【摘要】：一、兒童B系急性淋巴細胞白血病CD133分子表達的意義 目的：探討急性淋巴細胞性白血�。ˋcute lymphoblastic leukemia ALL）患兒誘導(dǎo)化療前后骨髓單個核細胞CD133-1、CD133-2兩種分子的表達與臨床預(yù)后指標的相關(guān)性。 方法：選取初診ALL患兒59例，流式細胞術(shù)檢測其骨髓單個核細胞CD133-1和CD133-2的表達比例。 結(jié)果：1）初診B-ALL患兒CD133-1、CD133-2的表達與其年齡、性別、外周血白細胞計數(shù)、骨髓幼稚細胞比例、LDH水平、細胞遺傳學(xué)改變、融合基因、危險等級、完全緩解（CR）率及白細胞分化抗原CD38、CD58和CD66c等表達均無相關(guān)性（P0.05）（其中4例T-ALL因例數(shù)太少，無統(tǒng)計學(xué)意義）。2）55例B-ALL中，CD133-1表達陽性者21例（占38.2%），CD133-2表達陽性30例（占54.5%），二者表達陽性比例有顯著差異（P＜0.05）。3）B-ALL組CD133兩種亞型分子的表達與CD34表達雖然有顯著性差異（P＜0.05），但無相關(guān)性（P＞0.05）； 結(jié)論：1）初診B-ALL患兒CD133-1、CD133-2的表達與其性別、年齡、外周血白細胞計數(shù)、骨髓幼稚細胞比例、LDH水平、危險等級、融合基因、細胞遺傳學(xué)改變、CR率、CD38、CD58、及CD66c等表達均無相關(guān)性。2）B-ALL患兒CD133-2的表達比例明顯高于CD133-1。3）CD133表達與CD34表達無相關(guān)性。 二、兒童B系A(chǔ)LL來源的CD133+細胞生物學(xué)特性的初步研究 目的：體外分離兒童B-ALL原代白血病細胞CDl33+CD19+、CDl33+CD19-等亞群細胞，初步探討其體外生物學(xué)特性。 方法：選取4例CD133表達陽性的B-ALL患兒，經(jīng)免疫磁珠法（MACS）分選出CDl33+CD19+與CDl33+CD19-細胞，并用流式細胞儀對所分選細胞的CD133-2表達進行鑒定；分選后的CDl33+CD19+與CDl33+CD19-兩組亞群細胞，分別接種于含干細胞因子（SCF）、白細胞介素-3（IL-3）和白細胞介素-7（IL-7）的無血清培養(yǎng)基中，懸浮培養(yǎng)4-7周后，流式細胞術(shù)檢測培養(yǎng)細胞的CDl33、CD19及CD34的表達，RT-PCR檢測其融合基因的表達。同時以MACS分選的CD133-細胞作對照。 結(jié)果：1）MACS法分選B-ALL原代白血病CDl33+CD19+與CDl33+CD19-兩組亞群細胞，分選后細胞總回收數(shù)為（76.9±25.63）×106，較分選前細胞總數(shù)[（99.0±21.07）×106]低，細胞總回收率為77.7%,但二者之間無顯著差異（P0.05）；流式細胞術(shù)檢測所分選的細胞的CD133-2表達比例，，示兩者平均比例分別為(77.5±13.61）%、(76.83±5.58)％。2）CD133+CD19+、CD133+CD19-兩組亞群細胞在無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)平均5周（4-7周），細胞生長良好，可形成克隆細胞球；通過在4個不同時間點（d0、d14、d28、培養(yǎng)結(jié)束前）對兩組細胞進行計數(shù)，提示CD133+CD19+亞群細胞增殖速度更快，且培養(yǎng)至14天左右細胞即進入增殖高峰期，上述4個時間點細胞數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。而CD133-CD19+、CD133-CD19-兩組原代細胞亞群則未形成克隆細胞球，且細胞增殖緩慢，1周內(nèi)無明顯細胞增殖，以后逐漸凋亡。3）CD133+CD19+、CD133+CD19-兩組亞群細胞經(jīng)體外無血清培養(yǎng)4-7周后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，CDl33、CD19及CD34均無表達。4）2例初診時有融合基因表達異常（分別TEL/AML1、MLL/AF4表達陽性）的B-ALL患兒，分別經(jīng)無血清培養(yǎng)5、7周后融合基因仍表達陽性。 結(jié)論：1）免疫磁珠分選技術(shù)能夠成功分離純化兒童B-ALL中CD19+CDl33+與CDl33+CD19-兩組亞群細胞；2）含不同細胞因子的無血清培養(yǎng)基能有效支持B-ALL的CD133+細胞體外中、長期培養(yǎng)并維持其生物學(xué)特性；3）B-ALL中CDl33+較CDl33-細胞具有更強的體外增殖潛能,CD133-2+CD19+細胞亞群可能具有白血病干細胞特性。
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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R733.7

【參考文獻】

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本文編號：2298327