨床耐藥的重要原因。 （2）外周血P-gp可作為評(píng)估AEDs療效的客觀指標(biāo)，可預(yù)測(cè)難治性癲癇發(fā)生的可能。 （3）丙戊酸鈉、左乙拉西坦和奧卡西平單藥治療不影響癲癇患兒外周血P-gp的表達(dá)，其表達(dá)增高可能是反復(fù)癇性發(fā)作或先天耐藥所致。 第三部分常用抗癲癇藥對(duì)大鼠體內(nèi)多藥耐藥基因及P-糖蛋白表達(dá)的影響 研究背景： 多藥耐藥基因1（MDR1）及其編碼產(chǎn)物P-糖蛋白（P-gp）在癲癇病灶的異常高表達(dá)被認(rèn)為是癲癇耐藥的重要機(jī)制，但其表達(dá)增高是先天遺傳獲得或是后天因素誘導(dǎo)所致，具體原因并不清楚。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為反復(fù)癲癇發(fā)作可誘導(dǎo)MDR1和P-gp表達(dá)增高，但對(duì)于AEDs是否會(huì)導(dǎo)致其表達(dá)增高仍存有爭(zhēng)議。近年研究發(fā)現(xiàn)癲癇患者除病變腦組織MDR1和P-gp表達(dá)增高外，其外周血表達(dá)亦明顯活躍，但二者是否具有相關(guān)性，外周血的表達(dá)能否代替腦組織，目前研究較少。 目的： 以氯化鋰-匹羅卡品誘發(fā)的慢性自發(fā)性癲癇大鼠及正常大鼠為研究對(duì)象，，建立長(zhǎng)期抗癲癇藥物治療動(dòng)物模型，探討常用抗癲癇藥物（AEDs）丙戊酸鈉（VPA）、奧卡西平（OXC）、左乙拉西坦（LEV）對(duì)大鼠外周血多藥耐藥基因1（MDR1）及腦組織P-糖蛋白（P-gp）表達(dá)的影響。 方法： 隨機(jī)將75只雄性4-5周SD大鼠分為氯化鋰-匹羅卡品誘發(fā)慢性癲癇模型組（43只）和對(duì)照組（32只），將造模成功后存活的32只大鼠根據(jù)使用AEDs的不同，隨機(jī)分為VPA治療（EP+VPA）組、OXC治療（EP+OXC）組、LEV治療（EP+LEV）及癲癇未治療（EP）組，每組動(dòng)物8只。對(duì)照組隨機(jī)分為正常對(duì)照（NS）組、VPA治療（NS+VPA）組、OXC治療（NS+OXC）組及LEV治療（NS+LEV）組，每組動(dòng)物8只。灌胃給藥4周，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）半定量法檢測(cè)外周血MDR1mRNA的表達(dá)、免疫組化Envision法檢測(cè)腦組織P-gp的表達(dá)。 結(jié)果： （1）大鼠外周血MDR1mRNA表達(dá)水平與腦組織P-gp表達(dá)高度正相關(guān)（r＝0.71，P＜0.05）。 （2）與正常對(duì)照組比較，EP組、EP+VPA組、EP+OXC組及EP+LEV組各組大鼠外周血MDR1mRNA、腦組織P-gp表達(dá)均顯著增高（P＜0.01）；NS+VPA組、NS+OXC組及NS+LEV組各組MDR1mRNA、P-gp表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 （3）與EP組比較，EP+VPA組、EP+OXC組及EP+LEV組各組大鼠外周血MDR1mRNA、腦組織P-gp表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論： （1）癲癇大鼠外周血MDR1mRNA、腦組織P-gp表達(dá)均升高，可能在癲癇耐藥的發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。 （2）癲癇大鼠外周血MDR1mRNA水平可以作為腦組織P-gp表達(dá)可靠的簡(jiǎn)易的參考指標(biāo)。 （3）單純AEDs VPA、OXC、LEV的使用不影響大鼠外周血MDR1mRNA、腦組織P-gp的表達(dá)，癲癇大鼠MDR1mRNA、P-gp的高表達(dá)可能是反復(fù)癲癇發(fā)作未控制的結(jié)果。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R742.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2322715